【摘要】：喉癌是頭頸部最常見的惡性腫瘤,在我國該病約占全身腫瘤的1%～5%,其病理類型以鱗狀細胞癌為主,占全部喉癌的93%～99%。我國北方地區(qū)喉癌的發(fā)病率較高,發(fā)病年齡50～60歲為最多,男性的發(fā)病率高于女性。近年來,隨著工業(yè)污染的加重,喉癌的發(fā)病率有明顯的上升趨勢。喉癌治療涉及手術、放射治療、抗腫瘤藥物治療和基因治療等綜合措施。隨著診斷和治療水平的不斷進步,喉癌患者手術后喉功能保留率、生活質量及5年生存率均有了較大的提高,但是晚期喉癌患者的治療效果仍不盡如人意,局部復發(fā)和轉移仍為喉癌患者術后5年內(nèi)死亡的主要原因。作為喉癌早期治療的微創(chuàng)手術,也要求對喉癌早期診斷和治療預后有正確的估計,以盡量減少創(chuàng)傷,保留患者的喉功能。因此,作為臨床應用基礎研究的目的之一,探討與喉癌發(fā)生、發(fā)展的相關因素,以期尋找一個有效的檢測指標以協(xié)助診斷、盡早的區(qū)分其病理類型,了解病變的范圍以預測腫瘤的預后,有助于確定合理的治療方案和治療預期。 喉腔黏膜的上皮細胞發(fā)生癌變的具體機制不明,可能與吸煙、飲酒、環(huán)境污染、病毒感染等因素有關。隨著對細胞調控認識的不斷深入,研究發(fā)現(xiàn)：細胞周期的調控異常是癌癥發(fā)病的一個重要環(huán)節(jié),細胞周期蛋白(Cyclins)作為細胞周期的正向調控因素,控制細胞周期的進程,其表達水平具有細胞周期依賴性,是調節(jié)細胞活動的重要蛋白質。Cyclins的異常表達是導致細胞周期調控機制受到破壞的主要因素之一,與惡性腫瘤的發(fā)生密切相關。Cyclins在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中所扮演的角色日益成為人們關注的焦點,認為：癌癥等惡性腫瘤可能是一類細胞周期性疾病。 Ki-67是增殖性細胞核的標記物,代表細胞增殖水平,目前認為：Ki-67的功能與細胞有絲分裂有關。分子生物學研究表明：細胞過度分裂與增殖是腫瘤惡變的重要環(huán)節(jié)。Ki-67在G1后期出現(xiàn),S、G2期升高,M期達峰值,只參與增生細胞核反應,于GO期消失,進入G1期時開始表達至有絲分裂后迅速減少,到GO期則不表達。許多研究表明：Ki-67蛋白表達的精確調控、分布,與很多惡性腫瘤的發(fā)展、轉移、預后,均具相關性,是細胞增殖、完成細胞周期所不可或缺的,是檢測腫瘤細胞增殖活性的重要指標,可作為腫瘤預后的經(jīng)典標記物。Ki-67蛋白臨床檢測已被廣泛開展,但是在喉腫瘤預后及治療方面的研究應用在近幾年才被逐漸報道。 本研究通過檢測Cyclin-D1和Ki-67在喉鱗狀細胞癌組織、癌旁組織、喉腔正常鱗狀上皮組織中的表達情況,以期為喉癌的早期診斷和預后判斷提供一個可靠的分子生物學指標。 目的 初步探討細胞周期蛋白D1和細胞增殖抗原標記物Ki-67在喉鱗狀細胞癌組織中的表達及其與臨床、病理特征之間的關系,以及兩者在喉鱗狀細胞癌組織中表達的相關性,以期為喉癌的早期診斷和預后判斷提供一個可靠的分子生物學指標。 方法 92例我院2000年1月至2005年8月期間收治的喉鱗狀細胞癌患者行根治性手術后所留取的標本,其中男性78例,女性14例。年齡36～79歲,平均55.4歲。根據(jù)腫瘤原發(fā)部位分為：聲門上型43例,聲門型46例,聲門下型3例；根據(jù)腫瘤分化程度：高分化(G1)25例；中分化(G2)19例；低分化(G3)48例；根據(jù)癌腫的生長范圍和擴展的程度,按國際抗癌協(xié)會(UICC)2002年第6版公布的TNM分類分期方案如下：Ⅰ期6例；Ⅱ期15例；Ⅲ期46例；Ⅳ期25例。