【摘要】：目的初步探討環(huán)氧化酶-2(COX-2)選擇性抑制劑塞來昔布對人喉癌Hep-2細胞誘導凋亡的作用及可能的機制并觀察其引起的自噬現(xiàn)象。方法用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法,檢測塞來昔布以不同濃度(0~100μmol/L)及作用時間(0~72 h)處理Hep-2細胞后細胞增殖活力的變化;流式細胞儀檢測不同濃度及時間塞來昔布處理后Hep-2細胞的凋亡率;透射電鏡觀察塞來昔布處理后的細胞超微結構改變;Western blotting檢測凋亡誘導因子(AIF)移位改變。結果塞來昔布呈時間和濃度依賴性地抑制Hep-2細胞的增殖;誘導喉癌細胞凋亡并呈濃度依賴性;藥物處理72 h與48 h相比凋亡率的改變無統(tǒng)計學意義(P0.05),藥物處理72 h后在電鏡下觀察到自噬現(xiàn)象;AIF蛋白逐漸從線粒體釋放、移位到細胞核。結論塞來昔布可誘導喉癌細胞凋亡,其機制涉及非caspase依賴的AIF機制,Hep-2細胞產(chǎn)生的自噬可能會對抗塞來昔布誘導的凋亡。
【圖文】：

趙永強，等．COX-2選擇性抑制劑誘導人喉癌Hep-2細胞凋亡及自噬的體外研究41Hep-2細胞的活力均有不同程度的下降(P均＜0．05)，細胞增殖受抑制且呈濃度依賴性(圖1B)。圖1塞來昔布處理Hep-2細胞后的增殖抑制率A:50μmol/L塞來昔布處理Hep-2細胞不同時間;B:不同濃度塞來昔布處理Hep-2細胞24h。*P＜0．05vs0h;△P＜0．05vs0μmol/L。Fig．1InhibitionrateofHep-2cellsafterthetreatmentofcelecoxibA:Hep-2cellsweretreatedwith50μmol/Lcelecoxibfordifferenthours;B:Hep-2cellsweretreatedwithdifferentdosesofcelecoxibfor24h．*P＜0．05vs0h;△P＜0．05vs0μmol/L．2．2塞來昔布作用后Hep-2細胞的超微結構變化如圖2所示，溶劑對照組Hep-2細胞核形態(tài)完整，有2個異形性的核仁，染色質聚集于核仁，核膜完整，無自噬空泡或自噬體(圖2A);塞來昔布作用48h后，細胞核內(nèi)完整的核仁結構消失，染色質凝集并散布或邊集于細胞核，核膜不規(guī)則擴張，出現(xiàn)凋亡改變，但無自噬空泡或自噬體(圖2B);塞來昔布作用72h后，可見自噬改變:在胞漿的多個位置出現(xiàn)有膜結構包繞的自噬空泡和自噬體(圖2C箭頭所示)。圖2塞來昔布作用后Hep-2細胞超微結構的變化(透射電鏡下)A:溶劑對照組(×3000);B:48h(×5000);C:72h(×12000)。Fig．2UltrastructurechangesofHep-2cellstreatedwithcelecoxib(underelectronmicroscope)A:Controlgroup(×3000);B:48h(×5000);C:72h(×12000)．2．3塞來昔布誘導Hep-2細胞凋亡如圖3所示，流式細胞儀檢測結果中，凋亡象限圖以Q2與Q4之和計算凋亡率。塞來昔布作用24h后，30～100μmol/L塞來昔布誘導細胞凋亡的比例逐漸升高，均高于溶劑對照組(P均＜0．05)，相鄰兩濃度間的差異均有統(tǒng)計學意義(P均＜0．05)。50μmol/L塞來昔布

南陸?P均＜0．05)，細胞增殖受抑制且呈濃度依賴性(圖1B)。圖1塞來昔布處理Hep-2細胞后的增殖抑制率A:50μmol/L塞來昔布處理Hep-2細胞不同時間;B:不同濃度塞來昔布處理Hep-2細胞24h。*P＜0．05vs0h;△P＜0．05vs0μmol/L。Fig．1InhibitionrateofHep-2cellsafterthetreatmentofcelecoxibA:Hep-2cellsweretreatedwith50μmol/Lcelecoxibfordifferenthours;B:Hep-2cellsweretreatedwithdifferentdosesofcelecoxibfor24h．*P＜0．05vs0h;△P＜0．05vs0μmol/L．2．2塞來昔布作用后Hep-2細胞的超微結構變化如圖2所示，溶劑對照組Hep-2細胞核形態(tài)完整，有2個異形性的核仁，染色質聚集于核仁，核膜完整，無自噬空泡或自噬體(圖2A);塞來昔布作用48h后，細胞核內(nèi)完整的核仁結構消失，染色質凝集并散布或邊集于細胞核，核膜不規(guī)則擴張，出現(xiàn)凋亡改變，但無自噬空泡或自噬體(圖2B);塞來昔布作用72h后，可見自噬改變:在胞漿的多個位置出現(xiàn)有膜結構包繞的自噬空泡和自噬體(圖2C箭頭所示)。圖2塞來昔布作用后Hep-2細胞超微結構的變化(透射電鏡下)A:溶劑對照組(×3000);B:48h(×5000);C:72h(×12000)。Fig．2UltrastructurechangesofHep-2cellstreatedwithcelecoxib(underelectronmicroscope)A:Controlgroup(×3000);B:48h(×5000);C:72h(×12000)．2．3塞來昔布誘導Hep-2細胞凋亡如圖3所示，流式細胞儀檢測結果中，凋亡象限圖以Q2與Q4之和計算凋亡率。塞來昔布作用24h后，30～100μmol/L塞來昔布誘導細胞凋亡的比例逐漸升高，均高于溶劑對照組(P均＜0．05)，，相鄰兩濃度間的差異均有統(tǒng)計學意義(P均＜0．05)。50μmol/L塞來昔布處理細胞不同時間后，凋亡率均高于0h對照組(P均＜0．05);塞來昔布處理12、24、48h，凋亡率隨時間延長

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