發(fā)布時(shí)間：2021-05-16 06:24

　　目的:調(diào)節(jié)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的基因表達(dá),探討下調(diào)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白相關(guān)基因表達(dá)的可能。方法:采用基因編輯系統(tǒng)對(duì)人源視網(wǎng)膜ARPE-19宿主細(xì)胞進(jìn)行相應(yīng)的基因編輯,運(yùn)用Crispr Cas 9基因編輯系統(tǒng)對(duì)細(xì)胞中的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因進(jìn)行敲除,并且對(duì)細(xì)胞中的目標(biāo)基因葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的基因編輯效率進(jìn)行驗(yàn)證,考察基因編輯系統(tǒng)在人視網(wǎng)膜色素上皮中的編輯效果。結(jié)果:實(shí)現(xiàn)了葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白相關(guān)基因的敲除,完成了人源視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞ARPE-19基因缺陷型單克隆細(xì)胞株的構(gòu)建。結(jié)論:利用Crispr Cas9技術(shù)對(duì)視網(wǎng)膜細(xì)胞的內(nèi)源性基因進(jìn)行編輯,有可能作為基因治療糖尿病性視網(wǎng)膜病變的新策略。我們證實(shí)了設(shè)計(jì)的針對(duì)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的sgRNA可以準(zhǔn)確靶向并定點(diǎn)切割目標(biāo)基因,并且這種治療策略在細(xì)胞學(xué)方面是安全有效的。使用sgRNA對(duì)內(nèi)源葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因進(jìn)行了敲除是具有治療意義的,從根本上解決了糖尿病性視網(wǎng)膜病變眼內(nèi)葡萄糖蓄積而產(chǎn)生的各種細(xì)胞損害,是一種潛在的治療糖尿病性視網(wǎng)膜病變的手段。 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：40 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 綜述
    1.1 糖尿病性視網(wǎng)膜病變的發(fā)病機(jī)理
        1.1.1 糖尿病性視網(wǎng)膜病變發(fā)病的相關(guān)因素
        1.1.2 糖尿病性視網(wǎng)膜病變發(fā)病的相關(guān)機(jī)制
    1.2 糖尿病性視網(wǎng)膜病變的治療方法
        1.2.1 藥物治療
        1.2.2 非藥物治療
    1.3 糖尿病性視網(wǎng)膜病變的基因水平的治療
        1.3.1 高血糖
        1.3.2 缺氧
        1.3.3 血管緊張素Ⅱ
第2章 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
    2.1 檢測(cè)細(xì)胞
        2.1.1 細(xì)胞狀態(tài)檢測(cè)
        2.1.2 目標(biāo)基因檢測(cè)
        2.1.3 檢測(cè)結(jié)果
    2.2 SGRNA設(shè)計(jì)、制備及體外篩選,CRISPR載體構(gòu)建以及SGRNA細(xì)胞內(nèi)篩選
        2.2.1 SGRNA設(shè)計(jì)
        2.2.2 SGRNA制備
        2.2.3 SGRNA體外篩選
        2.2.4 CRISPR載體構(gòu)建
        2.2.5 SGRNA細(xì)胞內(nèi)篩選
    2.3 完成單克隆細(xì)胞的培養(yǎng)和單克隆細(xì)胞的篩選
        2.3.1 單克隆細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.3.2 單克隆細(xì)胞的篩選
    2.4 單克隆細(xì)胞質(zhì)量檢測(cè)
        2.4.1 將篩選完成的單克隆細(xì)胞株擴(kuò)大培養(yǎng)后進(jìn)行支原體檢測(cè)
        2.4.2 培養(yǎng)的單克隆細(xì)胞株生長(zhǎng)狀態(tài)正常
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]增殖型糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者玻璃體切割術(shù)前應(yīng)用雷珠單抗的臨床療效[D]. 李相哲.延邊大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3189154