【摘要】：第一章SD大鼠單純視神經(jīng)橫斷模型的解剖學(xué)基礎(chǔ) 目的探究視網(wǎng)膜中央動脈與視神經(jīng)的關(guān)系,為建立穩(wěn)定可靠的SD大鼠視神經(jīng)橫斷損傷動物模型提供解剖學(xué)依據(jù)。 方法采用紅色乳膠灌注技術(shù)顯示正常SD大鼠視神經(jīng)周邊血管,體視顯微鏡下解剖分離眼動脈、視網(wǎng)膜中央動脈等,觀測視網(wǎng)膜中央動脈的來源、分支、走行及其與視神經(jīng)的關(guān)系；根據(jù)測量結(jié)果在距眼球后極2.0mm (n=6)、5.0mm (n=6)及6.0mm(n=6)處分別于鞘內(nèi)和鞘外橫斷視神經(jīng),采用明膠墨汁灌注技術(shù)顯示不同部位視神經(jīng)橫斷SD大鼠視網(wǎng)膜的血供,以評估不同部位橫斷視神經(jīng)對視網(wǎng)膜血供的影響。 結(jié)果正常SD大鼠視神經(jīng)周邊血管均被紅色乳膠充分灌注而清晰顯示,眼動脈位于視神經(jīng)的外側(cè),由頸內(nèi)動脈發(fā)出后朝前上內(nèi)繞過視神經(jīng),并在視神經(jīng)干上方發(fā)出分支,包括視網(wǎng)膜中央動脈及內(nèi)、外睫狀動脈等。視網(wǎng)膜中央動脈是眼動脈最主要分支,其起點至眼球后極的距離為(5.784±0.054)mm。視網(wǎng)膜中央動脈繞到視神經(jīng)內(nèi)側(cè)后,通過疏松結(jié)締組織與視神經(jīng)鞘緊貼在一起,在視神經(jīng)鞘內(nèi)伴視神經(jīng)干向前內(nèi)下走行。于眼球后極位置分出四條分支滋養(yǎng)眼球壁,主干穿眼球壁進入視網(wǎng)膜,發(fā)出終支營養(yǎng)視網(wǎng)膜。 明膠墨汁灌注結(jié)果顯示,距眼球后極6.0mm處鞘內(nèi)橫斷視神經(jīng)組SD大鼠視網(wǎng)膜上單位面積主干血管數(shù)目高于其他部位視神經(jīng)橫斷組。 結(jié)論SD大鼠視網(wǎng)膜中央動脈始終與視神經(jīng)伴行于視神經(jīng)鞘內(nèi)。制備SD大鼠視神經(jīng)橫斷損傷動物模型時,距眼球后極6.0mm處鞘內(nèi)橫斷視神經(jīng)最佳。 第二章暗飼養(yǎng)對視神經(jīng)橫斷大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)層結(jié)構(gòu)的保護作用 目的探討暗飼養(yǎng)對視神經(jīng)橫斷大鼠視網(wǎng)膜雙極細胞、節(jié)細胞、多巴胺能無長突細胞及其突觸聯(lián)系等的作用和影響。 方法實驗動物分為正常組、假手術(shù)組及視神經(jīng)橫斷組,各組動物依隨機分為兩半,一半常規(guī)飼養(yǎng),一半暗飼養(yǎng)。通過Nissl染色方法觀測不同飼養(yǎng)條件下實驗各組SD大鼠視網(wǎng)膜的層次結(jié)構(gòu)及節(jié)細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)與數(shù)目的改變；用免疫組化方法檢測不同飼養(yǎng)條件下各組動物視網(wǎng)膜雙極細胞恢復(fù)蛋白(Recoverin)、Alpha蛋白激酶(PKC-a)、無長突細胞絡(luò)氨酸羥化酶(TH)的表達與變化；并運用Western Blot方法檢測各組動物視網(wǎng)膜TH蛋白質(zhì)水平的表達。 結(jié)果1. Nissl染色結(jié)果：常規(guī)飼養(yǎng)組SD大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)核層、外核層及節(jié)細胞層的結(jié)構(gòu)排列在3d組開始出現(xiàn)紊亂,至14d組時,除了結(jié)構(gòu)排列紊亂,視網(wǎng)膜層次明顯變薄,單位面積視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目在7d組、14d組明顯減少；暗飼養(yǎng)組大鼠視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)排列紊亂發(fā)生始于5d組,與常規(guī)飼養(yǎng)組相比時間有所延遲,單位面積視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目減少始于14d組。 2. PKC-a免疫熒光染色結(jié)果：PKC-a表達于雙極細胞胞體及突起上。視神經(jīng)橫斷后常規(guī)飼養(yǎng)大鼠視網(wǎng)膜中雙極細胞胞體PKC-a的表達在3d組增強且高于正常組,在5d組、7d組回調(diào)到正常水平,14d組表達下降,未見PKC-a在胞體表達,但在內(nèi)網(wǎng)層的突觸上有表達；暗飼養(yǎng)各組視網(wǎng)膜中雙極細胞胞體PKC-a的表達與正常組相似,但14d組表達下調(diào),未見PKC-a在胞體表達,在內(nèi)網(wǎng)層的突觸有表達。 3. Recoverin免疫組化染色結(jié)果：視神經(jīng)橫斷后常規(guī)飼養(yǎng)的各組大鼠視網(wǎng)膜中,1d組的Recoverin表達上調(diào),且高于正常水平,3d組表達下調(diào)到正常水平以下,5d組回調(diào)至正常水平,14d組Recoverin表達再下調(diào)。