【摘要】： 目的：喉鱗狀細(xì)胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma, LSCC)是頭頸部常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,腫瘤的局部復(fù)發(fā)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是影響LSCC患者預(yù)后的重要因素。研究表明,細(xì)胞間粘附力下降或喪失所致的腫瘤細(xì)胞從原發(fā)灶脫落是腫瘤發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的早期和關(guān)鍵步驟。本部分研究旨在探討細(xì)胞粘附分子上皮型鈣粘蛋白(E-cadherin)在LSCC中的表達(dá)及與腫瘤臨床病理特征、預(yù)后之間的關(guān)系。 方法：采用免疫組化方法檢測(cè)64例喉癌組織和30例癌旁非腫瘤組織中E-cadherin蛋白表達(dá)水平,比較二者表達(dá)差異。根據(jù)患者年齡、腫瘤臨床分型、原發(fā)灶大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理組織學(xué)分級(jí)將病例分組,應(yīng)用單因素方差分析研究E-cadherin表達(dá)與腫瘤臨床病理特征之間的關(guān)系,Logistic逐步回歸分析法研究與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)的預(yù)測(cè)因子。結(jié)合臨床隨訪資料,用Kaplan-Meier法繪制生存曲線,Log-rank法比較E-cadherin高表達(dá)組和E-cadherin低表達(dá)組5年生存率,Cox多因素回歸法分析疾病預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素。 結(jié)果： 1.64例LSCC組織E-cadherin平均染色分?jǐn)?shù)169±68分,30例癌旁非腫瘤組織E-cadherin平均染色分?jǐn)?shù)346±38分,腫瘤組織中E-cadherin平均染色分?jǐn)?shù)明顯低于癌旁非腫瘤組織(P0.001)； 2.腫瘤組織中E-cadherin表達(dá)水平與LSCC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P0.001)有明顯相關(guān)性,而與患者年齡(P=0.66)、腫瘤臨床分型(P=0.445)、原發(fā)灶大小(P=0.303)和病理分級(jí)(P=0.159)無(wú)關(guān)； 3.除已知的因素如腫瘤原發(fā)灶大小(P=0.012)、病理組織學(xué)分級(jí)(P=0.003),E-cadherin表達(dá)水平(P0.001)也是LSCC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子； 4.根據(jù)LSCC組織中E-cadherin平均染色分?jǐn)?shù)將病例分為E-cadherin高表達(dá)組和E-cadherin低表達(dá)組,E-cadherin高表達(dá)組5年生存率為74.1%,E-cadherin低表達(dá)組5年生存率為42.9%,E-cadherin高表達(dá)組的5年生存率高于E-cadherin低表達(dá)組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Log-rank, P0.05); 5.多變量Cox風(fēng)險(xiǎn)比例模型分析表明,僅淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是LSCC預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子(P=0.002),其余各參數(shù),如腫瘤臨床分型、原發(fā)灶大小、病理分級(jí)和E-cadherin表達(dá)水平均不能單獨(dú)預(yù)測(cè)疾病的預(yù)后。 結(jié)論： 1.E-cadherin在LSCC組織中表達(dá)減低,可能參與了喉癌的發(fā)生發(fā)展； 2.E-cadherin表達(dá)水平可能作為預(yù)測(cè)LSCC頸淋巴結(jié)隱匿性轉(zhuǎn)移的潛在腫瘤標(biāo)志物； 3.E-cadherin表達(dá)水平減低與LSCC復(fù)發(fā)和疾病生存率減低有關(guān)。 目的：探討表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)配體EGF和EGFR小分子酪氨酸激酶抑制劑Erlotinib對(duì)體外培養(yǎng)的喉癌Hep-2細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的影響。 方法：分別用不同濃度EGF、Erlotinib干預(yù)喉癌Hep-2細(xì)胞,MTT實(shí)驗(yàn)比較其對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,并計(jì)算細(xì)胞生存(增殖)率,篩選EGF、Erlotinib干預(yù)濃度,流式細(xì)胞儀分析EGF、Erlotinib對(duì)喉癌Hep-2細(xì)胞周期和凋亡的影響。 結(jié)果： 1.MTT實(shí)驗(yàn)：EGF能明顯促進(jìn)喉癌Hep-2細(xì)胞的增殖,其對(duì)喉癌Hep-2細(xì)胞生長(zhǎng)的促進(jìn)作用與EGF干預(yù)時(shí)間、濃度呈正相關(guān)；Erlotinib能有效抑制喉癌Hep-2細(xì)胞的增殖,使細(xì)胞數(shù)量減少、密度減低、細(xì)胞生存率下降,Erlotinib對(duì)喉癌Hep-2細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用與干預(yù)時(shí)間、濃度呈正相關(guān)； 2.