目的:首先研究了 PI3K/Akt及MAPK/ERK信號通路在下咽癌發(fā)生發(fā)展中的作用,進而探討兩條通路的抑制劑GDC-0980和Refametinib單獨與聯(lián)合用藥對下咽癌細胞的抑制作用及分子機理,為PI3K與MAPK抑制劑類新型抗下咽癌藥物的開發(fā)及應用提供理論依據和初步實驗基礎。另外,本文分析了嗅神經母細胞瘤臨床病例特點,并檢測了 PI3K/Akt以及MAPK/ERK信號通路中關鍵因子Akt、Erk、Stat3和Stat5的磷酸化水平,為闡明嗅神經母細胞瘤的發(fā)病機制提供實驗基礎。方法:1.應用免疫組化方法觀察下咽癌組織及癌旁正常組織中Akt和Erk的磷酸化水平,并分析了兩者之間、以及兩者與下咽癌患者臨床病理因素之間的相關性。2.采用MTT實驗研究了抑制劑GDC-0980和Refametinib對下咽癌FaDu細胞增殖的影響;利用PI染色法結合流式細胞術分析GDC-0980和Refametinib對FaDu細胞周期的影響;采用Annexin-V-FITC/PI雙染結合流式細胞術檢測兩藥誘導凋亡作用;利用Western blot方法檢測兩藥對FaDu細胞周期相關蛋白以及PI3K/Akt和... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１．１下咽癌組織和癌旁正常組織中ｐ－Ａｋｔ和ｐ－Ｅｒｋ的染色情況??［Ａ和Ｂ為下咽癌組織中ｐ－Ａｋｔ的陽性染色（Ａ，?Ｘ?１００；?Ｂ，Ｘ２００），?Ｂ圖是Ａ圖標記部分的倍??數(shù)放大；Ｃ是癌旁正常組織ｐ－Ａｋｔ的染色情況（Ｃ，Ｘ２００）；?Ｄ和Ｅ是下咽癌組織中ｐ－Ｅｒｋ的陽??性染色（Ｄ，?Ｘ?１００；?Ｅ，Ｘ２００），?Ｅ圖是Ｄ圖標記部分的倍數(shù)放大；Ｆ是癌旁正常組織中ｐ－Ｅｒｋ??的染色情況（Ｆ，Ｘ２００）］

圖１．２．１?ＧＤＣ－０９８０和Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ對ＦａＤｕ細胞增殖活性的影響??（Ａ．?ＧＤＣ－０９８０對ＦａＤｕ細胞增殖活性的影響。Ｂ．?Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ對ＦａＤｕ細胞增殖活性的影??響。）??２．?２．?２?ＧＤＣ－０９８０?和?Ｒｅｆ?ａｍｅｔ?ｉ?ｎ?ｉ?ｂ?對?ＦａＤｕ?細胞周期的影響??以有絲分裂方式增殖的細胞，需要經過Ｇ１期（ＤＮＡ合成前期）、Ｓ期（ＤＮＡ??合成期）、Ｇ２期（ＤＮＡ合成后期）、Ｍ期（有絲分裂期）這么一個周而復始??的動態(tài)細胞周期過程，直至子細胞形成作為一次細胞分裂結束的標志，其中Ｇ１??期決定著細胞周期的長短，是控制細胞周期的關鍵點。細胞周期紊亂是腫瘤發(fā)??生的主要機制，因此腫瘤也是一類細胞周期性疾病是越來越多的研宄者達成的??共識，因此，我們使用ＰＩ染色結合流式細胞術分別檢測ＧＤＣ－０９８０和Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ??對ＦａＤｕ細胞周期分布的影響。使用不同濃度梯度ＧＤＣ－０９８０?（０，?０．５，１，５?Ｕ??Ｍ）和?Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ?（０，５，１０，２０?ｉｘＭ）處理?ＦａＤｕ?細胞，藥物孵育?４８?ｈ?后，??通過流式細胞術檢測細胞周期變化，結果顯示，ＧＤＣ－０９８０和Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ處理??過的細胞均出現(xiàn)了?Ｇ１期阻滯，０．５，１，５?ＵＭ的ＧＤＣ－０９８０處理后的ＦａＤｕ細??

