研究目的長鏈非編碼RNA（long noncoding RNA,lncRNA）是非編碼RNA中的一種,它的長度一般大于200nt。因?yàn)椴痪邆浞g蛋白質(zhì)的功能,它們經(jīng)轉(zhuǎn)錄后大量存在于細(xì)胞核或胞漿內(nèi)。大量存在的lncRNA在一段時間內(nèi)被認(rèn)為是無用的,但經(jīng)過國內(nèi)外學(xué)者大量研究發(fā)現(xiàn)lncRNA與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。之前有研究表明lncRNA AC026166.2-001在喉癌組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá)與癌旁組織存在差異,可作為喉癌病人診斷及預(yù)后的分子標(biāo)志物。本研究進(jìn)一步探討lncRNA AC026166.2-001在喉癌細(xì)胞中的生物學(xué)作用及其發(fā)揮作用的相關(guān)機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法1.首先針對lncRNA AC026166.2-001核酸序列設(shè)計(jì)并合成過表達(dá)慢病毒包裝顆粒和3條siRNA。2.應(yīng)用慢病毒和小干擾技術(shù)通過轉(zhuǎn)染進(jìn)入喉癌細(xì)胞,對lncRNA AC026166.2-001的表達(dá)進(jìn)行上調(diào)和下調(diào)。3.采用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶反應(yīng)（quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,qRTPCR）驗(yàn)證lncRNA AC02616... 

【文章來源】：寧波大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

總RNA非變性1%瓊脂糖凝膠電泳Fig.3.1Non-denaturing1%agarosegelelectrophoresisoftotalRNA

3.2 AC026166.2-001（A、B）和 GAPDH（C、D）溶解曲線及解鏈析Fig.3.2 The amplification curve and dissociation curve analysis of AC026166(A、B) and GAPDH (C、D)能獲得實(shí)驗(yàn)熒光倒置顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率病毒載體中包含一個綠色熒光蛋白標(biāo)簽，轉(zhuǎn)染進(jìn)細(xì)胞后可表達(dá)綠。AMC-HN-8 和 TU-212 喉癌細(xì)胞經(jīng)慢病毒轉(zhuǎn)染 4 天后，熒光倒置見大量綠色熒光蛋白的表達(dá)，由此可初步判定轉(zhuǎn)染成功。由圖可達(dá) 80%(圖 3.3)。

圖 3.3 綠色熒光蛋白Fig.3.3 Green fluorescent protein (GFP)證PCR 技術(shù)檢測 LV5-AC026166.2-001 和 LV5-NC 分別 后 lncRNA AC026166.2-001 的表達(dá)量，從圖中可以-001 轉(zhuǎn)染喉癌細(xì)胞后，上述兩種喉癌細(xì)胞中 lncRNA著上升（圖 3.4）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]miRNA-17-5p靶向調(diào)節(jié)CDKN1A對鼻咽癌細(xì)胞增殖的影響[J]. 王雯珺,郭敏章,列璞怡,伍思培.  中國臨床研究. 2016(02)
[2]miR-7抑制喉鱗癌Hep-2細(xì)胞增殖及遷移的研究[J]. 徐瑤,歐陽學(xué)農(nóng),陳曦,趙忠全,綦曉艷.  臨床腫瘤學(xué)雜志. 2015(03)
[3]miRNA-7通過EGFR/PI3K/Akt通路抑制鼻咽癌5-8F細(xì)胞增殖[J]. 孫棟勛,黃棟棟,金巧智,陳武兵,蔡志毅.  中國病理生理雜志. 2014(10)
[4]放射敏感性、X線輻射劑量對鼻咽癌細(xì)胞miR-7表達(dá)的影響[J]. 陳智賢,孫愛民,陳勇,劉英,詹軍芳,陳龍華,袁亞維.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2010(08)
[5]不同輻射抗拒鼻咽癌細(xì)胞微小RNA差異表達(dá)的研究[J]. 王旭丹,楊惠玲,郭禹標(biāo),梁志慧,趙睿穎,夏云飛,蘇勇,Mong-Hong Lee,王瑾,鄭芹.  中國病理生理雜志. 2007(06)



本文編號：3513306