發(fā)布時間：2021-08-13 07:09

　　研究背景脈絡(luò)膜新生血管（choroidal neovascularization, CNV）,包括血管發(fā)生和血管生成過程,是多種可造成嚴重不可逆視力喪失的視網(wǎng)膜疾病的共同病理基礎(chǔ)。在近幾十年的努力中,對于CNV的病理生理機制和防治策略的研究已經(jīng)取得了不少成績。然而,CNV的發(fā)展是一個非常復(fù)雜的動態(tài)過程。對于其發(fā)生發(fā)展的具體機制仍然知之甚少。Delta樣配體4（Delta-like ligand 4, Dll4）是Notch信號系統(tǒng)家族在哺乳動物細胞中的配體之一,特異性的表達于生理性和病理性的血管系。值得注意的是,小鼠基因敲除的研究中發(fā)現(xiàn),單一Dll4等位基因缺失便會由于血管系統(tǒng)的發(fā)育障礙而導(dǎo)致小鼠胚胎期死亡。到目前為止,已知的僅有兩個血管發(fā)育相關(guān)基因,Dll4和血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）,具有半劑量等位基因致死效應(yīng),表明其在血管發(fā)生及生成過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。以往的研究中發(fā)現(xiàn),缺氧誘導(dǎo)因子1（hypoxia inducible factor 1,HIF- 1）對于調(diào)控視網(wǎng)膜色素上皮（retinal pigment ... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：111 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

載體質(zhì)粒pShuttle-CMV以及表達質(zhì)粒pShuttle-CMV-hDll4

G．室溫復(fù)溫后，PBS 清洗，5min × 3 次，加入 PBS 稀釋二抗（CY3 標記兔抗羊 IgG 1：200）孵育，室溫 1 小時，PBS 清洗，5min × 3 次；H．DAPI 襯染細胞核，室溫 5min，PBS 清洗，5min × 3 次；I．1：1 甘油/PBS 封片，熒光顯微鏡下觀察，照相。（以 0.01 mol PBS 替代一抗作為空白對照，以正常羊血清(1:50)替代一抗作為替代對照，行平行染色。）2.6 非接觸共培養(yǎng)體系觀察缺氧條件下 RPE 細胞誘導(dǎo)不同 Dll4表達水平的 RF/6A 細胞功能的變化設(shè)計三種模擬體內(nèi)RPE細胞與CEC之間自然關(guān)系的共培養(yǎng)模型分別對缺氧條件下受 RPE 細胞誘導(dǎo)的不同 Dll4 表達水平 RF/6A 細胞的增生、侵襲以及管腔形成能力進行分析（圖 1-2）。

圖 1-3 RPE-RF/6A 接觸共培養(yǎng)模型。體步驟如下：4個 RPE 細胞接種在 Transwell 小室背面培養(yǎng) 6 小時后貼壁層；各實驗分組進行轉(zhuǎn)染的 RF/6A 細胞預(yù)處理培養(yǎng) 24 小時，用腺病毒繼續(xù)感染細胞 24 小時，將 5×104個 GFP 標記的 RF背面已形成 RPE 細胞層的 Transwell 小室內(nèi)；孔板內(nèi)預(yù)先以 1×105/ cm2的密度接種 RPE 細胞，培養(yǎng)貼壁缺氧 12 小時使底層形成化學(xué)趨化力，應(yīng)用接觸共培養(yǎng)模型孔內(nèi)； 4 小時后，將小室取出，以棉簽拭去小室內(nèi)底面濾膜上的內(nèi)滌，5min × 3 次；

【參考文獻】：
期刊論文
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[3]生長因子在脈絡(luò)膜新生血管生成的微環(huán)境中的多重作用[J]. 竇國睿,王雨生.  眼科新進展. 2006(09)
[4]VEGF誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細胞體外三維成型和對EphrinB2/EphB4表達的影響[J]. 黨濤,卞修武,趙雯,戴超,蔣雪峰.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2006(10)
[5]血管內(nèi)皮生長因子誘發(fā)脈絡(luò)膜新生血管的分子機制[J]. 侯慧媛,王雨生.  中華眼底病雜志. 2005(06)
[6]脈絡(luò)膜新生血管的生成和抑制[J]. 朱潔,王雨生,惠延年.  眼科新進展. 2004(01)



本文編號：3339986