暗飼養(yǎng)1d組大鼠視網(wǎng)膜中雙極細胞Recoverin表達上調(diào),且高于正常水平；3d組表達回調(diào)到正常水平,5d組、7d組大鼠視網(wǎng)膜中雙極細胞Recoverin表達與正常組一致,14d組Recoverin表達明顯下調(diào)且低于正常水平。Recoverin免疫陽性面積在視神經(jīng)橫斷后3d暗飼養(yǎng)組明顯高于常規(guī)飼養(yǎng)組。 4.TH免疫組化和Western Blot結(jié)果：常規(guī)飼養(yǎng)條件下,視網(wǎng)膜上TH表達1d組、3d組、5d組逐漸下調(diào),5d組達最低值,而7d組TH表達回調(diào)到正常水平；暗飼養(yǎng)條件下視網(wǎng)膜TH表達1d組下調(diào),3d組開始回調(diào),5d組回調(diào)至正常水平。Western Blot結(jié)果與免疫組化結(jié)果基本一致。 5.TH和PKC-a熒光雙標(biāo)檢測結(jié)果：視神經(jīng)橫斷后無長突細胞與雙極細胞的突觸聯(lián)系逐漸減少,5d組最低、14d組稍有恢復(fù),但遠未恢復(fù)到正常水平。暗飼養(yǎng)條件下的5d組、14d組視網(wǎng)膜TH和PKC-a共表達的突觸數(shù)均高于同一時間點的常規(guī)飼養(yǎng)條件下各組。 結(jié)論：暗飼養(yǎng)對視神經(jīng)橫斷后SD大鼠視網(wǎng)膜雙極細胞、節(jié)細胞和DA能無長突細胞以及其突觸聯(lián)系等有保護作用。 第三章暗飼養(yǎng)保護ONT大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)層局部環(huán)路結(jié)構(gòu)的可能機制 目的通過比較不同飼養(yǎng)條件下ONT大鼠視網(wǎng)膜GAD67、BDNF及其受體trkB的表達,分析其與視網(wǎng)膜視覺通路神經(jīng)元結(jié)構(gòu)功能改變的關(guān)系,探討暗飼養(yǎng)對視神經(jīng)橫斷后SD大鼠視網(wǎng)膜雙極細胞、節(jié)細胞和DA能無長突細胞以及其突觸聯(lián)系等保護作用的可能機制。 方法與第二章一樣,實驗動物分為正常組、假手術(shù)組及視神經(jīng)橫斷組,各組動物按飼養(yǎng)條件隨機分為兩半,一半常規(guī)飼養(yǎng),一半暗飼養(yǎng)。根據(jù)第一章實驗結(jié)果制備SD大鼠視神經(jīng)橫斷動物模型,用免疫組化染色方法分析不同飼養(yǎng)條件下視神經(jīng)橫斷大鼠視網(wǎng)膜上谷氨酸脫羧酶(GAD)、BDNF及其受體trkB等的表達和變化。 結(jié)果1.GAD67免疫組化結(jié)果：常規(guī)飼養(yǎng)條件下,視神經(jīng)橫斷后GAD67的表達于1d組開始上調(diào),3d組上調(diào)達峰值,5d組表達下調(diào)。與常規(guī)飼養(yǎng)條件下相同時間點比較,暗飼養(yǎng)條件下1d組、3d組GAD67的表達水平均高于常規(guī)飼養(yǎng)條件下同一時間點實驗組。 2.BDNF免疫組化結(jié)果：常規(guī)飼養(yǎng)條件下,視神經(jīng)橫斷后各組SD大鼠視網(wǎng)膜BDNF陽性表達自3d組起逐漸減弱,BDNF陽性節(jié)細胞數(shù)目逐漸減少。暗飼養(yǎng)條件下,視神經(jīng)橫斷后各組SD大鼠視網(wǎng)膜BDNF陽性表達自7d組開始逐漸減弱。 3.trkB免疫組化結(jié)果：常規(guī)飼養(yǎng)條件下,視神經(jīng)橫斷后實驗各組SD大鼠視網(wǎng)膜trkB免疫陽性表達1d組上調(diào)超過正常水平,3d組下表達調(diào),且遠低于正常水平,以后各實驗組逐漸回調(diào),但仍低于正常水平；暗飼養(yǎng)條件下,實驗各組SD大鼠視網(wǎng)膜trkB免疫陽性表達在1d組上調(diào),3D組回調(diào)至正常水平。從3d組起暗飼養(yǎng)條件下各組大鼠視網(wǎng)膜trkB免疫陽性面積大于同一時間點常規(guī)飼養(yǎng)條件下各組。 結(jié)論暗飼養(yǎng)條件下,視神經(jīng)橫斷后SD大鼠視網(wǎng)膜上GAD67、BDNF、trkB等表達上調(diào),通過增加GABA的合成和分泌,減少BDNF耗竭,增強trkB的活性,從而發(fā)揮對視神經(jīng)橫斷后SD大鼠視網(wǎng)膜局部環(huán)路的保護作用。圖17幅,表8個,參考文獻139篇
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【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R774.1

【參考文獻】

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2 江冰,蔣幼芹;大鼠視神經(jīng)壓榨傷模型的建立[J];眼科學(xué)報;2001年02期

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本文編號：2456088