【摘要】：目的探討誘導視網(wǎng)膜干細胞(retinal stem cell,RSC)分化為視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞(retinal ganglion cell,RGC)的體外培養(yǎng)方法,提供視神經(jīng)損傷后細胞移植治療所需的種子細胞。方法懸浮培養(yǎng)胎齡14 d LE大鼠來源的RSC,傳2代流式細胞儀和免疫熒光鑒定后,用5%血清、BDNF、DAPT、DAPT聯(lián)合BDNF 4組不同方式誘導14 d。流式細胞儀行成熟RGC特異性標志物thy1.1鑒定,并對DAPT聯(lián)合BDNF組不同誘導時間點行RGC相關標志物math5、brn3b、thy1.1和神經(jīng)干細胞標志物nestin、ki67表達的鑒定。結(jié)果傳2代的RSCs nestin、chx10、ki67表達強陽性,部分細胞math5表達陽性;5%血清、BDNF、DAPT、DAPT聯(lián)合BDNF組誘導RSCs 14 d后thy1.1陽性率分別為(11.38±1.58)%、(19.10±2.29)%、(23.90±1.09)%、(31.31±2.98)%,兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。DAPT聯(lián)合BDNF組誘導3~5 d后部分細胞nestin、ki67、brn3b、math5均陽性表達。結(jié)論使用DAPT聯(lián)合BDNF誘導,可以提高RSCs在體外分化成RGCs的比率,并且誘導3~5 d后,RGCs相關標志物出現(xiàn),細胞仍具有一定增殖能力。
[Abstract]:Objective to investigate the method of inducing retinal stem cells (retinal stem cell,RSC) to differentiate into retinal ganglion cells (retinal ganglion cell,RGC) in vitro and to provide seed cells for the treatment of optic nerve injury. Methods RSC, derived from 14 day old LE rats were identified by flow cytometry and immunofluorescence, and then induced by 5% serum and BDNF,DAPT,DAPT combined with BDNF 4 groups for 14 days. The specific marker of mature RGC was identified by flow cytometry (thy1.1), and the expression of RGC related marker math5,brn3b,thy1.1 and neural stem cell marker nestin,ki67 was identified at different time points in DAPT combined with BDNF group. Results the expression of RSCs nestin,chx10,ki67 was strongly positive in the second generation, and the positive expression of math5 was found in some of the cells. The positive rates of thy1.1 were (11.38 鹵1.58)%, (19.10 鹵2.29)%, (23.90 鹵1.09)%, (31.31 鹵2.98)%, respectively, in BDNF,DAPT,DAPT combined with BDNF group for 14 days. There were significant differences between the two groups (P0.05). DAPT combined with BDNF group after 3 days of induction of nestin,ki67,brn3b,math5 positive expression of some cells. Conclusion DAPT combined with BDNF can increase the rate of differentiation of RSCs into RGCs in vitro, and 5 days after induction, RGCs related markers appear and the cells still have the ability to proliferate.
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學西南醫(yī)院全軍眼科中心;
【基金】：國家自然科學基金青年科學基金(30901645)~~
【分類號】：R774

【共引文獻】

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本文編號：2327295