發(fā)布時間：2022-01-26 18:47

　　目的：通過建立2型糖尿�。╰ype2DM）大鼠模型及體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞（retinal pigment epithelial cell, ARPE-19），探討HMGB1信號通路分子在糖尿病視網(wǎng)膜病變（DR）中的蛋白表達(dá)情況，為DR的防治研究提供新的思路。方法：選擇8周齡的健康雄性SD大鼠，高脂飲食聯(lián)合小劑量STZ腹腔注射2型糖尿病大鼠模型。造模成功12周后處死大鼠獲取視網(wǎng)膜標(biāo)本，蛋白質(zhì)印跡及免疫組化技術(shù)檢測HMGB1及其受體的蛋白表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附試驗測定HMGB1信號通路下游信號分子的蛋白表達(dá)，Evans-Blue評價BRB的滲透性。培養(yǎng)ARPE-19細(xì)胞（10-20代），分為低糖組（5.5mmol/L D-葡萄糖）、高糖組（25mmol/L D-葡萄糖）、高滲對照組（5.5mmol/L D-葡萄糖加20mmol/L甘露醇）、高糖+HMGB1拮抗劑組（25mmol/L D-葡萄糖+100ug/mL HMGB1中和性抗體）、高糖+IgG對照組（25mmol/L D-葡萄糖+100ug/mL IgG抗體）。蛋白質(zhì)印跡及免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測HMGB1及其受體的蛋白表達(dá)，酶聯(lián)免疫... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

A：HMGB1及其受體RAGE/TLR2/TLR4在正常大鼠和2型糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中的蛋白表達(dá)B：Western條帶的灰度值分析（目標(biāo)蛋白/Actin-beta）注：*,p<0.05；**，p<0.01；WT，正常對照組；DM，2型糖尿病組；

RAGE/TLR2/TLR4 in retinas of normal control and type 2 diabetic rats. B:The ratio of the scanned immunoblots of target proteins to that ofActin-beta. Notes：*, p< 0.05；**，p< 0.01；WT，normal control group；DM，type 2 diabetic group；IHC 檢測視網(wǎng)膜 HMGB1 及其受體的表達(dá)定位HMGB1 及其受體 RAGE/TLR4 在正常對照大鼠及 2 型糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中均達(dá)。HMGB1 和 RAGE 主要表達(dá)在視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)核層、RPE 色素層，TLR4 主要表達(dá)在視網(wǎng)膜色素上皮層，TLR2 因為抗體的不穩(wěn)定性無法確體表達(dá)部位（如圖 1.2 所示）。

驗結(jié)果高糖對 ARPE-19 細(xì)胞活力的影響如圖 2.1 所示，在處理 24、48、72h 時，高糖組 ARPE-19 細(xì)胞活力較低糖組，高糖組 ARPE-19 細(xì)胞活力亦較高滲對照組降低，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<。然而，在 0h 及 12h，高糖組與低糖組及高滲對照組的 ARPE-19 細(xì)胞活力無學(xué)差異（p>0.05）。在實驗的任何時間點，低糖組和高滲對照組 ARPE-19 細(xì)胞均無統(tǒng)計學(xué)差異（p>0.05）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]高糖對視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞Toll樣受體2表達(dá)的影響[J]. 陳雪梅,張學(xué)東,宗元娟,沈強.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2012(01)
[2]辛伐他汀對早期糖尿病大鼠視網(wǎng)膜白細(xì)胞黏附的影響[J]. 鄭天生,張學(xué)東,張美珍.  眼科研究. 2007(03)
[3]糖尿病視網(wǎng)膜病變的防治策略[J]. 黎曉新.  中華眼科雜志. 2008 (01)



本文編號：3610991