目的：通過人肝細胞生長因子（hepatocyte growth gactor, HGF）處理人晶狀體上皮細胞株HLE-B3,體外模擬后發(fā)性白內(nèi)障（posterior capsule opacity, PCO）發(fā)生時晶狀體上皮細胞（lens epithelial cells, LECs）所處的微環(huán)境,并用不同濃度的雷帕霉素（Rapamycin, RAPA）刺激HLE-B3,觀察RAPA對HLE-B3增生、凋亡的影響,探討RAPA影響HLE-B3的生長作用的分子機制。方法：1.培養(yǎng)HLE-B3：用含有10%FBS、100U/ml青霉素和100U/ml鏈霉素的低糖DMEM體外培養(yǎng)HLE-B3,并進行傳代。2.實驗分組：常規(guī)培養(yǎng)HLE-B3細胞系,生長至80%融合后,換用無血清DMEM培養(yǎng)基,分組如下：空白對照組：僅加入單純DMEM,不加入RAPA或人HGF處理；陰性對照組（HGF組）：加入終濃度為lOng/ml的人HGF；HGF+RAPA組：用終濃度為10ng/ml的HGF處理LECs12h后,加入不同濃度的RAPA （A組：0.1ng/ml、B組：1ng/ml、C組：5ng/ml、D組10... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語/符號說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
實驗材料和方法
    1. 實驗材料
        1.1 實驗細胞
        1.2 主要試劑及溶液配制
        1.3 主要實驗器材及儀器
    2. 實驗方法
        2.1 人晶狀體上皮細胞細胞株HLE-B3的培養(yǎng)
        2.2 制作HLE-B3細胞爬片
        2.3 實驗分組
        2.4 細胞增殖活力檢測
        2.5 HLE-B3細胞病理形態(tài)學觀察
        2.6 LIVE/DEAD細胞活性檢測
        2.7 Annexin V-FITC/PI雙染法流式細胞術(shù)
        2.8 RNA干擾和瞬時轉(zhuǎn)染
        2.9 蛋白印跡分析
        2.10 細胞凋亡ELISA檢測
    3. 統(tǒng)計學方法
結(jié)果
    1. RAPA對HGF（+）LECs細胞增殖的影響
        1.1 細胞增殖活力檢測
        1.2 HLE-B3細胞病理形態(tài)學觀察
    2. RAPA對HGF（+）LECs細胞凋亡的影響
        2.1 LIVE/DEAD細胞活性檢測
        2.2 Annexin V-HTC/PI雙染法流式細胞術(shù)細胞調(diào)亡檢測
    3. JAK2/STAT3信號通路在RAPA對HGF（+）LECs細胞凋亡中的作用
        3.1 Western blot
        3.2 細胞凋亡ELISA檢測
討論
    1. RAPA對HGF（+）LECs細胞增生的影響
    2. RAPA對HGF（+）LECs細胞凋亡的影響
    3. JAK2/STAT3信號通路在RAPA誘導(dǎo)HGF（+）LECs細胞凋亡中的作用
結(jié)論
參考文獻
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述
    綜述參考文獻
致謝



本文編號：2902325