【摘要】：目的初步探討環(huán)氧化酶-2(COX-2)選擇性抑制劑塞來昔布對(duì)人喉癌Hep-2細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡的作用及可能的機(jī)制并觀察其引起的自噬現(xiàn)象。方法用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法,檢測(cè)塞來昔布以不同濃度(0~100μmol/L)及作用時(shí)間(0~72 h)處理Hep-2細(xì)胞后細(xì)胞增殖活力的變化;流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度及時(shí)間塞來昔布處理后Hep-2細(xì)胞的凋亡率;透射電鏡觀察塞來昔布處理后的細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變;Western blotting檢測(cè)凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)移位改變。結(jié)果塞來昔布呈時(shí)間和濃度依賴性地抑制Hep-2細(xì)胞的增殖;誘導(dǎo)喉癌細(xì)胞凋亡并呈濃度依賴性;藥物處理72 h與48 h相比凋亡率的改變無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),藥物處理72 h后在電鏡下觀察到自噬現(xiàn)象;AIF蛋白逐漸從線粒體釋放、移位到細(xì)胞核。結(jié)論塞來昔布可誘導(dǎo)喉癌細(xì)胞凋亡,其機(jī)制涉及非caspase依賴的AIF機(jī)制,Hep-2細(xì)胞產(chǎn)生的自噬可能會(huì)對(duì)抗塞來昔布誘導(dǎo)的凋亡。
【圖文】：

趙永強(qiáng)，等．COX-2選擇性抑制劑誘導(dǎo)人喉癌Hep-2細(xì)胞凋亡及自噬的體外研究41Hep-2細(xì)胞的活力均有不同程度的下降(P均＜0．05)，細(xì)胞增殖受抑制且呈濃度依賴性(圖1B)。圖1塞來昔布處理Hep-2細(xì)胞后的增殖抑制率A:50μmol/L塞來昔布處理Hep-2細(xì)胞不同時(shí)間;B:不同濃度塞來昔布處理Hep-2細(xì)胞24h。*P＜0．05vs0h;△P＜0．05vs0μmol/L。Fig．1InhibitionrateofHep-2cellsafterthetreatmentofcelecoxibA:Hep-2cellsweretreatedwith50μmol/Lcelecoxibfordifferenthours;B:Hep-2cellsweretreatedwithdifferentdosesofcelecoxibfor24h．*P＜0．05vs0h;△P＜0．05vs0μmol/L．2．2塞來昔布作用后Hep-2細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化如圖2所示，溶劑對(duì)照組Hep-2細(xì)胞核形態(tài)完整，有2個(gè)異形性的核仁，染色質(zhì)聚集于核仁，核膜完整，無自噬空泡或自噬體(圖2A);塞來昔布作用48h后，細(xì)胞核內(nèi)完整的核仁結(jié)構(gòu)消失，染色質(zhì)凝集并散布或邊集于細(xì)胞核，核膜不規(guī)則擴(kuò)張，出現(xiàn)凋亡改變，但無自噬空泡或自噬體(圖2B);塞來昔布作用72h后，可見自噬改變:在胞漿的多個(gè)位置出現(xiàn)有膜結(jié)構(gòu)包繞的自噬空泡和自噬體(圖2C箭頭所示)。圖2塞來昔布作用后Hep-2細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化(透射電鏡下)A:溶劑對(duì)照組(×3000);B:48h(×5000);C:72h(×12000)。Fig．2UltrastructurechangesofHep-2cellstreatedwithcelecoxib(underelectronmicroscope)A:Controlgroup(×3000);B:48h(×5000);C:72h(×12000)．2．3塞來昔布誘導(dǎo)Hep-2細(xì)胞凋亡如圖3所示，流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果中，凋亡象限圖以Q2與Q4之和計(jì)算凋亡率。塞來昔布作用24h后，30～100μmol/L塞來昔布誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的比例逐漸升高，均高于溶劑對(duì)照組(P均＜0．05)，相鄰兩濃度間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0．05)。50μmol/L塞來昔布

南陸?P均＜0．05)，細(xì)胞增殖受抑制且呈濃度依賴性(圖1B)。圖1塞來昔布處理Hep-2細(xì)胞后的增殖抑制率A:50μmol/L塞來昔布處理Hep-2細(xì)胞不同時(shí)間;B:不同濃度塞來昔布處理Hep-2細(xì)胞24h。*P＜0．05vs0h;△P＜0．05vs0μmol/L。Fig．1InhibitionrateofHep-2cellsafterthetreatmentofcelecoxibA:Hep-2cellsweretreatedwith50μmol/Lcelecoxibfordifferenthours;B:Hep-2cellsweretreatedwithdifferentdosesofcelecoxibfor24h．*P＜0．05vs0h;△P＜0．05vs0μmol/L．2．2塞來昔布作用后Hep-2細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化如圖2所示，溶劑對(duì)照組Hep-2細(xì)胞核形態(tài)完整，有2個(gè)異形性的核仁，染色質(zhì)聚集于核仁，核膜完整，無自噬空泡或自噬體(圖2A);塞來昔布作用48h后，細(xì)胞核內(nèi)完整的核仁結(jié)構(gòu)消失，染色質(zhì)凝集并散布或邊集于細(xì)胞核，核膜不規(guī)則擴(kuò)張，出現(xiàn)凋亡改變，但無自噬空泡或自噬體(圖2B);塞來昔布作用72h后，可見自噬改變:在胞漿的多個(gè)位置出現(xiàn)有膜結(jié)構(gòu)包繞的自噬空泡和自噬體(圖2C箭頭所示)。圖2塞來昔布作用后Hep-2細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化(透射電鏡下)A:溶劑對(duì)照組(×3000);B:48h(×5000);C:72h(×12000)。Fig．2UltrastructurechangesofHep-2cellstreatedwithcelecoxib(underelectronmicroscope)A:Controlgroup(×3000);B:48h(×5000);C:72h(×12000)．2．3塞來昔布誘導(dǎo)Hep-2細(xì)胞凋亡如圖3所示，流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果中，凋亡象限圖以Q2與Q4之和計(jì)算凋亡率。塞來昔布作用24h后，30～100μmol/L塞來昔布誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的比例逐漸升高，均高于溶劑對(duì)照組(P均＜0．05)，，相鄰兩濃度間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0．05)。50μmol/L塞來昔布處理細(xì)胞不同時(shí)間后，凋亡率均高于0h對(duì)照組(P均＜0．05);塞來昔布處理12、24、48h，凋亡率隨時(shí)間延長(zhǎng)

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本文編號(hào)：2576941