【摘要】：Peroxynitrite (ONOO-)是一氧化氮和超氧陰離子的反應(yīng)產(chǎn)物。ONOO-作為強(qiáng)氧化劑,參與體內(nèi)一系列病理生理過程。在病理?xiàng)l件下,NO過量產(chǎn)生的細(xì)胞毒作用主要?dú)w咎于ONOO的形成。ONOO-可通過不同的信號(hào)途徑影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程。事實(shí)上,ONOO-可以穿透雙層磷脂膜,誘導(dǎo)脂質(zhì)過氧化,干擾線粒體的功能,影響細(xì)胞的代謝,進(jìn)而損傷DNA,引起包括腫瘤細(xì)胞在內(nèi)的各種細(xì)胞的壞死和/或凋亡。下咽癌,是頭頸部最常見的惡性腫瘤之一,近年來其發(fā)生率呈顯著上升趨勢(shì)。盡管治療手段的進(jìn)步在一定程度上改善了患者的生命質(zhì)量,但多年來患者總體生存率未有明顯提高。因此,探討新的腫瘤相關(guān)基因,揭示下咽癌發(fā)生的分子機(jī)制,有助于產(chǎn)生新的有效治療策略。 PDCD4是近年來備受關(guān)注的一種程序性細(xì)胞死亡調(diào)控基因,也是一種抑癌基因。PDCD4位于染色體10q24上,其表達(dá)產(chǎn)物與真核細(xì)胞翻譯起始因子e IF4A結(jié)合,從而抑制核糖體復(fù)合物的形成和蛋白質(zhì)的合成。PDCD4在正常組織中普遍表達(dá),而在惡性腫瘤中表達(dá)下調(diào)甚至缺失。PDCD4在腫瘤組織中的低表達(dá)狀態(tài)與腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。值得關(guān)注的是,在一些細(xì)胞的凋亡過程中,PDCD4表達(dá)增高。迄今為止,ONOO-誘干預(yù)條件下,PDCD4在FaDu細(xì)胞(下咽癌細(xì)胞系)表達(dá)狀況的研究鮮有報(bào)道。 盤狀結(jié)構(gòu)域受體(Discoidin Domain receptors, DDRs)是最近發(fā)現(xiàn)的一類帶有盤狀結(jié)構(gòu)域的跨膜受體型酪氨酸激酶,包括DDR1和DDR2兩種亞型存在。DDR1主要在一些腫瘤細(xì)胞中高表達(dá),而DDR2主要表達(dá)于心、骨骼肌、肺、腦和腎的間質(zhì)細(xì)胞。本課題從PDCD4和盤狀結(jié)構(gòu)域受體(Discoidin domain receptor,DDRs)的表達(dá)為切入點(diǎn),探討ONOO對(duì)FaDu細(xì)胞的作用及機(jī)制。 在本實(shí)驗(yàn)中,以不同濃度的ONOO-作用于體外培養(yǎng)的FaDu細(xì)胞,采用流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞凋亡率,采用噻唑藍(lán)(MTT)比色法測(cè)定細(xì)胞生存率。以吖啶橙和Ho33342熒光染色觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。采用Western-blot技術(shù)檢測(cè)PDCD4、DDR1、DDR2蛋白的表達(dá)。采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)PDCD4、DDR1、DDR2 mRNA的表達(dá)。 結(jié)果顯示： (1) ONOO顯著抑制FaDu細(xì)胞細(xì)胞增殖。 (2) ONOO主要通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡抑制FaDu細(xì)胞增殖。 (3) ONOO-作用下,FaDu細(xì)胞PDCD4 mRNA及蛋白水平增加顯著。 (4) ONOO作用下,FaDu細(xì)胞DDR1mRNA及蛋白水平總體上呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。 (5)在ONOO作用下,FaDu細(xì)胞中的DDR2 mRNA及蛋白水平總體上呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。 結(jié)論： ONOO-主要通過啟動(dòng)凋亡途徑有效抑制(?)FaDu細(xì)胞增殖。在ONOO-誘導(dǎo)FaDu細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中,PDCD4及DDR1、DDR2基因可能起到關(guān)鍵性作用。本研究從一個(gè)側(cè)面,為揭示下咽癌與氧化脅迫的關(guān)系提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[Abstract]:Peroxynitrite (ONOO-) is the product of the reaction of nitric oxide and superoxide anion. As a strong oxidant, ONOO- is involved in a series of pathophysiological processes in vivo. Under pathological conditions, the excessive cytotoxicity of NO is mainly attributed to the formation of ONOO. ONOO- can influence the development of tumor through different signal pathways. In fact, ONOO- can penetrate bilayer phospholipid membrane, induce lipid peroxidation, interfere with mitochondrial function, affect cell metabolism, and then damage DNA, to induce necrosis and / or apoptosis of various cells, including tumor cells. Hypopharyngeal carcinoma is one of the most common malignant tumors in head and neck. Although the improvement of treatment has improved the quality of life to some extent, the overall survival rate of patients has not improved significantly over the years. Therefore, exploring new tumor-related genes and revealing the molecular mechanism of hypopharyngeal carcinogenesis may contribute to the development of new effective therapeutic strategies. PDCD4 is a kind of programmed cell death regulating gene and a tumor suppressor gene. PDCD4 is located on chromosome 10q24 and its expression product binds to eukaryotic translation initiation factor e IF4A. Thus inhibiting the formation of ribosomal complexes and the synthesis of proteins. PDCD4 is generally expressed in normal tissues, but down-regulated or even absent in malignant tumors. Metastasis and prognosis are closely related. It is noteworthy that the expression of PDCD4 is increased during the apoptosis of some cells. Up to now, the expression of PDCD4 in FaDu cells (hypopharyngeal cancer cells) has been seldom reported under the condition of ONOO- induced intervention. Discoid domain receptor (Discoidin Domain receptors, DDRs) is a recently discovered transmembrane receptor tyrosine kinase with discoid domain, including DDR1 and DDR2 subtypes. DDR1 is highly expressed in some tumor cells, while DDR2 is mainly expressed in the heart. Interstitial cells in skeletal muscle, lung, brain and kidney. In this study, the effect and mechanism of ONOO on FaDu cells were studied from the expression of PDCD4 and disc domain receptor (Discoidin domain receptor,DDRs). In this experiment, FaDu cells were treated with different concentrations of ONOO-, the apoptosis rate was measured by flow cytometry, and the cell survival rate was determined by thiazolyl (MTT) colorimetry. The morphological changes of the cells were observed by acridine orange and Ho33342 fluorescence staining. Western-blot technique was used to detect the expression of PDCD4,DDR1,DDR2 protein. RT-PCR technique was used to detect the expression of PDCD4,DDR1,DDR2 mRNA. The results showed that: (1) ONOO significantly inhibited the proliferation of FaDu cells. (2) ONOO inhibits the proliferation of FaDu cells by inducing apoptosis. (3) the level of PDCD4 mRNA and protein in FaDu cells increased significantly under the action of ONOO-. (4) the level of DDR1mRNA and protein in FaDu cells decreased under the action of ONOO. (5) under the action of ONOO, the level of DDR2 mRNA and protein in FaDu cells decreased. Conclusion: ONOO- can effectively inhibit the proliferation of FaDu cells by initiating apoptosis pathway. PDCD4 and DDR1,DDR2 genes may play a key role in the signal transduction pathway of FaDu cell apoptosis induced by ONOO-. This study provides an experimental basis for revealing the relationship between hypopharyngeal carcinoma and oxidative stress.
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R739.63

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本文編號(hào)：2337770