目的觀察α-硫辛酸（alpha lipoic acid，ALA）對外源性H2O2對人視網(wǎng)膜色素上皮細胞表達血紅素氧合酶（Heme oxygenase，HO）-1的影響，并探討其分子機制。方法體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮細胞系ARPE-19，并根據(jù)不同的實驗目的分為6組：（1）空白對照組：僅給予等體積培養(yǎng)基；（2）H2O2干預組：ARPE-19細胞中加入終濃度為12.5mol/L H2O2作用30min；（3）ALA干預組：H2O2作用后加入10～30μmol/L ALA作用4～24h；（4）PI3K抑制劑組：在組3基礎上加入25μmol/L LY294002作用30min；（5）siRNA干預組：采用特異性siRNA干擾Nrf2或HO-1表達，隨后根部不同研究目的加入H2O2和（或）ALA；（6）CoPP或ZnPP干預組：在組3基礎上加入10μmol/L CoPP或ZnPP作用3h。RT-PCR和Western blot分別檢測HO-1mRNA和蛋白表達；流式細胞術檢測ARPE-19細胞凋亡；熒光探針檢測活性氧（reactive oxygen species，ROS）的產(chǎn)生；Western... 

【文章來源】：南華大學湖南省

【文章頁數(shù)】：42 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

ALA對HO-1mRNA表達的影響

圖 1.ALA 對 HO-1 mRNA 表達的影響性對照；3：H2O2；4：10μmol/LALA；5：20μmol/LALA；2O2應激下 ARPE-19 細胞表達 HO-1 蛋白lot 結果與 RT-PCR 類似，H2O2處理 30min 后，HO-著 ALA 濃度的增加，HO-1 的表達水平隨之增高。恒定（圖 2）。1 2 3 4 5β-aHO00bp00bpHO

圖 3.ALA 對 ARPE-19 細胞 Akt 磷酸化的影響2：30μmol/L ALA；3：12.5mol/L H2O2；4：12.5mol/L H2O2+12.5mol/L H2O2+20μmol/L ALA；6：12.5mol/L H2O2+30μmol/L導 H2O2應激下 ARPE-19 細胞 Nrf2 核轉位19 細胞未處理時，幾乎無 Nrf2 發(fā)生核轉位。而 30μmol內(nèi) Nrf2 含量顯著增高。而同時給予 25μmol/L PI3K 抑制胞核內(nèi) Nrf2 明顯降低，而細胞核蛋白內(nèi)參 TBP 保持恒1 2 3 4 5 6圖 4.ALA 對 ARPE-19 細胞核內(nèi) Nrf2 含量的影響TPN

【參考文獻】：
期刊論文
[1]內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞氧化應激時Nrf2／ARE信號通路對抗氧化基因表達的調(diào)控:與動脈粥樣硬化和先兆子癇的關系[J]. Giovanni E．Mann,J（o|¨）rg Niehueser-Saran,Alan Watson,Tetsuro Ishii,Patricia de Winter,Richard C．M．Siow.  生理學報. 2007(02)

博士論文
[1]a-硫辛酸對氧化應激下人視網(wǎng)膜色素上皮細胞的保護作用及機制研究[D]. 李蕓.中南大學 2010

碩士論文
[1]氧化應激在年齡相關性黃斑變性中的作用[D]. 范姜礫.第四軍醫(yī)大學 2012
[2]硫辛酸單獨或聯(lián)合VC、VE、Zn對年齡相關性黃斑變性患者血脂及氧化應激水平影響[D]. 楊洪梅.中國醫(yī)科大學 2010



本文編號：3462392