【摘要】：目的探討誘導(dǎo)視網(wǎng)膜干細(xì)胞(retinal stem cell,RSC)分化為視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinal ganglion cell,RGC)的體外培養(yǎng)方法,提供視神經(jīng)損傷后細(xì)胞移植治療所需的種子細(xì)胞。方法懸浮培養(yǎng)胎齡14 d LE大鼠來源的RSC,傳2代流式細(xì)胞儀和免疫熒光鑒定后,用5%血清、BDNF、DAPT、DAPT聯(lián)合BDNF 4組不同方式誘導(dǎo)14 d。流式細(xì)胞儀行成熟RGC特異性標(biāo)志物thy1.1鑒定,并對DAPT聯(lián)合BDNF組不同誘導(dǎo)時間點行RGC相關(guān)標(biāo)志物math5、brn3b、thy1.1和神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)志物nestin、ki67表達(dá)的鑒定。結(jié)果傳2代的RSCs nestin、chx10、ki67表達(dá)強陽性,部分細(xì)胞math5表達(dá)陽性;5%血清、BDNF、DAPT、DAPT聯(lián)合BDNF組誘導(dǎo)RSCs 14 d后thy1.1陽性率分別為(11.38±1.58)%、(19.10±2.29)%、(23.90±1.09)%、(31.31±2.98)%,兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。DAPT聯(lián)合BDNF組誘導(dǎo)3~5 d后部分細(xì)胞nestin、ki67、brn3b、math5均陽性表達(dá)。結(jié)論使用DAPT聯(lián)合BDNF誘導(dǎo),可以提高RSCs在體外分化成RGCs的比率,并且誘導(dǎo)3~5 d后,RGCs相關(guān)標(biāo)志物出現(xiàn),細(xì)胞仍具有一定增殖能力。
[Abstract]:Objective to investigate the method of inducing retinal stem cells (retinal stem cell,RSC) to differentiate into retinal ganglion cells (retinal ganglion cell,RGC) in vitro and to provide seed cells for the treatment of optic nerve injury. Methods RSC, derived from 14 day old LE rats were identified by flow cytometry and immunofluorescence, and then induced by 5% serum and BDNF,DAPT,DAPT combined with BDNF 4 groups for 14 days. The specific marker of mature RGC was identified by flow cytometry (thy1.1), and the expression of RGC related marker math5,brn3b,thy1.1 and neural stem cell marker nestin,ki67 was identified at different time points in DAPT combined with BDNF group. Results the expression of RSCs nestin,chx10,ki67 was strongly positive in the second generation, and the positive expression of math5 was found in some of the cells. The positive rates of thy1.1 were (11.38 鹵1.58)%, (19.10 鹵2.29)%, (23.90 鹵1.09)%, (31.31 鹵2.98)%, respectively, in BDNF,DAPT,DAPT combined with BDNF group for 14 days. There were significant differences between the two groups (P0.05). DAPT combined with BDNF group after 3 days of induction of nestin,ki67,brn3b,math5 positive expression of some cells. Conclusion DAPT combined with BDNF can increase the rate of differentiation of RSCs into RGCs in vitro, and 5 days after induction, RGCs related markers appear and the cells still have the ability to proliferate.
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院全軍眼科中心;
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金(30901645)~~
【分類號】：R774

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2327295