【摘要】： 目的：1.觀察角膜穿通傷后炎癥因子在眼球壁的表達特征及其在房水中相對含量的動態(tài)變化,初步探討角膜穿通傷后眼內(nèi)炎的發(fā)病機制； 2.觀察角膜穿通傷后視網(wǎng)膜細胞鈣蛋白酶(m-calpain)和骨架蛋白包括血影蛋白(α-Ⅱspectrin)、神經(jīng)絲蛋白(NF200)在視網(wǎng)膜的表達特征及m-calpain和骨架蛋白的降解產(chǎn)物在眼球壁組織中相對含量的動態(tài)變化,探討角膜穿通傷后視網(wǎng)膜細胞骨架蛋白的降解機制。 方法：1.清潔級成年雌性SD(Sprague Dawley)大鼠50只,隨機分為正常對照組和角膜穿通傷后6h、24h、48h、72h組,每組各10只,并制作大鼠角膜穿通傷模型。分別用免疫熒光染色法檢測損傷后各時間點眼球壁組織中熱休克蛋白90 (heat shock protein90 HSP90)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-αTNF-α)、白細胞介素-1β(interleukin-1βIL-1β)、白細胞介素-10(interleukin-10 IL-10)的組織定位特征；并用免疫印跡法分別檢測損傷后各時間點房水中上述因子相對含量的動態(tài)變化。 2.清潔級成年雌性SD(Sprague Dawley)大鼠50只,隨機分為正常對照組和角膜穿通傷后6h、24h、48h、72h組,每組各10只,并制作大鼠角膜穿通傷模型。分別用免疫熒光染色法檢測損傷后各時間點眼球壁視網(wǎng)膜組織中鈣蛋白酶(m-calpain)及其特異性底物細胞骨架蛋白包括血影蛋白(α-Ⅱspectrin)和神經(jīng)絲蛋白(NF200)在視網(wǎng)膜的組織定位特征；并用免疫印跡法分別檢測損傷后各時間點眼球壁組織勻漿中m-calpain、細胞骨架蛋白(α-Ⅱspectrin、NF200)降解產(chǎn)物的相對含量的動態(tài)變化。 結(jié)果：1.HSP90、TNF-α和IL-1β、IL-10在正常房水和眼球組織中表達較少。HSP90在損傷后6h的房水中表達高峰,與其他各組相比有顯著性差異(P0.05)；免疫熒光染色結(jié)果顯示其表達主要在視網(wǎng)膜視錐細胞和視桿細胞層。TNF-α、IL-1β在損傷后24h的房水中達到高峰,與其他各組相比有顯著性差異(P0.05)；免疫熒光染色結(jié)果顯示其表達主要見于角膜、睫狀體、視網(wǎng)膜。IL-10在損傷后72h的房水中達到高峰,與其他各組相比有顯著性差異(P0.05),免疫熒光染色結(jié)果顯示其表達主要見于角膜和視網(wǎng)膜。2. m-calpain在正常視網(wǎng)膜組織中表達很少,主要見于視網(wǎng)膜節(jié)細胞和雙極細胞層,視錐視桿細胞層表達相對較弱；在角膜穿通傷后24h免疫熒光染色結(jié)果顯示陽性表達細胞數(shù)為最多,之后逐漸減弱；免疫印跡結(jié)果顯示角膜穿通傷后m-calpain的表達在眼球壁組織中逐漸增多,于24h達到最高,與其他各組相比有顯著性差異(p0.05)。a-Ⅱspectrin和NF200在正常視網(wǎng)膜免疫熒光染色結(jié)果顯示呈絲狀分布于各種視細胞突起內(nèi),可見陽性突起呈平行規(guī)則排列；角膜穿通傷后24h免疫熒光染色結(jié)果顯示細胞突起呈彌散分布,細胞突起境界不清,說明突起內(nèi)骨架蛋白降解；免疫印跡結(jié)果顯示角膜穿通傷后α-Ⅱspectrin和NF200的降解產(chǎn)物的表達,在眼球壁勻漿組織中隨m-calpain活性增強而逐漸增多,于24h達最高,與其他各組相比有顯著性差異(p0.05)。 結(jié)論：1.角膜穿通傷后應(yīng)激反應(yīng)可促使眼球局部炎癥因子的表達,導(dǎo)致繼發(fā)性炎癥損傷。角膜穿通傷后應(yīng)早期局部使用免疫抑制劑抑制炎癥反應(yīng),保護眼球壁組織細胞。 2.角膜穿通傷后局部炎癥反應(yīng)導(dǎo)致視網(wǎng)膜細胞Ca~2+超載,能夠激活視網(wǎng)膜局部m-calpian。m-calpain作為損傷因子被激活,對其活性的抑制能保護視網(wǎng)膜細胞免受骨架蛋白的降解。
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【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R779.12

【參考文獻】

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本文編號：2472729