【摘要】：目的研究SOCS1沉默的樹突狀細(xì)胞特異性抗腫瘤作用機(jī)制,并探討RNAi技術(shù)在喉癌基因治療中的應(yīng)用前景,為樹突狀細(xì)胞的臨床應(yīng)用提供新思路和理論依據(jù)。方法以細(xì)胞因子GM-CSF、IL-4和TNF-α體外誘導(dǎo)擴(kuò)增外周血單核細(xì)胞來源的DC,倒置顯微鏡下觀察DC形態(tài)特征;構(gòu)建RNAi載體轉(zhuǎn)染DC,Western blot檢測(cè)SOCS1的表達(dá)情況,篩選抑制SOCS1表達(dá)的有效靶序列;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DC表面分子CD83、CD86和HLA-DR的表達(dá);ELISA法分析上清中IFN-γ的含量;MTT法評(píng)估DC刺激T細(xì)胞增殖的能力及誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的殺傷活性。結(jié)果 DC體外誘導(dǎo)培養(yǎng)成功;設(shè)計(jì)的RNAi載體經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證無誤。干擾序列5可顯著下調(diào)SOCS1表達(dá)水平;SOCS1沉默聯(lián)合喉癌Hep-2抗原致敏的DC可顯著上調(diào)表面分子標(biāo)志CD83(85.61±0.96)%、CD86(96.86±1.20)%和HLA-DR(98.02±0.94)%的表達(dá);該組DC能有效刺激T細(xì)胞增殖,增加IFN-γ的分泌量,最終增強(qiáng)CTL的特異性殺傷作用,效靶比為50:1時(shí)其殺傷活性顯著高于對(duì)照組(P0.01)。結(jié)論 SOCS1沉默并負(fù)載喉癌Hep-2抗原的DC可以產(chǎn)生高效而特異性的抗喉癌免疫應(yīng)答。
【圖文】：

細(xì)胞周圍開始出現(xiàn)細(xì)小的樹突狀偽足；培養(yǎng)第 5 天細(xì)胞呈積聚趨勢(shì)，形成大小不等的細(xì)胞集落，同時(shí) DC 表面有許多微絨毛樣突起 (圖 1)；第 7天細(xì)胞表面出現(xiàn)大量伸展的須狀毛刺呈典型的 DC形態(tài)。

2.2 RNAi 載體的鑒定 目的基因（SOCS1）RNAi 載體經(jīng) AgeⅠ和 EcoRⅠ雙酶切后于 1％瓊脂糖凝膠中電泳，PCR 鑒定陽性克隆(圖 2)，陽性克隆 PCR 產(chǎn)物出現(xiàn) 366 bp 條帶，空載體克隆 PCR 產(chǎn)物出現(xiàn) 307 bp條帶，與預(yù)期相符。測(cè)得序列與原始序列進(jìn)行比對(duì)結(jié)果吻合。2.3 SOCS1 沉默效率 在蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量 24 000的條帶相對(duì)應(yīng)的位置顯色的條帶判定為 SOCS1。RNAi 的各組 DC 在蛋白水平上 SOCS1 表達(dá)有顯著性差異(圖 3)。RNAi 組與陰性對(duì)照組(條帶 2 和 3)相比，SOCS1 蛋白量減少，干擾序列 5 和干擾序列 6SOCS1表達(dá)顯著降低(條帶 8 和 9)，其中以 SOCS1-siRNA-5 干擾效果最明顯(條帶 8)。2.4 DC 表型分析 流式檢測(cè)結(jié)果顯示，，SOCS1-siR－NA 聯(lián)合 Hep-2 抗原致敏的 DC 組(A 組)高表達(dá)成熟表面分子標(biāo)志 CD83、CD86 和 HLA-DR
【作者單位】： 遼寧醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院耳鼻喉科;北京大學(xué)第三醫(yī)院普外科;遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院眼科;
【基金】：遼寧省自然基金(20082180)
【分類號(hào)】：R739.65