應用免疫組化S-P法檢測Cyclin-D1和Ki-67的蛋白表達,以PBS代替一抗作為陰性對照,比較上述基因蛋白在正常喉部鱗狀組織(對照1組)、喉鱗狀細胞癌組織、喉癌旁組織(對照2組)中的表達情況,探討Cyclin-D1和Ki-67在喉癌組織中的表達與患者臨床分期、病理特征之間的關系以及兩者之間的相關性。 采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計。喉鱗狀細胞癌組織、喉腔正常鱗狀上皮組織(對照1組)、腫瘤旁組織(對照2組)之間比較,計量資料以(x±s)表示,以one-way ANOVA方法進行總體比較,t檢驗做組間比較；Cyclin-D1和Ki-67在喉癌組織中的表達與患者臨床病理特征之間的關系比較采用四格表資料的χ2檢驗,Cyclin-D1和Ki-67在喉癌組織中的表達的相關性比較采用Spearman相關分析,檢驗顯著性水準取a=0.05,以P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 結果 (1)在92個腫瘤樣本中,有60例(65.2%)檢測到有細胞周期蛋白D1的表達,而在對照1組和2組中,檢出率分別為3%(3/100)和13.1%(12/92),三組對于細胞周期蛋白D1的檢出率具有顯著性差異(P0.05),而且進一步分析發(fā)現(xiàn)：在不同分期的喉鱗狀細胞癌組織中,Cyclin-D1的表達與臨床分期之間有統(tǒng)計學相關性(P=0.0290.05)。然而,Cyclin-D1的表達和其他變量(性別、年齡、癌癥的階段、組織分化、解剖學部位、吸煙史、飲酒史)之間沒有統(tǒng)計學相關性。 (2)Ki-67免疫組化檢測：Ki-67陽性信號主要定位于細胞質,為粗細不等的棕黃或棕褐色顆粒。正常喉部鱗狀細胞上皮組織中未見表達,喉癌旁組織中有4例(4.34%)呈弱陽性表達。研究發(fā)現(xiàn)：Ki-67的過度表達與腫瘤患者的性別、年齡、解剖學部位、組織分化、吸煙史和飲酒史無統(tǒng)計學相關性。但Ki-67蛋白表達與患者頸部淋巴結轉移狀態(tài)有顯著相關關系(P=0.0250.05)。 (3)Ki-67蛋白的表達與患者的生存率無相關性,Ki-67蛋白的表達與生存時間無統(tǒng)計學相關關系(P=0.457)。而Cyclin-D1蛋白在喉鱗狀細胞癌組織中的表達與患者的生存率有明顯的相關關系(P=0.00040.05)。 (4)在Ki-67陽性高表達的56例喉癌組織中,有41例出現(xiàn)Cyclin D1陽性高表達；在Cyclin Dl陽性低度表達的51例患者中,有36例出現(xiàn)Ki-67陽性低度表達,經(jīng)Spearman等級相關性檢驗表明：兩者在喉鱗狀細胞癌組織中的表達呈顯著正相關關系(r=0.620,P0.001)。 結論 (1)Cyclin D1在喉鱗狀細胞癌組織中表達率高,與患者的臨床分期及預后有顯著的相關關系,Cyclin D1低表達者有較高的生存率,可作為喉鱗狀細胞癌術后的監(jiān)測指標,為喉鱗狀細胞癌的治療提供一個新的靶點。 (2)Ki-67在喉鱗狀細胞癌組織中亦有表達,與患者頸部淋巴結轉移狀態(tài)有關,Ki-67高表達與淋巴結轉移率高有顯著的相關關系,可作為喉鱗狀細胞癌患者淋巴結轉移的監(jiān)測指標。 (3)Cyclin D1和Ki-67在喉鱗狀細胞癌組織中的表達具有顯著正相關關系,兩者聯(lián)合檢測對喉鱗狀細胞癌患者術后輔助治療及預后判斷有一定的指導意義。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R739.65

【參考文獻】

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本文編號：2541407