目的觀察α-硫辛酸（alpha lipoic acid，ALA）對(duì)外源性H2O2對(duì)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞表達(dá)血紅素氧合酶（Heme oxygenase，HO）-1的影響，并探討其分子機(jī)制。方法體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞系A(chǔ)RPE-19，并根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆譃?組：（1）空白對(duì)照組：僅給予等體積培養(yǎng)基；（2）H2O2干預(yù)組：ARPE-19細(xì)胞中加入終濃度為12.5mol/L H2O2作用30min；（3）ALA干預(yù)組：H2O2作用后加入10～30μmol/L ALA作用4～24h；（4）PI3K抑制劑組：在組3基礎(chǔ)上加入25μmol/L LY294002作用30min；（5）siRNA干預(yù)組：采用特異性siRNA干擾Nrf2或HO-1表達(dá)，隨后根部不同研究目的加入H2O2和（或）ALA；（6）CoPP或ZnPP干預(yù)組：在組3基礎(chǔ)上加入10μmol/L CoPP或ZnPP作用3h。RT-PCR和Western blot分別檢測(cè)HO-1mRNA和蛋白表達(dá)；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ARPE-19細(xì)胞凋亡；熒光探針檢測(cè)活性氧（reactive oxygen species，ROS）的產(chǎn)生；Western... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁(yè)數(shù)】：42 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

ALA對(duì)HO-1mRNA表達(dá)的影響

圖 1.ALA 對(duì) HO-1 mRNA 表達(dá)的影響性對(duì)照；3：H2O2；4：10μmol/LALA；5：20μmol/LALA；2O2應(yīng)激下 ARPE-19 細(xì)胞表達(dá) HO-1 蛋白lot 結(jié)果與 RT-PCR 類似，H2O2處理 30min 后，HO-著 ALA 濃度的增加，HO-1 的表達(dá)水平隨之增高。恒定（圖 2）。1 2 3 4 5β-aHO00bp00bpHO

圖 3.ALA 對(duì) ARPE-19 細(xì)胞 Akt 磷酸化的影響2：30μmol/L ALA；3：12.5mol/L H2O2；4：12.5mol/L H2O2+12.5mol/L H2O2+20μmol/L ALA；6：12.5mol/L H2O2+30μmol/L導(dǎo) H2O2應(yīng)激下 ARPE-19 細(xì)胞 Nrf2 核轉(zhuǎn)位19 細(xì)胞未處理時(shí)，幾乎無(wú) Nrf2 發(fā)生核轉(zhuǎn)位。而 30μmol內(nèi) Nrf2 含量顯著增高。而同時(shí)給予 25μmol/L PI3K 抑制胞核內(nèi) Nrf2 明顯降低，而細(xì)胞核蛋白內(nèi)參 TBP 保持恒1 2 3 4 5 6圖 4.ALA 對(duì) ARPE-19 細(xì)胞核內(nèi) Nrf2 含量的影響TPN

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞氧化應(yīng)激時(shí)Nrf2／ARE信號(hào)通路對(duì)抗氧化基因表達(dá)的調(diào)控:與動(dòng)脈粥樣硬化和先兆子癇的關(guān)系[J]. Giovanni E．Mann,J（o|¨）rg Niehueser-Saran,Alan Watson,Tetsuro Ishii,Patricia de Winter,Richard C．M．Siow.  生理學(xué)報(bào). 2007(02)

博士論文
[1]a-硫辛酸對(duì)氧化應(yīng)激下人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D]. 李蕓.中南大學(xué) 2010

碩士論文
[1]氧化應(yīng)激在年齡相關(guān)性黃斑變性中的作用[D]. 范姜礫.第四軍醫(yī)大學(xué) 2012
[2]硫辛酸單獨(dú)或聯(lián)合VC、VE、Zn對(duì)年齡相關(guān)性黃斑變性患者血脂及氧化應(yīng)激水平影響[D]. 楊洪梅.中國(guó)醫(yī)科大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3462392