第一部分慢性間歇低氧內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型構(gòu)建與評(píng)估目的:構(gòu)建并評(píng)估慢性間歇低氧內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型。方法:設(shè)計(jì)并制備慢性間歇低氧細(xì)胞培養(yǎng)箱,分別與物理持續(xù)性低氧內(nèi)皮細(xì)胞模型及氯化鈷干預(yù)低氧內(nèi)皮細(xì)胞模型進(jìn)行比較。設(shè)置慢性間歇低氧細(xì)胞培養(yǎng)箱條件:1%O2濃度維持35分鐘,21%O2濃度維持25分鐘,至此1小時(shí)為一個(gè)循環(huán);設(shè)置物理持續(xù)性低氧內(nèi)皮細(xì)胞模型條件:始終維持1%O2濃度;設(shè)置氯化鈷干預(yù)低氧內(nèi)皮細(xì)胞模型條件:Co Cl2以100μmol/L加入細(xì)胞培養(yǎng)中。建模同步持續(xù)時(shí)間以慢性間歇低氧細(xì)胞模型構(gòu)建72個(gè)循環(huán)為標(biāo)準(zhǔn)。分別運(yùn)用Western blot技術(shù)檢測(cè)三組低氧內(nèi)皮細(xì)胞中Bcl2、Bax及Cyt C指標(biāo)變化。針對(duì)慢性間歇低氧內(nèi)皮細(xì)胞模型運(yùn)用DCFH-DA熒光探針檢測(cè)低氧內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)活性氧水平,運(yùn)用TUNEL染色檢測(cè)低氧內(nèi)皮細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果:成功設(shè)計(jì)并制備慢性間歇低氧細(xì)胞培養(yǎng)箱,Western Blot結(jié)果顯示,以我們?cè)O(shè)計(jì)的低氧細(xì)胞培養(yǎng)箱為建模設(shè)備,調(diào)整參數(shù)為始終維持1%O2濃度情況下,與Co Cl2干預(yù)低氧模型相比,Bax、Cyt C趨勢(shì)上稍有升高,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而慢性間歇低氧模型組與對(duì)照組... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

CIH細(xì)胞培養(yǎng)箱及控制面板

東南大學(xué)博士學(xué)位論文IH 組細(xì)胞 ROS 水平升高，細(xì)胞凋亡在確認(rèn) CIH 細(xì)胞培養(yǎng)箱可以導(dǎo)致 HUVEC 細(xì)胞損傷相關(guān)指標(biāo)變化后，針對(duì)組細(xì)胞進(jìn)行 ROS 和 TUNEL 染色，分別在熒光顯微鏡及光鏡顯微鏡下進(jìn)行，并與 NC 組進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，CIH 組細(xì)胞內(nèi) ROS 水平升高，細(xì)胞出現(xiàn)凋亡 3）。

配置不同濃度的 S1P，并利用不同濃度 S1P 對(duì) CIH 模型進(jìn)行預(yù)處理，提白，與 NC 組和 CIH 組相比，加用 S1P 后，四組細(xì)胞蛋白 Bcl2 水平較 CIH高，Bax 和 Cyt C 均降低。10nM 組與 CIH 組相比，Bcl2 有所升高（0.43±0. 0.24±0.05, P<0.05; 圖 1），Bax 蛋白水平降低（0.65±0.07 vs. 0.76±0.08, P<0 1），但與 NC 組相比仍有較大差距。而 100nM 組在經(jīng)過(guò) 100nM S1P 預(yù)處理后歷 72h CIH 干預(yù)，細(xì)胞內(nèi) Bcl2 水平高于 CIH 組和 10nM 組（0.75±0.0924±0.05, 0.75±0.09 vs. 0.43±0.06, *, #P<0.05; 圖 1），Bax 水平低于 CIH 組nM 組（0.31±0.08 vs. 0.76±0.08, 0.31±0.08 vs. 0.65±0.07, *, #P<0.05; 圖 1）， NC 組相比，Bcl2 和 Bax、Cyt C 蛋白的表達(dá)水平無(wú)明顯差異。500nM 組和 1 Bcl2 水平雖較 100nM 組有所升高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），在 Bax 和 的蛋白水平表達(dá)上也有相似的趨勢(shì)而無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。NC 組、100nM 組、500、1μM 組，四組組間均無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。


本文編號(hào)：2941802