目的：應用iTRAQ（Isobaric tags for relative and absolute quantification）定量蛋白質組學技術結合二維液相色譜串聯(lián)質譜（2DLC-MS/MS）的方法篩選鼻咽癌轉移相關的蛋白,分別在基因和蛋白水平對轉移相關的蛋白進行驗證,從而篩選出預測鼻咽癌轉移的分子標志物,為鼻咽癌的浸潤轉移機制提供科學的理論基礎,這些分子標志物有望在臨床上預測鼻咽癌患者的預后及生存率,最終指導鼻咽癌的合理治療。方法：培養(yǎng)高成瘤不轉移的鼻咽癌細胞株（6-10B）和高成瘤高轉移的鼻咽癌細胞株（5-8F）,分別抽提蛋白質,測量蛋白濃度,采用iTRAQ結合2DLC-MS/MS的方法分離鑒定兩種不同細胞株的差異表達蛋白,實驗重復兩次。通過ProteinPilotTM4.2軟件進行Swissprot蛋白數據庫搜索及鑒定,從中挑選出符合要求的轉移相關差異蛋白,進行生物信息學分析。以生物信息學分析結果為參考,通過uniprot軟件及相關文獻檢索分析挑選出23個目的蛋白,采用qRT-PCR （Quantitative Reverse transcriptase Polymeras... 

【文章來源】：中南大學湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：92 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
1 緒論
2 材料與方法
    2.1 主要實驗材料
        2.1.1 細胞株
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要耗材
        2.1.4 主要儀器和設備
        2.1.5 主要試劑的配制
        2.1.6 數據庫搜索、生物信息學及圖像分析軟件
    2.2 實驗方法
        2.2.1 技術路線
        2.2.2 細胞培養(yǎng)
        2.2.3 細胞總蛋白的提取和濃度測定
        2.2.4 iTRAQ試劑標記蛋白
        2.2.5 2DLC-MS/MS
        2.2.6 蛋白數據庫搜索
        2.2.7 生物信息學分析
        2.2.8 qRT-PCR驗證部分差異蛋白在5-8F和6-10B中mRNA水平的表達差異
        2.2.9 Western blotting驗證RAN、TRIM29、ANXA5、SQSTM1在5-8F和6-10B中蛋白水平的表達差異
        2.2.10 免疫組織化學檢測RAN、TRIM29、ANXA5、SQSTM1在鼻咽癌組織中的表達
    2.3 統(tǒng)計學分析
3 結果
    3.1 蛋白濃度測定結果
    3.2 iTRAQ串聯(lián)2DLC-MS/MS檢測并且通過ProteinPilotTM 4.2軟件進行Swissprot蛋白數據庫搜索及鑒定
TM4.2展示的蛋白搜索結果">        3.2.1 ProteinPilotT^TM4.2展示的蛋白搜索結果
        3.2.2 蛋白定量匹配肽段
        3.2.3 匹配肽段質譜圖
    3.3 兩次質譜鑒定的結果
        3.3.1 兩次質譜鑒定結果
        3.3.2 兩次質譜結果分析
    3.4 篩選與鼻咽癌轉移相關差異表達蛋白
    3.5 生物信息學分析
        3.5.1 轉移相關差異蛋白GO分析
        3.5.2 轉移相關差異蛋白KEGG信號通路分析
        3.5.3 轉移相關蛋白的PPI相互作用網絡圖
    3.6 qRT-PCR檢測23個基因在5-8F和6-10B中mRNA表達水平
    3.7 蛋白濃度測定結果
    3.8 Western blotting驗證差異蛋白在兩株細胞中的表達
    3.9 免疫組織化學驗證差異蛋白在發(fā)生轉移的鼻咽癌組織和未發(fā)生轉移的鼻咽癌組織中的表達差異
4 討論
5 結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間主要的研究成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3029301