目的：應(yīng)用iTRAQ（Isobaric tags for relative and absolute quantification）定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)結(jié)合二維液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（2DLC-MS/MS）的方法篩選鼻咽癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的蛋白,分別在基因和蛋白水平對轉(zhuǎn)移相關(guān)的蛋白進行驗證,從而篩選出預(yù)測鼻咽癌轉(zhuǎn)移的分子標志物,為鼻咽癌的浸潤轉(zhuǎn)移機制提供科學(xué)的理論基礎(chǔ),這些分子標志物有望在臨床上預(yù)測鼻咽癌患者的預(yù)后及生存率,最終指導(dǎo)鼻咽癌的合理治療。方法：培養(yǎng)高成瘤不轉(zhuǎn)移的鼻咽癌細胞株（6-10B）和高成瘤高轉(zhuǎn)移的鼻咽癌細胞株（5-8F）,分別抽提蛋白質(zhì),測量蛋白濃度,采用iTRAQ結(jié)合2DLC-MS/MS的方法分離鑒定兩種不同細胞株的差異表達蛋白,實驗重復(fù)兩次。通過ProteinPilotTM4.2軟件進行Swissprot蛋白數(shù)據(jù)庫搜索及鑒定,從中挑選出符合要求的轉(zhuǎn)移相關(guān)差異蛋白,進行生物信息學(xué)分析。以生物信息學(xué)分析結(jié)果為參考,通過uniprot軟件及相關(guān)文獻檢索分析挑選出23個目的蛋白,采用qRT-PCR （Quantitative Reverse transcriptase Polymeras... 

【文章來源】：中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
1 緒論
2 材料與方法
    2.1 主要實驗材料
        2.1.1 細胞株
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要耗材
        2.1.4 主要儀器和設(shè)備
        2.1.5 主要試劑的配制
        2.1.6 數(shù)據(jù)庫搜索、生物信息學(xué)及圖像分析軟件
    2.2 實驗方法
        2.2.1 技術(shù)路線
        2.2.2 細胞培養(yǎng)
        2.2.3 細胞總蛋白的提取和濃度測定
        2.2.4 iTRAQ試劑標記蛋白
        2.2.5 2DLC-MS/MS
        2.2.6 蛋白數(shù)據(jù)庫搜索
        2.2.7 生物信息學(xué)分析
        2.2.8 qRT-PCR驗證部分差異蛋白在5-8F和6-10B中mRNA水平的表達差異
        2.2.9 Western blotting驗證RAN、TRIM29、ANXA5、SQSTM1在5-8F和6-10B中蛋白水平的表達差異
        2.2.10 免疫組織化學(xué)檢測RAN、TRIM29、ANXA5、SQSTM1在鼻咽癌組織中的表達
    2.3 統(tǒng)計學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 蛋白濃度測定結(jié)果
    3.2 iTRAQ串聯(lián)2DLC-MS/MS檢測并且通過ProteinPilotTM 4.2軟件進行Swissprot蛋白數(shù)據(jù)庫搜索及鑒定
TM4.2展示的蛋白搜索結(jié)果">        3.2.1 ProteinPilotT^TM4.2展示的蛋白搜索結(jié)果
        3.2.2 蛋白定量匹配肽段
        3.2.3 匹配肽段質(zhì)譜圖
    3.3 兩次質(zhì)譜鑒定的結(jié)果
        3.3.1 兩次質(zhì)譜鑒定結(jié)果
        3.3.2 兩次質(zhì)譜結(jié)果分析
    3.4 篩選與鼻咽癌轉(zhuǎn)移相關(guān)差異表達蛋白
    3.5 生物信息學(xué)分析
        3.5.1 轉(zhuǎn)移相關(guān)差異蛋白GO分析
        3.5.2 轉(zhuǎn)移相關(guān)差異蛋白KEGG信號通路分析
        3.5.3 轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白的PPI相互作用網(wǎng)絡(luò)圖
    3.6 qRT-PCR檢測23個基因在5-8F和6-10B中mRNA表達水平
    3.7 蛋白濃度測定結(jié)果
    3.8 Western blotting驗證差異蛋白在兩株細胞中的表達
    3.9 免疫組織化學(xué)驗證差異蛋白在發(fā)生轉(zhuǎn)移的鼻咽癌組織和未發(fā)生轉(zhuǎn)移的鼻咽癌組織中的表達差異
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學(xué)位期間主要的研究成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3029301