【摘要】: 隨著準(zhǔn)分子激光角膜屈光手術(shù)的發(fā)展,角膜表面切削術(shù)因?yàn)椴淮嬖诮悄ぐ晗嚓P(guān)并發(fā)癥,擴(kuò)大了近視手術(shù)的矯治范圍以及術(shù)后成像質(zhì)量高等優(yōu)勢(shì)而重新受到關(guān)注。然而,角膜上皮下霧狀混濁(Haze)的發(fā)生是制約角膜表面屈光手術(shù)的一個(gè)重要因素。Haze是準(zhǔn)分子激光角膜表面切削術(shù)后一定時(shí)間在角膜切削區(qū)出現(xiàn)的上皮及其下方基質(zhì)的霧狀混濁,是準(zhǔn)分子激光角膜表面切削術(shù)后的主要并發(fā)癥之一。不同的角膜表面切削方式術(shù)后Haze的發(fā)生率也不同。Haze不僅影響視力,還是造成屈光回退的主要原因。Haze的形成是一個(gè)復(fù)雜的角膜創(chuàng)傷愈合反應(yīng)過程,由多種細(xì)胞和因子參與調(diào)控,是多種因素共同作用的結(jié)果。近年來,角膜表面屈光手術(shù)后Haze形成的機(jī)制及防治已成為屈光手術(shù)研究的熱點(diǎn)。本研究通過建立機(jī)械法準(zhǔn)分子激光上皮瓣下角膜磨鑲術(shù)(Epi-LASIK)、去瓣的Epi-LASIK(off-flap Epi-LASIK)和準(zhǔn)分子激光屈光性角膜切削術(shù)(PRK)動(dòng)物模型,旨在從病理組織學(xué)角度和分子生物學(xué)水平,比較不同方式的準(zhǔn)分子激光角膜表面切削術(shù)后角膜創(chuàng)傷的愈合反應(yīng)和Haze產(chǎn)生的差異,來探討Haze形成的機(jī)制,為臨床上準(zhǔn)分子激光治療屈光不正的術(shù)式選擇和Haze的防治提供理論依據(jù)。 第一部分兔Epi-LASIK、去瓣的Epi-LASIK和PRK術(shù)后早期角膜創(chuàng)傷愈合反應(yīng)的對(duì)比研究 目的:通過比較兔Epi-LASIK , off-flap Epi-LASIK and PRK三種角膜表面切削術(shù),探討不同的手術(shù)方式及術(shù)后不同的角膜上皮愈合方式對(duì)早期角膜創(chuàng)傷愈合反應(yīng)的影響。 方法:健康新西蘭白兔共50只(100只眼),將其中48只(96只眼)隨機(jī)分為Epi-LASIK , off-flap Epi-LASIK and PRK三個(gè)手術(shù)組,每組32只眼,另2只兔(4只眼)未手術(shù)眼作為正常對(duì)照組。3%戊巴比妥鈉耳緣靜脈麻醉(1ml/kg體重)和0.5%愛爾卡因表面麻醉后,實(shí)驗(yàn)眼分別行Epi-LASIK、off-flap Epi-LASIK和PRK三種角膜表面切削術(shù),且每只兔的兩只眼分別隨機(jī)行不同的手術(shù)方式。Epi-LASIK術(shù)應(yīng)用微型角膜上皮刀制作角膜上皮瓣,準(zhǔn)分子激光切削后再將上皮瓣復(fù)位,覆蓋在切削區(qū)上;off-flap Epi-LASIK術(shù)是用微型角膜上皮刀制作角膜上皮瓣,完成激光切削后,再將上皮瓣去除;PRK術(shù)用角膜上皮刮刀鈍性機(jī)械去除角膜上皮,去除角膜上皮的直徑為9.0mm,將上皮刮除干凈后行激光切削。采用美國博士倫公司Technolas217型準(zhǔn)分子激光治療儀在實(shí)驗(yàn)眼均行-10.0D激光切削,切削深度120μm。分別在術(shù)后4小時(shí)、1天、3天和7天共四個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死各組動(dòng)物,取角膜進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)觀察:1.采用光鏡、透射電子顯微鏡觀察三種手術(shù)后角膜上皮的愈合方式。2.免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)角膜基質(zhì)炎癥細(xì)胞數(shù)量、角膜基質(zhì)細(xì)胞凋亡數(shù)量以及白細(xì)胞介素-1(IL-1β)和增殖蛋白Ki-67在角膜基質(zhì)的表達(dá)。 