【摘要】：目的:觀察視神經(jīng)橫斷后大鼠視網(wǎng)膜中多巴胺能無長突細胞上酪氨酸羥化酶的表達變化,并探討暗飼養(yǎng)對這一表達變化的影響及意義。 方法: SD大鼠144只隨機分為正常組(12只)、假手術組(12只)及實驗組(120只)。實驗組動物于右側(cè)眼球后極0.5cm處視神經(jīng)鞘內(nèi)切斷視神經(jīng),并隨機分為正常晝夜循環(huán)飼養(yǎng)組及暗飼養(yǎng)組,存活時間隨機分為1、3、5、7、14d,共五大組(每組24只)。每個時間點又分為兩個亞組(每組12只)。采用免疫組織化學、western blot等形態(tài)學、生物化學方法觀察視神經(jīng)橫斷后TH表達變化和突觸顆粒改變,以及暗飼養(yǎng)對其的影響。 結(jié)果:在正常大鼠視網(wǎng)膜,TH的表達主要在內(nèi)網(wǎng)層,內(nèi)核層可見少量陽性顆粒。假手術組與正常組中TH表達相近。視神經(jīng)切斷后正常晝夜循環(huán)飼養(yǎng)組1、3、5、7、14d的TH表達與正常組相比,1、3、5d時持續(xù)減少,5d時達最低值,7d時TH陽性面積恢復至正常水平,14d時陽性面積又有降低;視神經(jīng)切斷后暗飼養(yǎng)組1、3、5、7、14d的TH表達與正常組相比,1d時TH的陽性面積為最低值,3、5、7d持續(xù)增加,5、7dTH陽性面積達到正常水平,14d時,TH陽性面積減少。免疫熒光染色法計數(shù)視網(wǎng)膜中單位面積下TH陽性突觸顆粒數(shù),變化趨勢與免疫組織化學結(jié)果基本一致,14d時,TH陽性突觸顆粒數(shù)未見減少。 western blot檢測結(jié)果與免疫組化基本一致。視神經(jīng)切斷后正常晝夜循環(huán)飼養(yǎng)組,與正常組相比,1、3、5d時TH蛋白質(zhì)表達水平持續(xù)下調(diào),5d時達最低值,7、14d時蛋白質(zhì)表達水平明顯上調(diào),但并未達到正常水平;視神經(jīng)切斷后暗飼養(yǎng)組,與正常組相比,1d組TH蛋白質(zhì)表達水平達最低值,3、5、7d蛋白質(zhì)表達水平持續(xù)上調(diào),5、7、14d時TH蛋白質(zhì)表達水平達到正常水平。 結(jié)論:視神經(jīng)切斷后無長突細胞TH表達呈應激性反應;暗飼養(yǎng)能在一定程度上維持視網(wǎng)膜內(nèi)突觸潰變關鍵期的TH表達強度。
【圖文】：

表 2 視神經(jīng)橫斷后 DR 組視網(wǎng)膜 TH 的表達陽性面積（xˉ±s，n=6）組別 正常飼養(yǎng)組（%）Nor 23.87±1.201d 12.83±0.62*3d 18.29±2.99*5d 21.76±0.987d 24.54±2.1114d 15.78±1.38**，與正常飼養(yǎng)組相比，p<0.05各時間點正常晝夜循環(huán)組與暗飼養(yǎng)組進行組內(nèi)比較，暗飼養(yǎng)組與正常晝夜循環(huán)飼養(yǎng)組相比，1d 時 TH 的陽性面積比后者少、3d、5d 時 TH 的陽性面積比后者多其差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），如圖 5。

圖 8 ONT 后 DC 組與 DR 組 TH 陽性顆粒數(shù)目比較nor：正常組；1d、3d、5d、7d、14d 為視神經(jīng)橫斷后各組存活時間（*，，p<0.01）2.2 視網(wǎng)膜 TH 蛋白質(zhì)表達水平的 western blot 檢測為了檢測視神經(jīng)橫斷后整個視網(wǎng)膜內(nèi) TH 蛋白質(zhì)表達水平的變化，取相應時間點大鼠視網(wǎng)膜勻漿進行 western blot 檢測，結(jié)果與免疫組化基本一致。表 4 視網(wǎng)膜內(nèi)中酪氨酸羥化酶 western 陽性相對值統(tǒng)計表（xˉ±s，n=6）組別 正常飼養(yǎng)組 暗飼養(yǎng)組Nor 0.95±0.051 0.69±0.0061d 0.44±0.055* 0.34±0.008*3d 0.28±0.017* 0.45±0.027*5d 0.11±0.031* 0.64±0.0097d 0.18±0.032* 0.70±0.01614d 0.41±0.030* 0.69±0.060
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R774.1

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本文編號：2562376