【摘要】：鼻咽癌在我國屬于高發(fā)惡性腫瘤之一,且發(fā)病率為耳鼻咽喉惡性腫瘤之首。在中國南方和東南亞地區(qū),尤為高發(fā)。鼻咽癌的病因學研究表明:遺傳因素、EB病毒感染、環(huán)境因素及飲食習慣與鼻咽癌的發(fā)生有密切關系。目前鼻咽癌治療還是以放療為主,因其發(fā)病位置的特殊性以及對放射的高敏性。隨著治療手段的不斷改進,分子靶向治療成為治療鼻咽癌的新手段。將分子靶向治療與放化療聯(lián)合,可明顯提高治療效果。鼻咽癌的發(fā)生是一個多階段、多基因和多步驟的復雜過程,尋找其發(fā)生發(fā)展過程中的關鍵靶點,已成為鼻咽癌靶向治療研究的熱點。STIL基因是中心粒復制的必要組分,其表達水平與中心粒的數(shù)量有密切聯(lián)系。而中心體的異常又會導致分裂時染色體出現(xiàn)異倍化現(xiàn)象。腫瘤的普遍特征包括了中心體異常和染色體不穩(wěn)定性,因此STIL基因在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中可能起重要作用。研究指出,STIL只在增殖細胞中表達,且在癌細胞中與轉移和預后差相關。另有不少研究表明,STIL基因與卵巢癌、胰腺癌、肺癌和白血病等多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關。敲減STIL基因可以有效抑制癌細胞的增殖,但目前還沒有見到有關STIL基因與鼻咽癌之間的關系的研究報道。本課題前期通過轉錄組芯片對鼻咽癌及其癌旁組織進行分析,挑選出在癌組織中顯著表達上調的基因,利用生物信息學結合文獻篩查,初篩出34個基因。在此基礎上,采用qPCR檢測和HCS細胞增殖篩選方法進一步驗證,復篩出對鼻咽癌CNE-2Z細胞增殖抑制陽性的基因,再對復篩出的基因在臨床樣本組織中的表達進行檢測,最終確認目的基因進行后續(xù)研究。通過構建目的基因的RNA干擾慢病毒載體,感染鼻咽癌細胞株CNE-2Z,觀察其對細胞生物學行為的影響。得出的結果如下:1)在鼻咽癌CNE-2Z細胞中進行qPCR檢測,篩選出的34個與鼻咽癌可能有關的基因中有32個基因高表達;2)選取32個基因中表達水平前20的基因進行HCS細胞增殖篩選,以增殖檢測第5天、Ctrl組(陰性對照組)細胞計數(shù)倍數(shù)值比實驗組細胞計數(shù)倍數(shù)值的Fold change值為判斷依據(jù)。當Fold change≥2.0時,即該實驗組細胞相比Ctrl組細胞,細胞增殖顯著減緩,篩選出KLHL42和STIL基因;3)qPCR檢測KLHL42和STIL基因在鼻咽癌組織及其癌旁組織中的表達,KLHL42在4對強參考和4對弱參考樣本中表現(xiàn)為上調,STIL在4對強參考和3對弱參考樣本中表現(xiàn)為上調。參考前期的mRNA芯片結果,確定了STIL基因進行下游實驗;4)成功構建了以STIL為靶點的RNA干擾慢病毒載體;5)鼻咽癌細胞在慢病毒質粒感染后,CNE-2Z細胞中STIL基因的mRNA和蛋白表達水平顯著被抑制,同時抑制細胞增殖和誘導細胞凋亡,且還影響細胞周期�？傊�,本研究證實了STIL基因可影響鼻咽癌細胞CNE-2Z的增殖,表明STIL基因有望作為鼻咽癌治療的靶點,為鼻咽癌的分子靶向治療提供新的靶點。
【圖文】：

華南理工大學碩士學位論文出現(xiàn)位點特異性重排。SCL 基因編碼生成造血轉錄因子，其啟動子區(qū)和 SIL 基因的編區(qū)被刪除引起SIL和STIL基因發(fā)生重排。重排的結果是1號染色體上STIL基因的5’ 端 SCL 基因的編碼區(qū)并列部分發(fā)生中間缺失[27]。如圖 1-1 所示，形成的 STIL/SCL 融合RNA 是 STIL 基因 1 號外顯子和 SCL 3 號外顯子以頭尾相接的方式連接。1 號外顯子 3 號外顯子都處在 5’UTR 區(qū)，導致 STIL 基因的啟動子和增強子進一步促使 SCL 全長因的表達。正常情況下，STIL 基因在 T 淋巴細胞中表達，，而 SCL 基因并不表達。但當 STIL 基因驅使 SCL 基因表達，白血病 T 細胞發(fā)生 STIL/SCL 重排后，SCL 基因即達。有報道指出 T 淋巴細胞中 SCL 基因的錯誤表達具有轉化活性[28-30]。

第一章 緒論STIL 蛋白表達水平開始上升（在 G1晚期和 S 早期）。當 STIL 蛋白的濃度在細胞質中達到一定水平時，新的子代中心粒開始招募細胞質中的 STIL 蛋白，進行下一輪的中心粒（中心體）復制。為了對中心粒（中心體）的復制機制了解的更為透徹，Moyer[34]等通過在人類細胞中使用基因編輯技術構建化學遺傳系統(tǒng)，利用 ATP 類似物特異性抑制內(nèi)源性 PLK4。如圖 1-2 所示，從中證明了 STIL 定位于中心粒上需要 PLK4 的參與。PLK4 通過自我磷酸化激活，再磷酸化 STIL，促進中心粒裝配分兩步。首先，PLK4 活化促進 STIL 招募到中心粒上；其次，STIL 通過 PLK4 的引導與 SAS6 的 C 末端直接結合。這一研究揭示了細胞周期通過調控 STIL 的蛋白量從而影響 PLK4 激活時間的分子基礎。
【學位授予單位】：華南理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R739.63

【參考文獻】

相關期刊論文 前5條

1 王舉;張勇;;STIL與惡性腫瘤相關性及機制的研究進展[J];國際外科學雜志;2015年09期

2 李智濤;吳逸明;;中心體異常擴增和染色體不穩(wěn)定性[J];生物技術通報;2010年02期

3 莫立根;鄺國乾;羅元;楊榮寧;;鼻咽癌雌孕激素受體表達與遠處轉移的相關性[J];臨床耳鼻咽喉科雜志;2006年11期

4 王樹森;管忠震;向燕群;汪波;林桐榆;姜文奇;張力;張惠忠;侯景輝;;鼻咽癌組織中EGFR和p-ERK蛋白表達的檢測及意義[J];中華腫瘤雜志;2006年01期

5 莫立根,王會河,黃光武,趙惠柳,鄺國乾;Tiam1基因表達與鼻咽癌浸潤轉移的關系[J];臨床耳鼻咽喉科雜志;2005年17期

本文編號：2663432