圖１．２．２?ＧＤＣ－０９８０和Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ對ＦａＤｕ細胞周期的影響??Ｂ為流式細胞術分析ＧＤＣ－０９８０對ＦａＤｕ細胞周期各時相分布的影響及Ｇｌ、分比統(tǒng)計學分析，Ｃ、Ｄ為流式細胞術分析Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ對ＦａＤｕ細胞周期影響及Ｇｌ、Ｓ、Ｇ２／Ｍ期百分比統(tǒng)計學分析。）??ＤＧ－０９８０和Ｒｅｆａｍｅｔ?ｉ?ｎ?ｉ?ｂ對ＦａＤｕ細胞周期相關蛋白以及ｍＲＮＡ表達討ＧＤＣ－０９８０和Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ對ＦａＤｕ誘導細胞周期阻滯的分子機ｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ和Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ定量ＰＣＲ技術，我們又進一步檢測了?ＧＤＣ－０９ｅｔｉｎｉｂ對ＦａＤｕ細胞周期相關蛋白Ｃｙｃｌｉｎ?Ｄｌ，ｐ２７的表達和ｐ－Ｒｂ碟以及對ｐ２７?ｍＲＮＡ表達的影響。實驗結果表明，經ＧＤＣ－０９８０處細胞中，ｃｙｃｌｉｎ?Ｄ１的表達水平和ｐ－Ｒｂ的磷酸化水平均呈劑量依賴ｐ２７的蛋白表達水平顯著升高（圖１．２．３Ａ）。ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測結果發(fā)８０可增加ｐ２７的ｍＲＮＡ表達水平（圖１．２．３Ｂ）。同樣，Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ

【參考文獻】：
期刊論文
[1]下咽癌386例臨床特征及療效分析[J]. 曹軼倓,周梁,吳海濤,李筱明,黃維庭,陳小玲,李采,陶磊.  中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志. 2016 (06)
[2]小分子靶向抗腫瘤藥物的研究進展[J]. 柏靜,楊長福,黃高,張明慶,方為民.  腫瘤藥學. 2015(03)
[3]口腔頜面部腫瘤中硫酸乙酰肝素酶的研究進展[J]. 陳士文,徐錦程.  蚌埠醫(yī)學院學報. 2014(06)
[4]頭頸部腫瘤暨鼻咽癌的分子靶向臨床研究進展[J]. 馮梅,郎錦義.  腫瘤預防與治療. 2013(01)
[5]Alterations in the human epidermal growth factor receptor 2-phosphatidylinositol 3-kinase-v-Akt pathway in gastric cancer[J]. Yasutaka Sukawa,Hiroyuki Yamamoto,Katsuhiko Nosho,Hiroaki Kunimoto,Hiromu Suzuki,Yasushi Adachi,Mayumi Nakazawa,Takayuki Nobuoka,Mariko Kawayama,Masashi Mikami,Takashi Matsuno,Tadashi Hasegawa,Koichi Hirata,Kohzoh Imai,Yasuhisa Shinomura.  World Journal of Gastroenterology. 2012(45)
[6]分子靶向治療藥物的研究進展[J]. 韓慧珍,鄒龐,郭寶良.  中國普通外科雜志. 2010(12)
[7]mAb225與放射對舌鱗癌細胞凋亡的研究[J]. 王明國,王中和.  口腔頜面外科雜志. 2010(02)
[8]下咽癌頸部及咽后淋巴結轉移的CT/MRI分析[J]. 鄧雪英,蘇勇,鄭列,謝傳淼,古模發(fā),曾睿芳,尹韶晗.  癌癥. 2010(02)
[9]塞來昔布對鼻咽癌CNE-2細胞增殖抑制的實驗研究[J]. 易芳,許新華,付向陽,戴德蘭,李道俊,張昌菊.  腫瘤防治研究. 2009(02)
[10]腫瘤分子靶向治療進展[J]. 王雅杰.  實用腫瘤雜志. 2006(03)



本文編號：3345699