目的：通過人肝細(xì)胞生長因子（hepatocyte growth gactor, HGF）處理人晶狀體上皮細(xì)胞株HLE-B3,體外模擬后發(fā)性白內(nèi)障（posterior capsule opacity, PCO）發(fā)生時(shí)晶狀體上皮細(xì)胞（lens epithelial cells, LECs）所處的微環(huán)境,并用不同濃度的雷帕霉素（Rapamycin, RAPA）刺激HLE-B3,觀察RAPA對(duì)HLE-B3增生、凋亡的影響,探討RAPA影響HLE-B3的生長作用的分子機(jī)制。方法：1.培養(yǎng)HLE-B3：用含有10%FBS、100U/ml青霉素和100U/ml鏈霉素的低糖DMEM體外培養(yǎng)HLE-B3,并進(jìn)行傳代。2.實(shí)驗(yàn)分組：常規(guī)培養(yǎng)HLE-B3細(xì)胞系,生長至80%融合后,換用無血清DMEM培養(yǎng)基,分組如下：空白對(duì)照組：僅加入單純DMEM,不加入RAPA或人HGF處理；陰性對(duì)照組（HGF組）：加入終濃度為lOng/ml的人HGF；HGF+RAPA組：用終濃度為10ng/ml的HGF處理LECs12h后,加入不同濃度的RAPA （A組：0.1ng/ml、B組：1ng/ml、C組：5ng/ml、D組10... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語/符號(hào)說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
實(shí)驗(yàn)材料和方法
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        1.2 主要試劑及溶液配制
        1.3 主要實(shí)驗(yàn)器材及儀器
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 人晶狀體上皮細(xì)胞細(xì)胞株HLE-B3的培養(yǎng)
        2.2 制作HLE-B3細(xì)胞爬片
        2.3 實(shí)驗(yàn)分組
        2.4 細(xì)胞增殖活力檢測(cè)
        2.5 HLE-B3細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)觀察
        2.6 LIVE/DEAD細(xì)胞活性檢測(cè)
        2.7 Annexin V-FITC/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)
        2.8 RNA干擾和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
        2.9 蛋白印跡分析
        2.10 細(xì)胞凋亡ELISA檢測(cè)
    3. 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
結(jié)果
    1. RAPA對(duì)HGF（+）LECs細(xì)胞增殖的影響
        1.1 細(xì)胞增殖活力檢測(cè)
        1.2 HLE-B3細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)觀察
    2. RAPA對(duì)HGF（+）LECs細(xì)胞凋亡的影響
        2.1 LIVE/DEAD細(xì)胞活性檢測(cè)
        2.2 Annexin V-HTC/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞調(diào)亡檢測(cè)
    3. JAK2/STAT3信號(hào)通路在RAPA對(duì)HGF（+）LECs細(xì)胞凋亡中的作用
        3.1 Western blot
        3.2 細(xì)胞凋亡ELISA檢測(cè)
討論
    1. RAPA對(duì)HGF（+）LECs細(xì)胞增生的影響
    2. RAPA對(duì)HGF（+）LECs細(xì)胞凋亡的影響
    3. JAK2/STAT3信號(hào)通路在RAPA誘導(dǎo)HGF（+）LECs細(xì)胞凋亡中的作用
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：2902325