目的探討微小RNA-326-3p（miR-326-3p）在視網(wǎng)膜祖細胞（RPCs）分化過程中的作用,旨在為干細胞移植治療視網(wǎng)膜退行性疾病研究提供新的思路。方法將RPCs隨機分為對照組（Control組）、miR-326-3p過表達組（Mimics組）和miR-326-3p敲降組（Inhibitors組）,在分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)7 d后,分別轉(zhuǎn)染miR-326-3p-Control、Mimics和Inhibitors,轉(zhuǎn)染48 h后收取細胞RNA和蛋白,通過q PCR實驗和Western blotting實驗檢測RPCs分化指標膠質(zhì)細胞標記物（GFAP）、雙極神經(jīng)元標記物（PKC-a）、視桿細胞標記物（Rhodopsin）、視錐和視桿細胞標記物（Recoverin）和中間神經(jīng)元標記物β3-微管蛋白（β3-tubulin）在3組中的表達量。結(jié)果 （1） miR-326-3p在視網(wǎng)膜祖細胞分化過程中的表達量明顯增加;（2）與Control組相比,Mimics組中miR-326-3p過表達后RPCs分化指標GFAP、PKC-a、Rhodopsin、Recoverin和β3-tubulin表達量明顯... 

【文章來源】：臨床眼科雜志. 2020,28(04)

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

qPCR和Western blotting法檢測RPCs分化過程中GFAP、PKC-a、Rhodopsin、Recov-erin和β3-tubulin的mRNA和蛋白表達水平(*示P<0.05)

RPCs分別在分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)0、1、4、7 d,qPCR實驗證明RPCs分化過程中內(nèi)源性miR-326-3p的mRNA表達水平不斷地增加，提示miR-326-3p可能在RPCs細胞分化中發(fā)揮重要作用(圖2)。三、檢測miR-326-3p過表達敲降效率

過表達miR-326-3p后，在mRNA和蛋白水平RPCs分化指標GFAP、PKC-a、Rhodopsin、Recoverin和β3-tubulin相比較于對照組都有明顯的增加，表明miR-326-3p促進RPCs分化，特別是向視網(wǎng)膜神經(jīng)元細胞分化能力增強(PKC-a、Rhodopsin、Recoverin表達量上升的更加明顯);而敲除miR-326-3p后，這些分化指標相比較于對照組都有明顯的降低，表明敲除miR-326-3p后抑制RPCs的分化(圖4)。討論


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