本文關(guān)鍵詞：線粒體基因組測序揭示G3460A合并G9804A導(dǎo)致Leber遺傳性視神經(jīng)病，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：本實(shí)驗(yàn)擬通過檢測線粒體基因組G3460A、G9804A在Leber遺傳性視神經(jīng)病變中位點(diǎn)突變情況,進(jìn)而探討基因組G346A、G9804A在Leber遺傳性視神經(jīng)病變中致病機(jī)制,以及線粒體母系遺傳在Leber遺傳性視神經(jīng)病變中作用。方法：一個(gè)LHON家系中,先證者有1個(gè)舅舅發(fā)病,其他均正常。調(diào)查該家系所有健在人員共11人,包括先證者、先證者的外婆、母親、父親、2個(gè)舅舅(1個(gè)舅舅未婚單身)、舅媽、舅舅的女兒和兒子、先證者的弟弟和妹妹,并采集10ml抗凝血,采用Ficoll分離液分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC),一部分PBMC用來分離線粒體并提取線粒體基因組DNA,根據(jù)目前報(bào)導(dǎo)的LHON相關(guān)mtDNA突變位點(diǎn)設(shè)計(jì)PCR引物,并進(jìn)行PCR擴(kuò)增,然后將PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序。另外一部分PBMC用來構(gòu)建線粒體DNA文庫,然后根據(jù)線粒體基因組設(shè)計(jì)疊瓦狀探針對DNA文庫中的線粒體基因進(jìn)行捕獲,將捕獲后的DNA進(jìn)行柱子純化,然后采用Illumina引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,將PCR產(chǎn)物純化后,在2代測序儀Hisiq2500進(jìn)行測序,并采用生物信息學(xué)分析軟件對測序結(jié)果進(jìn)行分析,尋找與LHON相關(guān)的mtDNA突變位點(diǎn)。 結(jié)果：采用抽提的線粒體基因組DNA進(jìn)行常見的mtDNA突變位點(diǎn)PCR檢測,發(fā)現(xiàn)先證者、發(fā)病的舅舅、外婆以及母親存在G3460A突變位點(diǎn),并且,先證者的弟弟也存在該突變位點(diǎn),但沒有發(fā)病。為進(jìn)一步探討該家系LHON發(fā)病的原因,對線粒體全基因組進(jìn)行測序,發(fā)現(xiàn)先證者、以及發(fā)病的舅舅存在G9804A突變位點(diǎn),但是,先證者的弟弟在該位點(diǎn)不存在突變。并且,發(fā)現(xiàn)先證者另1個(gè)表型正常的舅舅存在G9804A突變位點(diǎn)。同時(shí),在這個(gè)家系中還發(fā)現(xiàn)了39個(gè)共同的非熱點(diǎn)突變位點(diǎn)。文獻(xiàn)查閱和生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)G3460A位點(diǎn)突變(氨基酸突變?yōu)锳52T)導(dǎo)致電子呼吸鏈酶復(fù)合體I中的亞單位(NADH脫氫酶)的活性降低,復(fù)合物I在光誘導(dǎo)的神經(jīng)傳導(dǎo)通路中具有非常重要作用；G9804A位點(diǎn)突變(氨基酸突變?yōu)锳200T)會(huì)導(dǎo)致電子呼吸鏈酶復(fù)合體IV中的亞單位(線粒體細(xì)胞色素C氧化酶亞基Ⅲ,MTCO3)產(chǎn)生缺陷,影響細(xì)胞的功能。 結(jié)論：1)線粒體基因組G3460A合并G9804A位點(diǎn)突變導(dǎo)致Leber遺傳性視神經(jīng)病變；2)線粒體母系遺傳會(huì)在子代中存在個(gè)體差異,并且,子代線粒體基因組DNA可能會(huì)產(chǎn)生新的突變。
【關(guān)鍵詞】：Leber遺傳性視神經(jīng)病 線粒體DNA 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 線粒體電子呼吸鏈
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R774.6
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 前言8-11
• 研究對象與材料11-13
• 1、研究對象11
• 2、主要試劑和材料11-12
• 3、主要儀器設(shè)備12-13
• 研究方法13-19
• 1、線粒體基因PCR擴(kuò)X，
  
  本文編號：296613
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