【摘要】： 目的：喉鱗狀細胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma, LSCC)是頭頸部常見的惡性腫瘤之一,腫瘤的局部復發(fā)、淋巴結轉移和遠處轉移是影響LSCC患者預后的重要因素。研究表明,細胞間粘附力下降或喪失所致的腫瘤細胞從原發(fā)灶脫落是腫瘤發(fā)生侵襲轉移的早期和關鍵步驟。本部分研究旨在探討細胞粘附分子上皮型鈣粘蛋白(E-cadherin)在LSCC中的表達及與腫瘤臨床病理特征、預后之間的關系。 方法：采用免疫組化方法檢測64例喉癌組織和30例癌旁非腫瘤組織中E-cadherin蛋白表達水平,比較二者表達差異。根據(jù)患者年齡、腫瘤臨床分型、原發(fā)灶大小、淋巴結轉移、病理組織學分級將病例分組,應用單因素方差分析研究E-cadherin表達與腫瘤臨床病理特征之間的關系,Logistic逐步回歸分析法研究與淋巴結轉移有關的預測因子。結合臨床隨訪資料,用Kaplan-Meier法繪制生存曲線,Log-rank法比較E-cadherin高表達組和E-cadherin低表達組5年生存率,Cox多因素回歸法分析疾病預后的獨立預測因素。 結果： 1.64例LSCC組織E-cadherin平均染色分數(shù)169±68分,30例癌旁非腫瘤組織E-cadherin平均染色分數(shù)346±38分,腫瘤組織中E-cadherin平均染色分數(shù)明顯低于癌旁非腫瘤組織(P0.001)； 2.腫瘤組織中E-cadherin表達水平與LSCC淋巴結轉移(P0.001)有明顯相關性,而與患者年齡(P=0.66)、腫瘤臨床分型(P=0.445)、原發(fā)灶大小(P=0.303)和病理分級(P=0.159)無關； 3.除已知的因素如腫瘤原發(fā)灶大小(P=0.012)、病理組織學分級(P=0.003),E-cadherin表達水平(P0.001)也是LSCC淋巴結轉移的獨立預測因子； 4.根據(jù)LSCC組織中E-cadherin平均染色分數(shù)將病例分為E-cadherin高表達組和E-cadherin低表達組,E-cadherin高表達組5年生存率為74.1%,E-cadherin低表達組5年生存率為42.9%,E-cadherin高表達組的5年生存率高于E-cadherin低表達組,差異具有統(tǒng)計學意義(Log-rank, P0.05); 5.多變量Cox風險比例模型分析表明,僅淋巴結轉移是LSCC預后的獨立預測因子(P=0.002),其余各參數(shù),如腫瘤臨床分型、原發(fā)灶大小、病理分級和E-cadherin表達水平均不能單獨預測疾病的預后。 結論： 1.E-cadherin在LSCC組織中表達減低,可能參與了喉癌的發(fā)生發(fā)展； 2.E-cadherin表達水平可能作為預測LSCC頸淋巴結隱匿性轉移的潛在腫瘤標志物； 3.E-cadherin表達水平減低與LSCC復發(fā)和疾病生存率減低有關。 目的：探討表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)配體EGF和EGFR小分子酪氨酸激酶抑制劑Erlotinib對體外培養(yǎng)的喉癌Hep-2細胞增殖和細胞周期的影響。 方法：分別用不同濃度EGF、Erlotinib干預喉癌Hep-2細胞,MTT實驗比較其對細胞生長的影響,并計算細胞生存(增殖)率,篩選EGF、Erlotinib干預濃度,流式細胞儀分析EGF、Erlotinib對喉癌Hep-2細胞周期和凋亡的影響。 結果： 1.MTT實驗：EGF能明顯促進喉癌Hep-2細胞的增殖,其對喉癌Hep-2細胞生長的促進作用與EGF干預時間、濃度呈正相關；Erlotinib能有效抑制喉癌Hep-2細胞的增殖,使細胞數(shù)量減少、密度減低、細胞生存率下降,Erlotinib對喉癌Hep-2細胞生長的抑制作用與干預時間、濃度呈正相關； 2.