本文關(guān)鍵詞：犬高危穿透性角膜移植術(shù)后排斥反應(yīng)與TNF-α變化的相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：本試驗(yàn)以重慶本地小型雜交犬為試驗(yàn)動(dòng)物,先構(gòu)建高危(化學(xué)傷)角膜病理模型,而后進(jìn)行穿透性角膜移植手術(shù),術(shù)后觀察排斥反應(yīng)與外周血和角膜組織中TNF-α變化情況。方法：(1)選擇健康(無眼疾)本地犬34只作為試驗(yàn)犬,使用1mol/L的NaOH溶液對(duì)所有試驗(yàn)犬左眼角膜正中進(jìn)行堿燒傷,術(shù)后每天使用裂隙燈顯微鏡對(duì)術(shù)眼觀察各層情況并測(cè)量新生血管長度。(2)選擇17只健康本地犬作為供體犬,對(duì)34只堿燒傷模型犬行穿透性角膜移植手術(shù),并嚴(yán)格監(jiān)控術(shù)中、術(shù)后的并發(fā)癥,術(shù)后分生理鹽水組和(1%RAPA)治療組分別處置,每天裂隙燈顯微鏡觀察術(shù)眼情況并記錄。(3)分別取生理鹽水組和(1%RAPA)治療組8只于建立燒傷模型前,手術(shù)當(dāng)日,術(shù)后第7、14、21、28、35、42、49、56d采前肢頭靜脈血,用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)雙抗體夾心法檢測(cè)TNF-α濃度；其余18只犬隨機(jī)分成兩組(處置方法同上),分別在術(shù)后第7、28、56d各組隨機(jī)抽取3只取眼,另外選取3只健康犬作為空白對(duì)照組,對(duì)所取角膜均分三份,一份用于測(cè)定犬角膜組織TNF-α含量,一份用于HE染色觀察角膜組織病理學(xué)變化；最后一份進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè),最后使用△△Ct法分析角膜組織TNF-α基因的相對(duì)表達(dá)量。試驗(yàn)結(jié)果：(1)燒傷當(dāng)日角膜全層即刻呈現(xiàn)出銀白色云霧狀,3d后出現(xiàn)不同程度的水腫,混濁度明顯加劇,5d后角膜緣開始浸潤新生血管并向角膜中心方向生長,7d后炎癥加劇,血管向角膜中心彌散,9d左右某些角膜基質(zhì)層溶解現(xiàn)象加劇,新生血管變得粗大,模型建立成功。(2)所有PKP術(shù)犬均無縫線崩裂現(xiàn)象,但有兩例在術(shù)后3天即發(fā)生急性排斥反應(yīng)需重新補(bǔ)充；生理鹽水組術(shù)后術(shù)犬術(shù)眼周圍均有大量分泌物分泌,3d時(shí)植片均出現(xiàn)輕微水腫,6d時(shí)角膜植片植床交界處開始出現(xiàn)明顯炎癥反應(yīng),7d時(shí)有部分血管開始長入角膜植片內(nèi),15d時(shí)所有術(shù)犬均出現(xiàn)排斥反應(yīng),28d時(shí)植片開始出現(xiàn)質(zhì)感變硬的現(xiàn)象,56d時(shí)角膜組織開始肉質(zhì)化;(1%RAPA)治療組眼分泌物較之生理鹽水組少,3d時(shí)植片透明無明顯水腫現(xiàn)象,6d時(shí)術(shù)犬出現(xiàn)新生血管向植片生長的現(xiàn)象,部分犬只角膜出現(xiàn)輕度水腫,7d時(shí)新生血管有所增多但仍未到達(dá)排斥反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn),15d時(shí)植片的水腫和混濁程度有明顯的改善,新生血管出現(xiàn)消退,28d時(shí)植片轉(zhuǎn)歸透明,56d時(shí)除3例排斥外其余角膜植片仍保持透明,未出現(xiàn)排斥反應(yīng)。(3)堿燒傷后及堿燒傷角膜移植術(shù)后早期各組實(shí)驗(yàn)犬外周血中TNF-α含量均升高,生理鹽水組含量于28d后達(dá)最高水平(94.10±1.66pg-ml-1)并在以后的監(jiān)測(cè)期內(nèi)維持較高含量,治療組在臨床診斷排斥反應(yīng)發(fā)生前術(shù)后第14d達(dá)最高水平(68.22±0.90pg·ml-1),而后開始下降,到術(shù)后56d幾乎接近術(shù)前正常水平(37.76±1.07pg·ml-1),生理鹽水組和治療組與空白對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；堿燒傷角膜移植術(shù)后各組(空白對(duì)照組除外)實(shí)驗(yàn)犬角膜組織中TNF-α含量均升高,在術(shù)后28d時(shí)治療組出現(xiàn)峰值(31.99±0.84pg·ml-1)而后下降,生理鹽水組含量在術(shù)后28d后仍在增長,并在術(shù)后56d時(shí)達(dá)到37.53±0.94pg·ml-1且仍有繼續(xù)增長的趨勢(shì)；病理組織學(xué)結(jié)果顯示,術(shù)后7d：生理鹽水組角膜組織各層細(xì)胞出現(xiàn)嚴(yán)重水腫,上皮細(xì)胞層有溶解、丟失現(xiàn)象,基質(zhì)層增厚,內(nèi)有一定量新生血管生長及紅細(xì)胞侵潤,內(nèi)皮細(xì)胞部分?jǐn)嗔选G失。