背景與目的:口咽鱗癌的發(fā)病率明顯上升,主要是人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)感染導(dǎo)致的。HPV E6蛋白可結(jié)合并降解p53,從而導(dǎo)致了口咽癌。與HPV陰性口咽癌相比,HPV陽性的口咽癌具有獨(dú)特的流行病學(xué)、分子生物學(xué)特點和更好的預(yù)后。腫瘤復(fù)發(fā)是口咽癌預(yù)后不良和死亡的主要原因。研究表明單核苷酸多態(tài)性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)可作為可靠的預(yù)后分子標(biāo)志物,然而目前仍缺乏與口咽癌復(fù)發(fā)相關(guān)的特征性SNP。鼠雙微體4(MDM4)是p53通路中的重要癌蛋白,在許多腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。由于MDM4和HPV E6蛋白均作用于p53,我們對MDM4的三個功能SNP變異與口咽癌中HPV狀態(tài)以及腫瘤復(fù)發(fā)之間的相關(guān)性進(jìn)行研究,旨在探討MDM4的SNP是否可用作預(yù)測口咽癌中HPV狀態(tài)以及腫瘤復(fù)發(fā)的生物標(biāo)志物。材料與方法·:1.收集在美國德克薩斯州大學(xué)(U.T.)MD.安德森癌癥中心就診的552例口咽癌患者的年齡、性別、種族、吸煙、飲酒狀況等資料。提取其石蠟包埋腫瘤組織DNA,采用PCR技術(shù)明確腫瘤HPV狀態(tài)。2.使用HapMap SNP公共數(shù)據(jù)庫選擇三個標(biāo)記MDM4 SNPs:rs11801299GA、rs10900598GT和rs1380576CG。從血標(biāo)本中提取DNA,使用ABI TaqMan genotyping基因分析平臺對MDM4 SNPs進(jìn)行基因分型。MDM4 SNPs與HPV狀態(tài)的相關(guān)性采用logistic回歸分析,并進(jìn)一步分層分析。3.對1008例患者進(jìn)行隨訪,主要終點事件是腫瘤復(fù)發(fā)。提取血標(biāo)本中的DNA,對三個MDM4 SNPs進(jìn)行基因分型。采用單因素和多元Cox回歸對單個/三個MDM4基因變異組合與復(fù)發(fā)狀況進(jìn)行相關(guān)性分析。4.進(jìn)一步對HPV陽性口咽癌患者的復(fù)發(fā)情況與MDM4 SNPs分別或組合后的高/低風(fēng)險組的相關(guān)性進(jìn)行分析。5.構(gòu)建質(zhì)粒、轉(zhuǎn)染、熒光素酶實驗檢測MDM4rs11801299 A/G和MDM4rs10900598 T/G基因型的HPV陽性和HPV陰性細(xì)胞株中MDM4表達(dá)水平的差異。結(jié)果:1.在552例可明確HPV狀態(tài)的口咽癌患者中,HPV陽性占多數(shù)。HPV陽性患者更常見于男性和非吸煙者。2.單個/三個MDM4基因變異組合均與口咽癌的HPV狀態(tài)顯著相關(guān),多元回歸分析中差異仍顯著,而且在年輕、非吸煙者和不飲酒患者中相關(guān)性更顯著。3.1008例口咽鱗癌患者中共181例腫瘤復(fù)發(fā),總的精算復(fù)發(fā)率約20%。年齡、種族、吸煙或飲酒、合并癥、治療方式均與無瘤生存期顯著相關(guān)。單因素和多元Cox回歸分析發(fā)現(xiàn)單個/三個MDM4基因變異組合均與腫瘤復(fù)發(fā)風(fēng)險顯著相關(guān)。4.324例HPV陽性口咽癌患者中45例腫瘤復(fù)發(fā),MDM4基因變異與復(fù)發(fā)風(fēng)險顯著相關(guān),而且比全部口咽癌的分析結(jié)果更為明顯。5.當(dāng)MDM4 3'UTR熒光素酶報告質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染到HPV陽性的UMSCC47細(xì)胞系或HPV陰性的UMSCC4細(xì)胞系后,攜帶rs11801299不同等位基因的細(xì)胞中的熒光素酶活性水平存在顯著差異,而攜帶rs10900598不同等位基因的細(xì)胞中的熒光素酶活性水平則呈臨界的顯著差異。結(jié)論:1.口咽癌患者中HPV陽性者占大多數(shù)。2.MDM4 SNPs可能成為預(yù)測口咽癌中HPV狀態(tài)的分子標(biāo)記物,特別是在非西班牙裔白人、從不吸煙者和從不飲酒者中。3.三個MDM4SNPs可單獨(dú)、或聯(lián)合地作為口咽癌復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險因素。4.在HPV陽性患者中,MDM4SNPs與口咽癌復(fù)發(fā)風(fēng)險的相關(guān)性更為明顯。5.MDM4中的SNP變異可能通過改變MDM4的表達(dá)水平從而影響了 口咽癌的復(fù)發(fā)風(fēng)險。
【學(xué)位單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R739.63
【部分圖文】：