流式細胞儀分析：EGF使喉癌Hep-2細胞G1期比例減少而S期比例增加(P0.05),對細胞凋亡無明顯影響；Erlotinib使喉癌Hep-2細胞G1期比例增加而S期比例減少(P0.05),并使喉癌Hep-2細胞凋亡率明顯高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.001)。 結論： 1.EGF促進喉癌Hep-2細胞周期從G1期向S期轉化,促進細胞增殖； 2.Erlotinib使喉癌Hep-2細胞周期阻滯于G1期,并能誘導喉癌Hep-2細胞凋亡,抑制細胞增殖。 目的：前一部分實驗已明確EGF、Erlotinib對喉癌Hep-2細胞生長增殖和細胞周期的影響,并分別篩選出EGF、Erlotinib干預濃度。以此為基礎,本部分實驗研究EGF、Erlotinib對體外培養(yǎng)的喉癌Hep-2細胞表型、運動遷移、侵襲轉移能力的影響。 方法：分別用10ng/ml EGF、20μmol/L Erlotinib干預喉癌Hep-2細胞,倒置顯微鏡下觀察細胞表型改變,免疫細胞化學實驗和Western blot檢測喉癌Hep-2細胞E-cadherin、vimentin等相關蛋白表達和定位改變,并用劃痕愈合實驗和Transwell侵襲實驗觀察細胞運動遷移能力、侵襲轉移能力變化。 結果： 1.倒置顯微鏡觀察細胞表型改變：EGF干預的喉癌Hep-2細胞彼此分散,失去細胞間連接,形態(tài)向長梭形、紡錘形的間質細胞表型轉變；Erlotinib干預的細胞形態(tài)變圓或變方,成團生長,細胞之間連接緊密,細胞的上皮特征更明顯； 2.免疫細胞化學實驗：EGF使喉癌Hep-2細胞E-cadherin表達下調,細胞膜表達極低；Erlotinib使喉癌Hep-2細胞E-cadherin表達上調,部分細胞E-cadherin出現(xiàn)細胞膜表達； 3. Western blot:EGF干預喉癌Hep-2細胞后,E-cadherin表達下調,Vimentin和p-EGFR表達上調,EGFR表達無明顯改變；Erlotinib干預喉癌Hep-2細胞后,E-cadherin表達上調,Vimentin和p-EGFR表達下調,而EGFR表達改變不明顯； 4.劃痕愈合實驗：EGF能明顯促進劃痕愈合,使細胞侵襲運動能力增強；Erlotinib使劃痕愈合延遲,能部分抑制喉癌Hep-2細胞的侵襲運動能力,實驗組24h細胞遷移距離與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05); 5. Transwell侵襲實驗：EGF使喉癌Hep-2細胞侵襲轉移能力增強,干預24h后穿過Transwell小室的每200倍視野平均細胞數(shù)為58.5±10.3個,與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)；Erlotinib能抑制喉癌Hep-2細胞的侵襲轉移能力,干預24h后穿過Transwell小室的每200倍視野平均細胞數(shù)為18.7±4.8個,與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 結論： 1.在喉癌Hep-2細胞中可通過調控EGFR信號傳導通路來調節(jié)E-cadherin的表達,改變細胞表型和侵襲轉移能力； 2.小分子量EGFR酪氨酸激酶抑制劑Erlotinib能使喉癌Hep-2細胞E-cadherin表達上調,細胞運動遷移和侵襲轉移能力減弱。
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【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R739.65

【參考文獻】

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1 夏良平,曾宗淵,魏茂文,許光普,郭朱明,張詮,陳文寬;影響喉癌生存率的單因素和多因素分析[J];中國腫瘤;2002年11期

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本文編號：2379003