【摘要】：目的探討高氧誘導(dǎo)C57BL/6J小鼠視網(wǎng)膜新生血管形成過(guò)程中根蛋白(Radixin)的表達(dá)變化,為進(jìn)一步研究視網(wǎng)膜新生血管性疾病的防治方法提供理論基礎(chǔ)。方法將72只健康7 d齡小鼠隨機(jī)分為2組,分別為:高氧誘導(dǎo)組:小鼠置于含氧體積分?jǐn)?shù)為75%±2%的氧箱內(nèi)飼養(yǎng)5 d構(gòu)建高氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜新生血管動(dòng)物模型;正常對(duì)照組:小鼠置于正常氧環(huán)境中飼養(yǎng)。待生后12 d、13 d、17 d、21 d、30 d分別處死小鼠。應(yīng)異硫氰酸熒光素標(biāo)記的右旋糖酐(FD-2000S)血管灌注造影視網(wǎng)膜鋪片和HE染色觀察視網(wǎng)膜新生血管的形態(tài)變化;應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)視網(wǎng)膜中Radixin的表達(dá)定位;應(yīng)用RT-PCR和Westernblot檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)視網(wǎng)膜Radixin mRNA和蛋白表達(dá)情況。結(jié)果免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示兩組Radixin均有表達(dá),但高氧誘導(dǎo)組小鼠視網(wǎng)膜新生血管管壁、血管芽、內(nèi)皮細(xì)胞和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層Radixin大量表達(dá)。Real-time-PCR及Western-blot結(jié)果顯示,不同組別和不同時(shí)間點(diǎn)間Radixin mRNA和蛋白表達(dá)水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(mRNA:Fgroup=59.273,P=0.000,Ftime=538.071,P=0.000,Finteraction=297.126,P=0.000;蛋白:Fgroup=419.307,P=0.000,Ftime=663.946,P=0.000,Finteraction=354.538,P=0.000)。高氧誘導(dǎo)組小鼠生后12 d、生后13 d Radixin mRNA和蛋白表達(dá)水平均較正常對(duì)照組同齡小鼠低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.01),生后17 d、生后21 d Radixin mRNA和蛋白表達(dá)水平均較正常對(duì)照組同齡小鼠明顯增高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P=0.000)。正常對(duì)照組Radixin mRNA和蛋白的表達(dá)總體穩(wěn)定在較低水平。兩組生后30 d時(shí)Radixin mRNA和蛋白表達(dá)水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.058、0.082)。伴隨著視網(wǎng)膜新生血管的增生和消退,Radixin mRNA和蛋白的表達(dá)水平均呈先升高后降低的趨勢(shì)。結(jié)論 Radixin參與了視網(wǎng)膜新生血管的形成,可能會(huì)成為預(yù)防和治療視網(wǎng)膜新生血管性疾病的新靶點(diǎn)。
[Abstract]:Objective to investigate the changes of root protein (Radixin) expression during retinal neovascularization in C57BL/6J mice induced by hyperoxia, and to provide a theoretical basis for further study on the prevention and treatment of retinal neovascularization diseases. Methods Seventy-two healthy 7-day-old mice were randomly divided into two groups: hyperoxia-induced group: mice were fed in oxygen box containing 75% 鹵2% oxygen for 5 days to establish hyperoxia-induced retinal neovascularization animal model; Normal control group: mice were fed in normal oxygen environment. The mice were killed on the 12th day, 13th day, 17 day, 21 day and 30 d after birth. The morphological changes of retinal neovascularization were observed by fluorescein isothiocyanate labeled dextran (FD-2000S) angiography and HE staining, and the expression of Radixin in the retina was detected by immunohistochemical staining. RT-PCR and Westernblot were used to detect the expression of Radixin mRNA and protein in retina at different time points. Results Immunohistochemical staining showed that Radixin was expressed in both groups, but Radixin was expressed in retinal neovascularization wall, vascular bud, endothelial cells and ganglion cell layer in hyperoxia-induced group. Real-time-PCR and Western-blot showed that the expression of Radixin in retinal neovascularization vessel wall, vascular bud, endothelial cell and ganglion cell layer was higher than that in control group. There were significant differences in the expression of Radixin mRNA and protein between different groups and different time points (mRNA:Fgroup=59.273,P=0.000,Ftime=538.071,P=0.000,Finteraction=297.126,P=0.000;). Protein: Fgroup=419.307,P=0.000,Ftime=663.946,P=0.000,Finteraction=354.538,P=0.000). The expression levels of d Radixin mRNA and protein in hyperoxia-induced group were significantly lower than those in normal control group at 12 days after birth and 13 days after birth (all P0.01), and 17 days after birth, the expression levels of protein and protein in hyperoxia-induced group were significantly lower than those in normal control group (P0.01). The expression levels of 21 d Radixin mRNA and protein in postnatal mice were significantly higher than those in the control group (P 0. 000). The expression of Radixin mRNA and protein was stable in normal control group. There was no significant difference in the expression of Radixin mRNA and protein between the two groups 30 days after birth (P0. 058 and 0. 082). With the proliferation and regression of retinal neovascularization, the expression of, Radixin mRNA and protein increased first and then decreased. Conclusion Radixin is involved in the formation of retinal neovascularization and may be a new target for the prevention and treatment of retinal neovascular diseases.
【作者單位】： 濰坊醫(yī)學(xué)院;山東省眼科研究所青島眼科醫(yī)院;
【基金】：山東省自然科學(xué)基金資助(編號(hào):ZR2011HM012)~~
【分類號(hào)】：R774.1

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本文編號(hào)：2305523