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 王媛,楊愛珍,陳惠英,樂美兆,秦叔逵;人外周血樹突狀細(xì)胞的體外誘導(dǎo)和鑒定[J];臨床腫瘤學(xué)雜志;2004年06期

2 駱云鵬;余南生;黃文州;謝鴻壽;田秀榮;李永安;胡萬發(fā);楊路保;趙多蘭;張文兵;王中民;朱永;謝保琴;廖璐榮;;極高頻電磁波對(duì)惡性腫瘤化療患者外周血輔助淋巴細(xì)胞亞群Th1/Th2免疫應(yīng)答平衡的影響[J];免疫學(xué)雜志;2006年05期

3 羅榮城,尤長宣;腫瘤生物治療新進(jìn)展[J];中國新藥雜志;2005年02期

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 路學(xué)文;李新明;蔡留意;王文明;解邦杰;;核因子-κB/p65 siRNA介導(dǎo)的舌鱗狀細(xì)胞癌Tca8113細(xì)胞凋亡及相關(guān)分子機(jī)制[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2011年09期

2 周曉崗;李熙雷;郭常安;周健;戴文達(dá);董健;陳崢嶸;;小干擾RNA抑制人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因?qū)盒赞D(zhuǎn)化后骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的影響[J];中國臨床醫(yī)學(xué);2011年03期

3 戴觀榮;李黎霞;唐新智;程黎陽;張玉新;;RNA干擾Hedgehog信號(hào)通路對(duì)胃癌細(xì)胞增殖和凋亡影響及其機(jī)制的探討[J];中華腫瘤防治雜志;2011年05期

4 楊愛瓊;王朝莉;李雪婷;謝勇恩;;小干擾RNA抑制bcl-xL表達(dá)對(duì)食管癌細(xì)胞化療敏感性的影響[J];中國癌癥防治雜志;2011年02期

5 祁妮娜;白飛虎;;血紅素加氧酶-1小干擾RNA對(duì)人胃癌9811-P細(xì)胞體外侵襲的影響[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2011年17期

6 鄧美洲;陶凱雄;王國斌;劉興華;;siRNA沉默USP22基因?qū)ξ赴┘?xì)胞增殖的抑制作用[J];世界華人消化雜志;2011年19期

7 周琳;張連峰;史成章;;核糖核酸干擾下調(diào)ACE蛋白表達(dá)對(duì)胰腺癌細(xì)胞運(yùn)動(dòng)侵襲能力的影響[J];醫(yī)藥論壇雜志;2011年11期

8 何苗;王子衛(wèi);;腫瘤中DNA甲基化和小RNA的關(guān)聯(lián)研究現(xiàn)狀[J];醫(yī)學(xué)綜述;2011年15期

9 王蒲雄志;韓丁培;陳雪華;宗雅萍;馮波;陸愛國;鄭民華;;TXNDC9在結(jié)腸直腸癌組織中的表達(dá)及其影響[J];外科理論與實(shí)踐;2011年03期

10 張璞;徐開林;潘秀英;杜冰;;Evi1基因特異性siRNA對(duì)HEL細(xì)胞生長周期的影響[J];江蘇醫(yī)藥;2011年14期

相關(guān)會(huì)議論文 前6條

1 王建鵬;;Notch-1基因下調(diào)誘導(dǎo)GBM腫瘤干細(xì)胞腫瘤細(xì)胞凋亡的試驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)分會(huì)第九次學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

2 楊卉;陳生弟;李彪;陸國強(qiáng);梁梁;徐潔懿;;小干擾RNA抑制PC12細(xì)胞中內(nèi)源性Parkin基因表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[A];中國神經(jīng)科學(xué)學(xué)會(huì)第六屆學(xué)術(shù)會(huì)議暨學(xué)會(huì)成立十周年慶祝大會(huì)論文摘要匯編[C];2005年

3 卞修武;周燁;樂穎英;龔?fù)A;張夏;Pablo Iribarren;Rosalba Salcedo;O.M.Zack Howard;WilliamFarrar;王吉民;;G蛋白偶聯(lián)甲酰化肽受體(FPR)在人惡性膠質(zhì)瘤的快速生長中的作用:FPR促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的成瘤性[A];第三屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)教育論文集[C];2004年

