本文關(guān)鍵詞：HPLC法測定兔角膜基質(zhì)中核黃素含量的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的建立兔角膜基質(zhì)中核黃素含量測定的高效液相色譜（high performance liquidchromatograph，HPLC）分析方法，并分析該方法的專屬性、靈敏度和準(zhǔn)確性。 方法兔角膜組織勻漿經(jīng)加熱孵育和10%三氯乙酸去蛋白后離心，組織上清液經(jīng)C18-SPE柱固相萃取后檢測。高效液相色譜條件：色譜柱柱選擇SinaChrom ODS-BP色譜柱（5μm，250mm×4.6mm ID）；以甲醇-純水（體積比為40:60）為流動相，pH=7.0；流速：0.1mL/min；熒光檢測器激發(fā)波長425nm，發(fā)射波長525nm。 結(jié)果核黃素在1.0×10-6～1.0×10-4mg/mL范圍與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（r2=0.999584），最低檢測限達(dá)到2×10-8mg/mL，精密度結(jié)果顯示：相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）=0.86%（n=10）；方法穩(wěn)定性檢測得到樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性RSD=0.51%；測得的角膜樣品核黃素加標(biāo)平均回收率為99.3%，RSD為3.7%。 結(jié)論本實(shí)驗(yàn)研究中建立的樣品前處理方法簡單，且HPLC方法專屬性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確性好，可作為紫外線A/核黃素角膜膠原交聯(lián)法中角膜基質(zhì)內(nèi)核黃素含量測定的定量方法。 目的用高效液相色譜（HPLC）分析法檢測不同條件下角膜基質(zhì)中核黃素的含量，分析比較去上皮、不去上皮以及使用促滲劑乙二胺四乙酸（ethylene diaminetetraacetic acid，EDTA）對核黃素在角膜基質(zhì)滲透的影響，初步探討EDTA在跨角膜上皮膠原交聯(lián)中的可行性依據(jù)。 方法新西蘭白兔15只，隨機(jī)分為去上皮組、EDTA組和不去上皮組3組，每組5只，處理：去上皮組去除角膜完整上皮，EDTA組不去上皮點(diǎn)0.5%EDTA1h，不去上皮組不做處理，之后各組兔眼分別滴0.1%核黃素+20%右旋糖酐30分鐘，隨后去除EDTA、不去上皮組角膜完整上皮，鉆取各分組兔眼直徑8.5mm角膜中央組織，制取角膜組織勻漿上清液，在建立好的高效液相色譜分析法條件下對各組組織勻漿上清液進(jìn)行核黃素定量檢測。 結(jié)果0.1%核黃素+20%右旋糖酐點(diǎn)眼30分鐘后去上皮組角膜基質(zhì)中核黃素含量為23.54±1.61μg/g組織，EDTA組為2.04±0.25μg/g組織，不去上皮組為1.44±0.06μg/g組織。去上皮組、EDTA組、不去上皮組角膜樣品中核黃素含量的總體差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=1792.839，P=0.000）。去上皮組和EDTA組角膜樣品中核黃素含量較不去上皮組明顯增多，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=43.408、t=7.484，p0.05），去上皮組與EDTA組比較，差異亦有統(tǒng)計學(xué)意義（t=41.780，p0.05）。除去上皮組角膜基質(zhì)內(nèi)核黃素含量超過15μg/g組織以外，，其余兩組均未達(dá)到此理論值。 結(jié)論交聯(lián)術(shù)前的去角膜上皮能充分提高核黃素在角膜基質(zhì)內(nèi)的彌散有利于經(jīng)典膠原交聯(lián)法的順利開展。促滲劑EDTA雖能有效促進(jìn)核黃素在角膜的滲透，可為研究EDTA條件下的跨角膜上皮膠原交聯(lián)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，但尚不能取代去角膜上皮對核黃素在角膜滲透的作用，提高其促滲效果的條件還有待進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：HPLC 核黃素 角膜膠原交聯(lián) 回收率 高效液相色譜分析法 角膜 膠原交聯(lián) 核黃素
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R772.2;O657.72
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 第一部分 兔角膜基質(zhì)中核黃素含量測定的 HPLC 方法建立12-27
• 1 前言12-15
• 2 材料和方法15-19
• 2.1 材料15
• 2.2 方法15-19
• 2.3 統(tǒng)計學(xué)處理19
• 3 結(jié)果19-23
• 3.1 專屬性19-21
• 3.2 線性關(guān)系及靈敏度21-22
• 3.3 精密度22
• 3.4 穩(wěn)定性22
• 3.5 加標(biāo)回收率22-23
• 3.6 角膜樣品檢測結(jié)果23
• 4 討論23-24
• 5 結(jié)論24-25
• 參考文獻(xiàn)25-27
• 第二部分 三種條件下兔角膜基質(zhì)中核黃素含量測定27-49
• 1 前言27-34
• 2 材料與方法34-35
• 2.1 材料34
• 2.2 方法34-35
• 2.3 統(tǒng)計學(xué)處理35
• 3 結(jié)果35-41
• 3.1 各組角膜組織的變化及檢測色譜曲線35-40
• 3.2 各組角膜組織中核黃素的含量40-41
• 4 討論41-44
• 5 結(jié)論44
• 參考文獻(xiàn)44-49
• 附錄49-51
• 致謝51-52
• 綜述52-62
• 參考文獻(xiàn)59-62

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：HPLC法測定兔角膜基質(zhì)中核黃素含量的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：285403