流式細(xì)胞儀分析：EGF使喉癌Hep-2細(xì)胞G1期比例減少而S期比例增加(P0.05),對(duì)細(xì)胞凋亡無(wú)明顯影響；Erlotinib使喉癌Hep-2細(xì)胞G1期比例增加而S期比例減少(P0.05),并使喉癌Hep-2細(xì)胞凋亡率明顯高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。 結(jié)論： 1.EGF促進(jìn)喉癌Hep-2細(xì)胞周期從G1期向S期轉(zhuǎn)化,促進(jìn)細(xì)胞增殖； 2.Erlotinib使喉癌Hep-2細(xì)胞周期阻滯于G1期,并能誘導(dǎo)喉癌Hep-2細(xì)胞凋亡,抑制細(xì)胞增殖。 目的：前一部分實(shí)驗(yàn)已明確EGF、Erlotinib對(duì)喉癌Hep-2細(xì)胞生長(zhǎng)增殖和細(xì)胞周期的影響,并分別篩選出EGF、Erlotinib干預(yù)濃度。以此為基礎(chǔ),本部分實(shí)驗(yàn)研究EGF、Erlotinib對(duì)體外培養(yǎng)的喉癌Hep-2細(xì)胞表型、運(yùn)動(dòng)遷移、侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。 方法：分別用10ng/ml EGF、20μmol/L Erlotinib干預(yù)喉癌Hep-2細(xì)胞,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞表型改變,免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)和Western blot檢測(cè)喉癌Hep-2細(xì)胞E-cadherin、vimentin等相關(guān)蛋白表達(dá)和定位改變,并用劃痕愈合實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞運(yùn)動(dòng)遷移能力、侵襲轉(zhuǎn)移能力變化。 結(jié)果： 1.倒置顯微鏡觀察細(xì)胞表型改變：EGF干預(yù)的喉癌Hep-2細(xì)胞彼此分散,失去細(xì)胞間連接,形態(tài)向長(zhǎng)梭形、紡錘形的間質(zhì)細(xì)胞表型轉(zhuǎn)變；Erlotinib干預(yù)的細(xì)胞形態(tài)變圓或變方,成團(tuán)生長(zhǎng),細(xì)胞之間連接緊密,細(xì)胞的上皮特征更明顯； 2.免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)：EGF使喉癌Hep-2細(xì)胞E-cadherin表達(dá)下調(diào),細(xì)胞膜表達(dá)極低；Erlotinib使喉癌Hep-2細(xì)胞E-cadherin表達(dá)上調(diào),部分細(xì)胞E-cadherin出現(xiàn)細(xì)胞膜表達(dá)； 3. Western blot:EGF干預(yù)喉癌Hep-2細(xì)胞后,E-cadherin表達(dá)下調(diào),Vimentin和p-EGFR表達(dá)上調(diào),EGFR表達(dá)無(wú)明顯改變；Erlotinib干預(yù)喉癌Hep-2細(xì)胞后,E-cadherin表達(dá)上調(diào),Vimentin和p-EGFR表達(dá)下調(diào),而EGFR表達(dá)改變不明顯； 4.劃痕愈合實(shí)驗(yàn)：EGF能明顯促進(jìn)劃痕愈合,使細(xì)胞侵襲運(yùn)動(dòng)能力增強(qiáng)；Erlotinib使劃痕愈合延遲,能部分抑制喉癌Hep-2細(xì)胞的侵襲運(yùn)動(dòng)能力,實(shí)驗(yàn)組24h細(xì)胞遷移距離與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05); 5. Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)：EGF使喉癌Hep-2細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng),干預(yù)24h后穿過(guò)Transwell小室的每200倍視野平均細(xì)胞數(shù)為58.5±10.3個(gè),與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；Erlotinib能抑制喉癌Hep-2細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力,干預(yù)24h后穿過(guò)Transwell小室的每200倍視野平均細(xì)胞數(shù)為18.7±4.8個(gè),與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論： 1.在喉癌Hep-2細(xì)胞中可通過(guò)調(diào)控EGFR信號(hào)傳導(dǎo)通路來(lái)調(diào)節(jié)E-cadherin的表達(dá),改變細(xì)胞表型和侵襲轉(zhuǎn)移能力； 2.小分子量EGFR酪氨酸激酶抑制劑Erlotinib能使喉癌Hep-2細(xì)胞E-cadherin表達(dá)上調(diào),細(xì)胞運(yùn)動(dòng)遷移和侵襲轉(zhuǎn)移能力減弱。
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【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R739.65

【參考文獻(xiàn)】

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1 夏良平,曾宗淵,魏茂文,許光普,郭朱明,張?jiān)?陳文寬;影響喉癌生存率的單因素和多因素分析[J];中國(guó)腫瘤;2002年11期

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本文編號(hào)：2379003