【摘要】：目的：晶狀體在整個(gè)發(fā)育過(guò)程處于低氧分壓狀態(tài),這可能導(dǎo)致晶狀體上皮細(xì)胞自身表達(dá)VEGF。晶狀體上皮細(xì)胞表達(dá)VEGF可能與玻璃體血管的形成有關(guān),同時(shí)亦可通過(guò)自分泌或旁分泌作用影響晶狀體本身的生長(zhǎng)和分化。已有大量研究表明VEGF對(duì)多種來(lái)源的干細(xì)胞具有促進(jìn)分化及保持存活的作用。晶狀體上皮細(xì)胞的生發(fā)區(qū)存在有干細(xì)胞/祖細(xì)胞樣細(xì)胞。VEGF對(duì)于晶狀體干細(xì)胞樣細(xì)胞發(fā)育及分化的影響仍未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。在高氧分壓下,細(xì)胞VEGF的表達(dá)會(huì)有所下降。因此通過(guò)對(duì)新生仔鼠高氧環(huán)境下飼養(yǎng),觀察高氧條件下,晶狀體VEGF表達(dá)量的變化,以及與干細(xì)胞標(biāo)記物表達(dá)的相關(guān)性,初步探討VEGF對(duì)晶狀體上皮細(xì)胞中干細(xì)胞樣細(xì)胞分化及發(fā)育的可能影響,并為先天性白內(nèi)障及后發(fā)性白內(nèi)障發(fā)生機(jī)理及預(yù)防治療提供一個(gè)新的思路。 方法：1、將出生后第2天(postnatal, P1.5)仔鼠于75%高氧分壓下飼養(yǎng),分別于P3.5,P8.5取眼球。觀察高氧條件下仔鼠晶狀體形態(tài)學(xué)改變,組織學(xué)變化,并通過(guò)透射電子顯微鏡觀察晶狀體上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。2、取上述時(shí)間點(diǎn)仔鼠晶狀體,行免疫組化和熒光定量PCR檢測(cè),觀察不同時(shí)間點(diǎn)高氧條件對(duì)仔鼠晶狀體上皮細(xì)胞VEGF和Nestin的影響,分析干細(xì)胞特性的改變以及與VEGF的關(guān)系。3、觀察高氧條件對(duì)仔鼠晶狀體上皮細(xì)胞增殖的影響。取上述時(shí)間點(diǎn)仔鼠晶狀體,行熒光定量PCR檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)高氧分壓對(duì)于晶狀體細(xì)胞PCNA mRNA轉(zhuǎn)錄的影響。使用免疫組化觀察PCNA、BrdU的染色變化,以進(jìn)一步分析增殖能力的變化。使用細(xì)胞核DAPI染色,初步觀察上皮細(xì)胞凋亡的變化情況。 結(jié)果：1、高氧分壓對(duì)仔鼠晶狀體的發(fā)育可以產(chǎn)生影響。P3.5時(shí),仔鼠晶狀體高氧組和對(duì)照組在形態(tài)學(xué)上無(wú)顯著差異。P8.5時(shí),晶狀體的水平直徑與對(duì)照無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但是高氧分壓使晶狀體變薄,并且混濁率增加。P3.5時(shí),高氧組和對(duì)照組仔鼠晶狀體組織學(xué)上無(wú)明顯差異。P8.5時(shí),可見(jiàn)對(duì)照組前囊下上皮細(xì)胞為單層細(xì)胞,細(xì)胞核為橫橢圓形,排列規(guī)則,而高氧組前囊下上皮細(xì)胞多為單層細(xì)胞,細(xì)胞核為圓形或不規(guī)則形,且細(xì)胞排列不整齊。對(duì)照組赤道部上皮細(xì)胞多為單層,偶見(jiàn)復(fù)層細(xì)胞,可能為生發(fā)區(qū),細(xì)胞核前部為圓形,向后逐漸過(guò)渡為梭形。而高氧組赤道部復(fù)層細(xì)胞比對(duì)照組增多,細(xì)胞核亦自前部圓形向后逐漸過(guò)渡為梭形。透射電子顯微鏡顯示高氧組P8.5時(shí)囊膜缺失。2、高氧分壓可使仔鼠晶狀體上皮細(xì)胞中VEGF的表達(dá)下降、Nestin表達(dá)增加。P3.5和P8.5時(shí),高氧組仔鼠晶狀體中VEGF mRNA的轉(zhuǎn)錄水平比對(duì)照均顯著下降,免疫組化可見(jiàn)P3.5時(shí)高氧組晶狀體上皮細(xì)胞VEGF表達(dá)較對(duì)照減弱。PCR和免疫組化表明,P3.5時(shí)高氧組仔鼠晶狀體中Nestin的表達(dá)與對(duì)照無(wú)明顯差異,而P8.5時(shí)高氧組比對(duì)照組增強(qiáng)。3、高氧分壓條件可以促使仔鼠晶狀體上皮細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)。PCR和免疫組化均可見(jiàn)P3.5和P8.5時(shí),高氧組仔鼠晶狀體中PCNA的表達(dá)較對(duì)照組增強(qiáng)。同時(shí)在P3.5和P8.5時(shí),高氧組仔鼠晶狀體上皮細(xì)胞BrdU染色均對(duì)照組顯著增強(qiáng)。DAPI核染色顯示高氧組和對(duì)照組在兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)均可見(jiàn)赤道部凋亡的細(xì)胞核。 結(jié)論：高氧分壓可使仔鼠晶狀體體積減小,這可能與晶狀體上皮細(xì)胞合成晶狀體蛋白減少有關(guān)。而晶狀體囊膜消失可能與晶狀體上皮細(xì)胞合成的膠原蛋白異常或合成了特殊的膠原蛋白水解酶有關(guān)。同時(shí)晶狀體上皮細(xì)胞中VEGF表達(dá)減少,而干細(xì)胞特性增強(qiáng),細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)。這亦反映了晶狀體上皮細(xì)胞成熟的延遲或減慢。而既往文獻(xiàn)報(bào)道VEGF可促進(jìn)培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞增殖能力增強(qiáng),這可能與實(shí)驗(yàn)條件不同或在體條件下,高氧可誘發(fā)其他途徑促進(jìn)晶狀體上皮細(xì)胞增殖有關(guān)。本研究對(duì)晶狀體上皮細(xì)胞分化成熟的可能機(jī)制進(jìn)行了初步的探討,并為進(jìn)一步研究白內(nèi)障的發(fā)生機(jī)制提供了初步的理論依據(jù)。本研究可為防治白內(nèi)障及后發(fā)性白內(nèi)障提供一定的理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R776

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本文編號(hào)：2418065