結(jié)果:1我們通過光鏡和透射電鏡觀察到三種手術(shù)術(shù)后角膜上皮的愈合方式有不同的特點(diǎn):(1)Epi-LASIK術(shù)后4小時(shí)上皮大部分表層細(xì)胞水腫,有輕微損傷的表現(xiàn),上皮與基質(zhì)結(jié)合稍疏松;術(shù)后1天上皮瓣稍變薄,上皮表面微絨毛減少,小部分基底細(xì)胞水腫,提示上皮瓣活性尚可;術(shù)后3天可見上皮瓣水腫;術(shù)后7天上皮水腫消退,基本恢復(fù)正常結(jié)構(gòu),但上皮層數(shù)較前增多,約7-9層,上皮表面微絨毛正常。(2)off-flap Epi-LASIK術(shù)后4小時(shí),角膜切削區(qū)基質(zhì)表面無上皮;術(shù)后1天,有一層新生角膜上皮細(xì)胞覆蓋切削區(qū),以后新生的角膜上皮逐層增多,術(shù)后7天上皮層數(shù)約7-8層,結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常。(3)PRK組術(shù)后4小時(shí),角膜切削區(qū)無上皮;術(shù)后1天,角膜切削區(qū)邊緣可見單層上皮細(xì)胞向切削區(qū)延伸,切削區(qū)仍暴露部分裸露的基質(zhì)床,以后新生的上皮逐漸覆蓋切削區(qū),層數(shù)增多,但上皮細(xì)胞排列較紊亂,術(shù)后7天,上皮約5-7層,上皮細(xì)胞排列稍紊亂,基底膜完整,上皮表面可見少量微絨毛。2角膜的愈合反應(yīng):(1)Epi-LASIKPRK、off-flap Epi-LASIK和PRK三種角膜表面切削術(shù)后4小時(shí)角膜淺基質(zhì)層即可見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、凋亡的陽性細(xì)胞以及IL-1β和增殖蛋白Ki-67的表達(dá);三組手術(shù)后1天角膜基質(zhì)的炎性細(xì)胞數(shù)量和凋亡的細(xì)胞均最多,增殖蛋白Ki-67的表達(dá)均在術(shù)后3天達(dá)到高峰。(2)術(shù)后7天,Epi-LASIK和off-flap Epi-LASIK組未見炎性細(xì)胞,PRK組偶見炎性細(xì)胞,三組角膜基質(zhì)中均僅有少量TUNEL陽性細(xì)胞,IL-1β和Ki-67的表達(dá)均開始降低。(3)PRK組術(shù)后4小時(shí)、1天、3天和7天四個(gè)時(shí)間點(diǎn)上述各項(xiàng)指標(biāo)均顯著高于Epi-LASIK和off-flap Epi-LASIK組,組間兩兩比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);而Epi-LASIK組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)的炎性細(xì)胞數(shù)、凋亡的陽性細(xì)胞數(shù)以及IL-1β和增殖蛋白Ki-67的表達(dá)又均比off-flap Epi-LASIK組多,其中炎性細(xì)胞數(shù)和凋亡的陽性細(xì)胞數(shù)于術(shù)后1天和3天組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),IL-1β和Ki-67的表達(dá)在術(shù)后1天、3天和7天組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論:Epi-LASIK、off-flap Epi-LASIK和PRK三種角膜表面切削術(shù)由于術(shù)中不同的上皮處理方式及術(shù)后不同的上皮愈合方式引起術(shù)后早期角膜創(chuàng)傷愈合反應(yīng)程度的差異,其中off-flap Epi-LASIK的反應(yīng)程度最輕,提示off-flap Epi-LASIK可能在減輕角膜表面切削術(shù)的術(shù)后早期刺激癥狀和遠(yuǎn)期Haze發(fā)生率方面具有一定的優(yōu)勢(shì)。 第二部分兔Epi-LASIK、去瓣的Epi-LASIK和PRK術(shù)后Haze形成的對(duì)比研究 目的:探討Epi-LASIK , off-flap Epi-LASIK and PRK三種角膜表面切削術(shù)后在Haze發(fā)生發(fā)展方面存在的差異及成因。 