治療組角膜各細(xì)胞層有輕微水腫現(xiàn)象,上皮層有所增厚,有少量紅細(xì)胞侵潤,后彈力層和內(nèi)皮層結(jié)構(gòu)完整。術(shù)后28d：生理鹽水組角膜組織各層細(xì)胞水腫加劇,上皮細(xì)胞層開始出現(xiàn)斷裂脫離現(xiàn)象,基質(zhì)層內(nèi)有大量新生血管生長及紅細(xì)胞侵潤,膠原纖維原有排列被完全打亂,后彈力層與內(nèi)皮細(xì)胞層開始大量脫離和丟失。治療組術(shù)犬角膜各細(xì)胞層規(guī)則排列,水腫現(xiàn)象明顯消退,上皮層完整無丟失,基質(zhì)層纖維排列較為緊湊均勻,新生血管生長和紅細(xì)胞侵潤現(xiàn)象有所改善,后彈力層和內(nèi)皮層結(jié)構(gòu)仍保持完整。術(shù)后56d：生理鹽水組上皮細(xì)胞層幾乎完全溶解,僅存的細(xì)胞也已壞死,紅細(xì)胞以完全侵潤整個(gè)基質(zhì)層,幾乎沒有內(nèi)皮細(xì)胞存留。治療組各細(xì)胞層組織學(xué)結(jié)構(gòu)完全一致,無明顯水腫增厚現(xiàn)象,基質(zhì)層纖維均勻排列,內(nèi)皮層細(xì)胞僅少量缺失。(4)術(shù)后角膜中TNF-α基因的含量均有表達(dá)且無論是組內(nèi)或組間在不同時(shí)間段角膜TNF-α基因的表達(dá)量均呈現(xiàn)出一定的差異性,角膜TNF-α基因在不同時(shí)間段表達(dá)量與組織中含量的變化一致。 結(jié)論：(1)雷帕霉素滴眼液滴眼液對(duì)犬高危穿透性角膜移植手術(shù)能起到抗免疫排斥反應(yīng)作用,能夠明顯抑制新生血管生長,發(fā)揮強(qiáng)大的免疫抑制作用。(2) TNF-α濃度變化與裂隙燈顯微鏡觀察和病理組織切片結(jié)果一致,外周血TNF-α含量變化有可能與排斥反應(yīng)有關(guān)。(3)外周血TNF-α含量變化與局部術(shù)眼角膜組織中TNF-α含量的變化有相關(guān)性,而角膜組織中TNF-α含量的變化又與角膜組織中TNF-α mRNA的表達(dá)情況有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：犬 高危穿透性角膜移植 免疫排斥 腫瘤壞死因子-α 雷帕霉素
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R779.65
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 第一章 文獻(xiàn)綜述10-28
• 1.1 穿透性角膜移植的研究進(jìn)展10-21
• 1.2 腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的研究進(jìn)展21-25
• 1.3 藥物防治角膜移植排斥反應(yīng)的研究25-28
• 第二章 引言28-30
• 第三章 犬高危穿透性角膜移植術(shù)后TNF-α含量變化研究30-46
• 3.1 材料30-33
• 3.2 方法33-38
• 3.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析38
• 3.4 結(jié)果38-44
• 3.5 討論44-45
• 3.6 小結(jié)45-46
• 第四章 犬角膜術(shù)后病理組織學(xué)變化46-54
• 4.1 材料46-47
• 4.2 方法47-48
• 4.3 結(jié)果48-51
• 4.4 討論51-52
• 4.5 小結(jié)52-54
• 第五章 犬角膜組織術(shù)后TNF-αmRNA表達(dá)情況研究54-66
• 5.1 材料54-56
• 5.2 方法56-60
• 5.3 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析60
• 5.4 試驗(yàn)結(jié)果60-64
• 5.5 分析與討論64-65
• 5.6 小結(jié)65-66
• 第六章 全文總結(jié)和創(chuàng)新點(diǎn)66-68
• 6.1 全文結(jié)論66
• 6.2 創(chuàng)新點(diǎn)66-68
• 參考文獻(xiàn)68-74
• 附錄1 中英文縮略詞表74-75
• 附錄2 試驗(yàn)部分圖片展示75-76
• 致謝76-77
• 在校期間發(fā)表的論文77

【引證文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李婧;轉(zhuǎn)化生長因子β1對(duì)犬穿透性角膜移植后免疫排斥的影響[D];西南大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：犬高危穿透性角膜移植術(shù)后排斥反應(yīng)與TNF-α變化的相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：295726