發(fā)布時間：2021-10-27 07:43

　　目的:本研究旨在利用BXD重組近交系小鼠研究基因遺傳背景對小鼠視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞軸突再生的影響。方法:本研究采用鉗夾視神經(jīng)的方法造成小鼠的視神經(jīng)損傷。為研究視神經(jīng)再生,我們構(gòu)建了以腺相關(guān)病毒2（AAV2）為載體的含有磷酸酯酶與張力蛋白同源物（Pten）基因靶向性序列的小發(fā)夾RNA（sh RNA）質(zhì)粒。通過玻璃體腔注射的方式使該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞并沉默其中Pten基因的表達(dá),再聯(lián)合玻璃體腔注射酵母聚糖（Zymosan）以及環(huán)腺苷酸擬似物（8-CPT-c AMP）造成輕度的眼內(nèi)炎癥反應(yīng)來誘導(dǎo)視神經(jīng)再生。我們將該聯(lián)合治療方案應(yīng)用于9個種系的小鼠,包括7個BXD重組近交系小鼠（BXD11,BXD29,BXD31,BXD38,BXD40,BXD75,BXD102）以及它們的親代小鼠（C57BL/6J和DBA/2J）。在視神經(jīng)損傷2周后,檢查視神經(jīng)內(nèi)距損傷部位0.5mm和1mm處的再生軸突的數(shù)量,并測量5個最長的再生軸突沿神經(jīng)走行的距離和單個最長的再生軸突所達(dá)到的最遠(yuǎn)距離。將不同小鼠的再生軸突計數(shù)數(shù)據(jù)以及長度數(shù)據(jù)分別代入Gene Network數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行基因組關(guān)聯(lián)分析并繪制... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：108 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

BXD重組近交系小鼠繁殖策略示意圖

114 基因 Ppia 在正常視網(wǎng)膜及視神經(jīng)損傷后的視網(wǎng)膜表達(dá)情況。常視網(wǎng)膜中的表達(dá)在所有 BXD 小鼠中表達(dá)穩(wěn)定，而且與正常視神經(jīng)損傷 5 天后的 Ppia 表達(dá)依然穩(wěn)定，且組間未見明顯差 GeneNetwork 數(shù)據(jù)庫 mRNA 微陣列數(shù)據(jù), 為本實驗組前期數(shù)

天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文 一、聯(lián)合治療誘導(dǎo)小鼠視神經(jīng)損傷與再生應(yīng)，這有助于視神經(jīng)軸突的再生[3-4]。在視神經(jīng)損傷的 12 天后，即小鼠處死的 2天前，向?qū)嶒炑鄄Ａw腔內(nèi)注射 2 μL 霍亂毒素 B 型亞單位（CTB）用來標(biāo)記再生的軸突。在視神經(jīng)損傷的 14 天后，即玻璃體腔注射 CTB 的兩天后，通過腹腔注射甲苯噻嗪（100 mg/kg）與氯胺酮（15 mg/kg）的混合液將實驗小鼠深度麻醉后處死并立即進(jìn)行心臟灌注（PBS+4%PFA），于 PFA 中浸泡固定一日后進(jìn)行解剖并獲取視網(wǎng)膜及視神經(jīng)（圖 1.1.9）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Collapsin response mediator protein-2 plays a major protective role in acute axonal degeneration[J]. Jian-Nan Zhang,Jan C.Koch.  Neural Regeneration Research. 2017(05)
[2]Calcium channel inhibition-mediated axonal stabilization improves axonal regeneration after optic nerve crush[J]. Vinicius T.Ribas,Paul Lingor.  Neural Regeneration Research. 2016(08)
[3]The progress in optic nerve regeneration, where are we?[J]. Jennifer Wei Huen Shum,Kai Liu,Kwok-fai So.  Neural Regeneration Research. 2016(01)



本文編號：3461167