將報告熒光基團(tuán)切割下來，避免了３’端淬滅熒光基團(tuán)的淬滅作用，從而發(fā)出熒光。??兩個探針的５’端標(biāo)有不同的熒光（ＶＩＣ或ＦＡＭ），３’端標(biāo)有ＭＧＢ淬滅基團(tuán)結(jié)合??體。根據(jù)檢測到的不同熒光，可以判斷相應(yīng)樣本的ＳＮＰ等位基因型（見圖２－１）。??３４??

圖２－２?ＴａｑＭａｎ探針法ＳＮＰ基因分型軟件分析示意圖??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｅｘａｍｐｌｅ?ｏｆ?ａｎ?ａｌｌｅｌｉｃ?ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ?ｐｌｏｔ??１．４統(tǒng)計分析??使用卡方檢驗檢測ＨＰＶ１６陽性和ＨＰＶ?１６陰性患者的人口學(xué)特征、吸煙和酒狀況以及ＭＤＭ４基因型之間的差異。通過計算比值比（ＯＲ）和９５％置信區(qū)（ＣＩ），使用單變量和多變量ｌｏｇｉｓｔｉｃ回歸分析來估計口咽癌中ＭＤＭ４基因型和瘤ＨＰＶ１６陽性之間的關(guān)聯(lián)。在多因素Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回歸模型中，按年齡，性別，種吸煙和飲酒狀況分為基因型進(jìn)一步分組。使用統(tǒng)計分析系統(tǒng)軟件（版本９．３；?ＳＡＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，?Ｃａｒｙ，?ＮＣ）進(jìn)行所有的統(tǒng)計分析。所有的檢驗都是雙側(cè)的，０．０５的Ｐ值被認(rèn)為是顯著的。??

２．５?ＭＤＭ４多態(tài)性的基因型與腫瘤復(fù)發(fā)風(fēng)險之間的相關(guān)性??我們采用Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ法分析，發(fā)現(xiàn)ＭＤＭ４－ｒｓｌ０９００５９８?ＧＴ／ＴＴ基因型患者??的無瘤生存期顯著低于ＧＧ基因型（ｌｏｇ－ｒａｎｋ，?Ｐ?＝?０．０００２）（見圖３－１）。??ＭＤＭ４－ｒｓｌｌ８０１２９９?ＧＧ基因型患者的無瘤生存期顯著低于ＡＧ?／?ＡＡ基因型??（ｌｏｇ－ｒａｎｋ，?Ｐ＜０．００１）。（見圖３－２）??￣?ＧＧ?????ｔｌ?０．７５?＇？一？？？？一＇？？？??????｜?ＧＴ／ＴＴ??｜??｜?〇５〇??Ｌｏｇ－ｒａｎｋ：?ｐ＝０．０００２??｜?０，２５：??０：００＾??????????＇???〇?２５?５０?７５?１００?１２５?１５０?１７５??Ｔｉｍｅ?（ｍｏｎｔｈｓ）??
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本文編號：2877376