目的:首先研究了 PI3K/Akt及MAPK/ERK信號(hào)通路在下咽癌發(fā)生發(fā)展中的作用,進(jìn)而探討兩條通路的抑制劑GDC-0980和Refametinib單獨(dú)與聯(lián)合用藥對(duì)下咽癌細(xì)胞的抑制作用及分子機(jī)理,為PI3K與MAPK抑制劑類新型抗下咽癌藥物的開發(fā)及應(yīng)用提供理論依據(jù)和初步實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。另外,本文分析了嗅神經(jīng)母細(xì)胞瘤臨床病例特點(diǎn),并檢測(cè)了 PI3K/Akt以及MAPK/ERK信號(hào)通路中關(guān)鍵因子Akt、Erk、Stat3和Stat5的磷酸化水平,為闡明嗅神經(jīng)母細(xì)胞瘤的發(fā)病機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:1.應(yīng)用免疫組化方法觀察下咽癌組織及癌旁正常組織中Akt和Erk的磷酸化水平,并分析了兩者之間、以及兩者與下咽癌患者臨床病理因素之間的相關(guān)性。2.采用MTT實(shí)驗(yàn)研究了抑制劑GDC-0980和Refametinib對(duì)下咽癌FaDu細(xì)胞增殖的影響;利用PI染色法結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)分析GDC-0980和Refametinib對(duì)FaDu細(xì)胞周期的影響;采用Annexin-V-FITC/PI雙染結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)兩藥誘導(dǎo)凋亡作用;利用Western blot方法檢測(cè)兩藥對(duì)FaDu細(xì)胞周期相關(guān)蛋白以及PI3K/Akt和... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１．１下咽癌組織和癌旁正常組織中ｐ－Ａｋｔ和ｐ－Ｅｒｋ的染色情況??［Ａ和Ｂ為下咽癌組織中ｐ－Ａｋｔ的陽性染色（Ａ，?Ｘ?１００；?Ｂ，Ｘ２００），?Ｂ圖是Ａ圖標(biāo)記部分的倍??數(shù)放大；Ｃ是癌旁正常組織ｐ－Ａｋｔ的染色情況（Ｃ，Ｘ２００）；?Ｄ和Ｅ是下咽癌組織中ｐ－Ｅｒｋ的陽??性染色（Ｄ，?Ｘ?１００；?Ｅ，Ｘ２００），?Ｅ圖是Ｄ圖標(biāo)記部分的倍數(shù)放大；Ｆ是癌旁正常組織中ｐ－Ｅｒｋ??的染色情況（Ｆ，Ｘ２００）］

圖１．２．１?ＧＤＣ－０９８０和Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ對(duì)ＦａＤｕ細(xì)胞增殖活性的影響??（Ａ．?ＧＤＣ－０９８０對(duì)ＦａＤｕ細(xì)胞增殖活性的影響。Ｂ．?Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ對(duì)ＦａＤｕ細(xì)胞增殖活性的影??響。）??２．?２．?２?ＧＤＣ－０９８０?和?Ｒｅｆ?ａｍｅｔ?ｉ?ｎ?ｉ?ｂ?對(duì)?ＦａＤｕ?細(xì)胞周期的影響??以有絲分裂方式增殖的細(xì)胞，需要經(jīng)過Ｇ１期（ＤＮＡ合成前期）、Ｓ期（ＤＮＡ??合成期）、Ｇ２期（ＤＮＡ合成后期）、Ｍ期（有絲分裂期）這么一個(gè)周而復(fù)始??的動(dòng)態(tài)細(xì)胞周期過程，直至子細(xì)胞形成作為一次細(xì)胞分裂結(jié)束的標(biāo)志，其中Ｇ１??期決定著細(xì)胞周期的長(zhǎng)短，是控制細(xì)胞周期的關(guān)鍵點(diǎn)。細(xì)胞周期紊亂是腫瘤發(fā)??生的主要機(jī)制，因此腫瘤也是一類細(xì)胞周期性疾病是越來越多的研宄者達(dá)成的??共識(shí)，因此，我們使用ＰＩ染色結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)ＧＤＣ－０９８０和Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ??對(duì)ＦａＤｕ細(xì)胞周期分布的影響。使用不同濃度梯度ＧＤＣ－０９８０?（０，?０．５，１，５?Ｕ??Ｍ）和?Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ?（０，５，１０，２０?ｉｘＭ）處理?ＦａＤｕ?細(xì)胞，藥物孵育?４８?ｈ?后，??通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期變化，結(jié)果顯示，ＧＤＣ－０９８０和Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ處理??過的細(xì)胞均出現(xiàn)了?Ｇ１期阻滯，０．５，１，５?ＵＭ的ＧＤＣ－０９８０處理后的ＦａＤｕ細(xì)??

圖１．２．２?ＧＤＣ－０９８０和Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ對(duì)ＦａＤｕ細(xì)胞周期的影響??Ｂ為流式細(xì)胞術(shù)分析ＧＤＣ－０９８０對(duì)ＦａＤｕ細(xì)胞周期各時(shí)相分布的影響及Ｇｌ、分比統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，Ｃ、Ｄ為流式細(xì)胞術(shù)分析Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ對(duì)ＦａＤｕ細(xì)胞周期影響及Ｇｌ、Ｓ、Ｇ２／Ｍ期百分比統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。）??ＤＧ－０９８０和Ｒｅｆａｍｅｔ?ｉ?ｎ?ｉ?ｂ對(duì)ＦａＤｕ細(xì)胞周期相關(guān)蛋白以及ｍＲＮＡ表達(dá)討ＧＤＣ－０９８０和Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ對(duì)ＦａＤｕ誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯的分子機(jī)ｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ和Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ定量ＰＣＲ技術(shù)，我們又進(jìn)一步檢測(cè)了?ＧＤＣ－０９ｅｔｉｎｉｂ對(duì)ＦａＤｕ細(xì)胞周期相關(guān)蛋白Ｃｙｃｌｉｎ?Ｄｌ，ｐ２７的表達(dá)和ｐ－Ｒｂ碟以及對(duì)ｐ２７?ｍＲＮＡ表達(dá)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)ＧＤＣ－０９８０處細(xì)胞中，ｃｙｃｌｉｎ?Ｄ１的表達(dá)水平和ｐ－Ｒｂ的磷酸化水平均呈劑量依賴ｐ２７的蛋白表達(dá)水平顯著升高（圖１．２．３Ａ）。ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測(cè)結(jié)果發(fā)８０可增加ｐ２７的ｍＲＮＡ表達(dá)水平（圖１．２．３Ｂ）。同樣，Ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3345699