4 杜衛(wèi)東;何超;王達(dá);黃學(xué)鋒;毛偉芳;胡文獻(xiàn);馬建軍;劉強(qiáng);張行;;RON受體酪氨酸激酶的過表達(dá)對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞移動(dòng)/浸潤能力作用的研究[A];2005年浙江省腫瘤外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

5 曾東林;黃洪章;張磊濤;張彬;潘朝斌;;MMP-2基因靶向SiRNA對(duì)成釉細(xì)胞瘤侵襲性的抑制作用[A];第五次全國口腔頜面—頭頸腫瘤學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2006年

6 丁佳逸;;針對(duì)PLK1基因mRNA的SiRNA治療結(jié)腸癌的細(xì)胞學(xué)研究[A];首屆長三角科技論壇——長三角生物醫(yī)藥發(fā)展論壇論文集[C];2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 郭萬峰;應(yīng)用基因芯片篩選肺癌細(xì)胞輻射增敏分子藥靶的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

2 季錫清;靶向siRNA阻斷NF-κB信號(hào)通路對(duì)膽管癌增殖和侵襲影響實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2009年

3 楊洪平;Ezrin siRNA對(duì)骨肉瘤細(xì)胞株SaOS-2 ezrin表達(dá)及生物學(xué)行為的影響[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

4 高福蓮;siRNA逆轉(zhuǎn)人胃癌細(xì)胞mdr1介導(dǎo)的多藥耐藥[D];鄭州大學(xué);2006年

5 鄧彬華;siRNA沉默OPN基因治療喉鱗癌的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2007年

6 吳欣愛;乏氧誘導(dǎo)因子-1α與食管鱗癌血管生成和化療療效的關(guān)系及其機(jī)制[D];鄭州大學(xué);2007年

7 向征;人結(jié)腸癌奧沙利鉑耐藥細(xì)胞株的建立及逆轉(zhuǎn)[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2007年

8 李燕;hTR-siRNA腺病毒抑制宮頸癌細(xì)胞端粒酶活性及其抗腫瘤研究[D];四川大學(xué);2007年

9 馮艷銘;慢病毒介導(dǎo)的親環(huán)素A(CyPA)siRNA對(duì)非小細(xì)胞肺癌抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];鄭州大學(xué);2008年

10 朱波;RNA干擾抑制ACP1對(duì)前列腺癌T3B細(xì)胞的影響[D];華中科技大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 彭智;siRNA逆轉(zhuǎn)白血病細(xì)胞K562/A02多藥耐藥的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2004年

2 姚雨石;RNA干擾阻斷STAT3基因?qū)δ[瘤細(xì)胞放射敏感性的影響[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

3 曹瑩;載體攜帶小干擾RNA抑制人舌癌Tca8113細(xì)胞VEGF的表達(dá)以及腫瘤生長的體內(nèi)外研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2008年

4 李敬;VEGFsiRNA對(duì)人舌癌Tca8113細(xì)胞移植瘤生長影響的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2009年

5 呂青;RNA干擾抑制腫瘤細(xì)胞血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2005年

6 馮晨;MYCN小干擾RNA抑制神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞MYCN基因[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2005年

7 馬彥;小干擾RNA抑制肝癌細(xì)胞胰島素樣生長因子Ⅱ基因表達(dá)的初步研究[D];暨南大學(xué);2006年

8 陳海波;小干擾RNA抑制人舌癌Tca8113細(xì)胞VEGF表達(dá)對(duì)VEGF－C及其受體表達(dá)的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2008年

9 郝潔;siRNA抑制人舌癌細(xì)胞VEGF表達(dá)對(duì)MMP-2，-9及TIMP-1，-2蛋白表達(dá)的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2009年

10 顧海濤;siRNA干擾ATX對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞生物學(xué)活性的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

本文編號(hào)：2516544