【摘要】： 目的：1.觀察角膜穿通傷后炎癥因子在眼球壁的表達(dá)特征及其在房水中相對(duì)含量的動(dòng)態(tài)變化,初步探討角膜穿通傷后眼內(nèi)炎的發(fā)病機(jī)制； 2.觀察角膜穿通傷后視網(wǎng)膜細(xì)胞鈣蛋白酶(m-calpain)和骨架蛋白包括血影蛋白(α-Ⅱspectrin)、神經(jīng)絲蛋白(NF200)在視網(wǎng)膜的表達(dá)特征及m-calpain和骨架蛋白的降解產(chǎn)物在眼球壁組織中相對(duì)含量的動(dòng)態(tài)變化,探討角膜穿通傷后視網(wǎng)膜細(xì)胞骨架蛋白的降解機(jī)制。 方法：1.清潔級(jí)成年雌性SD(Sprague Dawley)大鼠50只,隨機(jī)分為正常對(duì)照組和角膜穿通傷后6h、24h、48h、72h組,每組各10只,并制作大鼠角膜穿通傷模型。分別用免疫熒光染色法檢測(cè)損傷后各時(shí)間點(diǎn)眼球壁組織中熱休克蛋白90 (heat shock protein90 HSP90)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-αTNF-α)、白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1βIL-1β)、白細(xì)胞介素-10(interleukin-10 IL-10)的組織定位特征；并用免疫印跡法分別檢測(cè)損傷后各時(shí)間點(diǎn)房水中上述因子相對(duì)含量的動(dòng)態(tài)變化。 2.清潔級(jí)成年雌性SD(Sprague Dawley)大鼠50只,隨機(jī)分為正常對(duì)照組和角膜穿通傷后6h、24h、48h、72h組,每組各10只,并制作大鼠角膜穿通傷模型。分別用免疫熒光染色法檢測(cè)損傷后各時(shí)間點(diǎn)眼球壁視網(wǎng)膜組織中鈣蛋白酶(m-calpain)及其特異性底物細(xì)胞骨架蛋白包括血影蛋白(α-Ⅱspectrin)和神經(jīng)絲蛋白(NF200)在視網(wǎng)膜的組織定位特征；并用免疫印跡法分別檢測(cè)損傷后各時(shí)間點(diǎn)眼球壁組織勻漿中m-calpain、細(xì)胞骨架蛋白(α-Ⅱspectrin、NF200)降解產(chǎn)物的相對(duì)含量的動(dòng)態(tài)變化。 結(jié)果：1.HSP90、TNF-α和IL-1β、IL-10在正常房水和眼球組織中表達(dá)較少。HSP90在損傷后6h的房水中表達(dá)高峰,與其他各組相比有顯著性差異(P0.05)；免疫熒光染色結(jié)果顯示其表達(dá)主要在視網(wǎng)膜視錐細(xì)胞和視桿細(xì)胞層。TNF-α、IL-1β在損傷后24h的房水中達(dá)到高峰,與其他各組相比有顯著性差異(P0.05)；免疫熒光染色結(jié)果顯示其表達(dá)主要見于角膜、睫狀體、視網(wǎng)膜。IL-10在損傷后72h的房水中達(dá)到高峰,與其他各組相比有顯著性差異(P0.05),免疫熒光染色結(jié)果顯示其表達(dá)主要見于角膜和視網(wǎng)膜。2. m-calpain在正常視網(wǎng)膜組織中表達(dá)很少,主要見于視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞和雙極細(xì)胞層,視錐視桿細(xì)胞層表達(dá)相對(duì)較弱；在角膜穿通傷后24h免疫熒光染色結(jié)果顯示陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)為最多,之后逐漸減弱；免疫印跡結(jié)果顯示角膜穿通傷后m-calpain的表達(dá)在眼球壁組織中逐漸增多,于24h達(dá)到最高,與其他各組相比有顯著性差異(p0.05)。a-Ⅱspectrin和NF200在正常視網(wǎng)膜免疫熒光染色結(jié)果顯示呈絲狀分布于各種視細(xì)胞突起內(nèi),可見陽性突起呈平行規(guī)則排列；角膜穿通傷后24h免疫熒光染色結(jié)果顯示細(xì)胞突起呈彌散分布,細(xì)胞突起境界不清,說明突起內(nèi)骨架蛋白降解；免疫印跡結(jié)果顯示角膜穿通傷后α-Ⅱspectrin和NF200的降解產(chǎn)物的表達(dá),在眼球壁勻漿組織中隨m-calpain活性增強(qiáng)而逐漸增多,于24h達(dá)最高,與其他各組相比有顯著性差異(p0.05)。 結(jié)論：1.角膜穿通傷后應(yīng)激反應(yīng)可促使眼球局部炎癥因子的表達(dá),導(dǎo)致繼發(fā)性炎癥損傷。角膜穿通傷后應(yīng)早期局部使用免疫抑制劑抑制炎癥反應(yīng),保護(hù)眼球壁組織細(xì)胞。 2.角膜穿通傷后局部炎癥反應(yīng)導(dǎo)致視網(wǎng)膜細(xì)胞Ca~2+超載,能夠激活視網(wǎng)膜局部m-calpian。m-calpain作為損傷因子被激活,對(duì)其活性的抑制能保護(hù)視網(wǎng)膜細(xì)胞免受骨架蛋白的降解。
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【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R779.12

【參考文獻(xiàn)】

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1 李洪霞,張進(jìn)川,趙亞力,郝好杰;白細(xì)胞介素-10對(duì)急性肺損傷炎癥/抗炎介質(zhì)表達(dá)的影響[J];中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué);2005年06期

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本文編號(hào)：2472729