本文關(guān)鍵詞：多巴胺D1受體對(duì)RGC-5細(xì)胞氧化應(yīng)激的保護(hù)作用及其機(jī)理研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：研究多巴胺D1受體參與過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（Retinal ganglion cell5，RGC-5）的保護(hù)分子機(jī)制和信號(hào)途徑。方法：通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）和Western blot分別從分子和蛋白水平驗(yàn)證D1受體在RGC-5細(xì)胞中表達(dá)，，D1序列與T載體連接構(gòu)建D1受體重組質(zhì)粒，后經(jīng)限制性?xún)?nèi)切酶酶切和DNA測(cè)序鑒定確認(rèn)D1受體基因片段。用H_2O_2誘導(dǎo)氧化應(yīng)激后，經(jīng)MTT實(shí)驗(yàn)和PI染色分別測(cè)定細(xì)胞活性及細(xì)胞死亡情況。另外，利用Westernbolt測(cè)定絲裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinases，MAPKs）家族成員：細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases，ERK）、p38絲裂原活化蛋白激酶（p38mitogen-activated protein kinase，p38MAPK）和c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK），蛋白在氧化應(yīng)激后的表達(dá)量及加入D1受體激動(dòng)劑SKF83959后的蛋白表達(dá)改變，以及SKF83959與MAPKs家族蛋白的關(guān)系。結(jié)果：D1受體在RGC-5細(xì)胞中表達(dá)，并且D1受體基因序列與小鼠D1受體基因序列完全一致，說(shuō)明RGC-5細(xì)胞株來(lái)源于小鼠，而不是大鼠或者人。利用H_2O_2誘導(dǎo)應(yīng)激后，可以減弱ERK和p38MAPK蛋白的活化，而對(duì)JNK蛋白幾乎沒(méi)影響；而SKF83959可以抑制H_2O_2對(duì)ERK和p38MAPK蛋白的作用，SKF83959的抑制作用也可以被D1受體拮抗劑SCH23390阻斷。SKF83959可以激活ERK和p38MAPK蛋白，而用相應(yīng)的抑制劑U0126和SB203580可以分別抑制ERK和p38MAPK蛋白的激活，同時(shí)阻斷SKF83959的細(xì)胞保護(hù)作用，JNK抑制劑SP600125對(duì)SKF83959作用無(wú)影響。結(jié)論：多巴胺D1受體激動(dòng)劑SKF83959可以通過(guò)活化ERK和p38MAPK信號(hào)途徑減弱H_2O_2對(duì)RGC-5細(xì)胞氧化損傷，從而保護(hù)視神經(jīng)細(xì)胞，D1受體也可以成為開(kāi)發(fā)視神經(jīng)保護(hù)藥的一個(gè)分子靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：氧化應(yīng)激 RGC-5 MAPKs SKF83959
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R774
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 綜述11-17
• 1.1 D1受體家族及功能11-12
• 1.2 D1受體激動(dòng)劑和拮抗劑12-13
• 1.3 D1受體介導(dǎo)的信號(hào)通路13-15
• 1.4 D1受體保護(hù)視神經(jīng)細(xì)胞15-17
• 第二章 引言17-19
• 第三章 材料與方法19-32
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料19-21
• 3.1.1 載體19
• 3.1.2 試劑19-20
• 3.1.3 主要儀器和設(shè)備20-21
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法21-31
• 3.2.1 RGC-5細(xì)胞培養(yǎng)21
• 3.2.2 MTT活性測(cè)定和PI染色21-22
• 3.2.3 RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)22-24
• 3.2.4 瓊脂糖電泳和PCR產(chǎn)物純化24-25
• 3.2.5 D1受體基因克隆25-26
• 3.2.6 SDS-PAGE電泳和Western blot實(shí)驗(yàn)26-31
• 3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法31-32
• 第四章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-44
• 4.1 多巴胺D1受體在RGC-5細(xì)胞的表達(dá)32-33
• 4.2 SKF83959對(duì)RGC-5細(xì)胞氧化應(yīng)激的保護(hù)作用33-34
• 4.3 SKF83959介導(dǎo)的神經(jīng)保護(hù)與ERK蛋白活化有關(guān)34-38
• 4.4 SKF83959介導(dǎo)的神經(jīng)保護(hù)與p38 MAPK蛋白活化有關(guān)38-41
• 4.5 JNK與SKF83959介導(dǎo)的神經(jīng)保護(hù)無(wú)關(guān)41-44
• 第五章 討論44-48
• 第六章 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-57
• 作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果57-59
• 致謝59

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本文編號(hào)：361119