目的通過(guò)構(gòu)建過(guò)表達(dá)IL-35的慢病毒載體,轉(zhuǎn)染鼻咽癌細(xì)胞,建立穩(wěn)定表達(dá)IL-35的鼻咽癌細(xì)胞株,為進(jìn)一步研究IL-35對(duì)鼻咽癌細(xì)胞的影響奠定基礎(chǔ)。方法根據(jù)GenBank中的EBI3和IL-l2p35基因序列,設(shè)計(jì)引物克隆EBI3和IL-l2p35基因。PCR產(chǎn)物和pLVX-IRES-ZsGreenl質(zhì)粒（命名為H145）經(jīng)過(guò)經(jīng)酶切、轉(zhuǎn)化、篩選、測(cè)序鑒定等后獲得重組質(zhì)粒pLVX-mIL-35-IRES-ZsGreenl,命名為H11864。將重組質(zhì)粒H11864和H145經(jīng)過(guò)慢病毒包裝后轉(zhuǎn)染HEK-293T細(xì)胞,收取病毒濃縮液并檢測(cè)其滴度。用病毒濃縮液感染CNE細(xì)胞,用Real-time PCR和ELISA檢測(cè)IL-35的表達(dá)情況。檢測(cè)IL-35過(guò)表達(dá)對(duì)鼻咽癌細(xì)胞增殖能力的影響。結(jié)果測(cè)序結(jié)果顯示,本研究成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pLVX-mIL-35-IRES-ZsGreenl。pCDH-GFP組及pCDH-IL-35-GFP組的慢病毒滴度分別為5.10×108 TU·ml-1和1.03×109 TU·ml-1。Real-time PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,與CNE-H11864（4 626 159.2... 

【文章來(lái)源】：國(guó)際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào). 2020,26(18)

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