【摘要】：目的觀察p44/42 MAPK激酶抑制劑PD98059和PI3K/Akt激酶抑制劑LY294002對(duì)非酶糖基化終產(chǎn)物(advanced glycation end-products,AGE)誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞株ARPE-19細(xì)胞表達(dá)血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影響。方法分別用不同濃度AGE和AGE作用不同時(shí)間干預(yù)ARPE-19細(xì)胞,ELISA方法檢測(cè)ARPE-19細(xì)胞外VEGF蛋白表達(dá)水平,免疫細(xì)胞熒光法檢測(cè)磷酸化p44/42和Akt的表達(dá);以PD98059和(或)LY294002預(yù)處理ARPE-19細(xì)胞后再用AGE干預(yù),并測(cè)定ARPE-19細(xì)胞外VEGF水平、磷酸化p44/42和Akt活性。結(jié)果隨著AGE濃度或作用時(shí)間增加,ARPE-19細(xì)胞表達(dá)VEGF外增加,AGE濃度為100mg·L-1或作用8h時(shí)達(dá)高峰,表達(dá)水平分別為(304.55±20.51)ng·L-1、(293.54±13.98)ng·L-1,同時(shí)p44/42和Akt信號(hào)分子激活。使用PD98059或LY294002預(yù)處理后,p44/42和Akt低表達(dá),AGE誘導(dǎo)的ARPE-19細(xì)胞外VEGF表達(dá)也降低,并與PD98059和LY294002呈劑量依賴性,當(dāng)使用20μmol·L-1 PD98059和30μmol·L-1 LY294002時(shí),VEGF的表達(dá)最低,分別為(57.35±5.29)pg·L-1、(81.51±8.10)pg·L-1,但VEGF的表達(dá)量仍與AGE濃度和作用時(shí)間呈正相關(guān)(P0.01);同時(shí)使用PD98059和LY294002預(yù)處理,AGE誘導(dǎo)的VEGF表達(dá)與AGE的作用時(shí)間無關(guān)(P0.05)。結(jié)論 p44/42MAPK和PI3K/Akt信號(hào)通路是AGE誘導(dǎo)ARPE-19細(xì)胞表達(dá)VEGF的重要細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路,PD98059和LY294002可抑制AGE誘導(dǎo)的人RPE細(xì)胞外VEGF表達(dá)。
[Abstract]:Objective to observe the effects of p44 / 42 MAPK kinase inhibitor PD98059 and PI3K/Akt kinase inhibitor LY294002 on the expression of vascular endothelial growth factor (vascular endothelial growth factor, in human retinal pigment epithelial cell line ARPE-19 induced by non-enzymatic glycosylation end product (advanced glycation end-products,AGE). VEGF). Methods ARPE-19 cells were treated with different concentrations of AGE and AGE for different time. The expression of extracellular VEGF protein in ARPE-19 cells was detected by ELISA method. The expression of phosphorylated p44 / 42 and Akt was detected by immunocytofluorescence assay. ARPE-19 cells were pretreated with PD98059 and / or LY294002, then treated with AGE. The extracellular VEGF level, phosphorylated p44 / 42 and Akt activity were measured. Results with the increase of AGE concentration or action time, the expression of VEGF in ARPE-19 cells increased, and the AGE concentration reached the peak at 100mg L-1 or 8 h, and the expression level was (304.55 鹵20.51) ng L -1, respectively. (293.54 鹵13.98) ng L -1, while p44 / 42 and Akt signaling molecules were activated. After pretreatment with PD98059 or LY294002, the expression of p44 / 42 and Akt was low, and the expression of extracellular VEGF induced by AGE was also decreased in a dose-dependent manner with PD98059 and LY294002. The expression of VEGF was the lowest when 20 渭 mol L-1 PD98059 and 30 渭 mol L-1 LY294002 were used. The expression of VEGF was (57.35 鹵5.29) pg L -1 and (81.51 鹵8.10) pg L -1, respectively. However, the expression of VEGF was positively correlated with the concentration of AGE and the time of action (P0.01). The expression of VEGF induced by AGE was not related to the time of AGE treatment with PD98059 and LY294002 (P0.05). Conclusion p44/42MAPK and PI3K/Akt signaling pathway is an important intracellular signal pathway for AGE to induce VEGF expression in ARPE-19 cells. PD98059 and LY294002 can inhibit AGE induced VEGF expression in human RPE cells.
【作者單位】： 云南省第一人民醫(yī)院眼科;中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院眼科;
【基金】：云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào):2011FZ285)~~
【分類號(hào)】：R587.2;R774.1

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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7 賈延R，

本文編號(hào)：2360409