方法:健康新西蘭白兔共47只(94只眼),將其中45只(90只眼)隨機(jī)分為Epi-LASIK , off-flap Epi-LASIK and PRK三個(gè)手術(shù)組,每組30只眼,另2只兔(4只眼)未手術(shù)眼作為正常對(duì)照組。3%戊巴比妥鈉耳緣靜脈麻醉(1ml/kg體重)和0.5%愛爾卡因表面麻醉后,實(shí)驗(yàn)眼分別行Epi-LASIK、off-flap Epi-LASIK和PRK三種角膜表面切削術(shù),且每只兔的兩只眼分別隨機(jī)行不同的手術(shù)方式。Epi-LASIK術(shù)應(yīng)用微型角膜上皮刀制作角膜上皮瓣,準(zhǔn)分子激光切削后再將上皮瓣復(fù)位,覆蓋在切削區(qū)上;off-flap Epi-LASIK術(shù)是用微型角膜上皮刀制作角膜上皮瓣,完成激光切削后,再將上皮瓣去除;PRK術(shù)用角膜上皮刮刀鈍性機(jī)械去除角膜上皮,去除角膜上皮的直徑為9.0mm,將上皮刮除干凈后行激光切削。采用美國博士倫公司Technolas217型準(zhǔn)分子激光治療儀在實(shí)驗(yàn)眼均行-10.0D激光切削,切削深度120μm。三種角膜表面切削術(shù)后,進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)觀察:1、定期在裂隙燈顯微鏡下觀察角膜上皮的愈合情況并記錄每個(gè)手術(shù)組兔角膜上皮的愈合時(shí)間及進(jìn)行Haze的分級(jí)評(píng)估。2、分別于術(shù)后1周、1個(gè)月和3個(gè)月共三個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死各組動(dòng)物,取角膜。通過透射電鏡對(duì)兔術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)角膜的組織結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察;采用免疫組織化學(xué)、免疫印跡法(Western Blot法)等檢測(cè)方法測(cè)定與Haze形成密切相關(guān)的指標(biāo)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)和Ⅲ型膠原在角膜中的表達(dá)。 結(jié)果: 1角膜上皮愈合時(shí)間:Epi-LASIK、off-flap Epi-LASIK和PRK術(shù)后兔眼平均角膜上皮愈合時(shí)間分別為4.1±1.0,3.8±0.8和4.4±1.2天,三個(gè)手術(shù)組組間兩兩比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.88,P0.05)。2角膜Haze情況:(1)術(shù)后1個(gè)月,Epi-LASIK組Haze的發(fā)生率為40%(0.5級(jí)Haze 6眼,1級(jí)Haze 2眼);off-flap Epi-LASIK組為35%(0.5級(jí)Haze 5眼,1級(jí)Haze 2眼);PRK組為80%(0.5級(jí)Haze 8眼,1級(jí)Haze 5眼)。PRK與Epi-LASIK和off-flap Epi-LASIK兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);Epi-LASIK和off-flap Epi-LASIK兩組間比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。(2)術(shù)后3個(gè)月,Epi-LASIK組Haze的發(fā)生率為30%(0.5級(jí)Haze 3眼);off-flap Epi-LASIK組為30%(0.5級(jí)Haze 2眼,1級(jí)Haze 1眼);PRK組為60%(0.5級(jí)Haze 4眼,1級(jí)Haze 2眼)。三組間兩兩比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。3、透射電子顯微鏡觀察:(1)術(shù)后1個(gè)月,Epi-LASIK,off-flap Epi-LASIK和PRK三組角膜上皮的結(jié)構(gòu)基本正常,角膜淺基質(zhì)成纖維細(xì)胞明顯增多、形態(tài)和排列不規(guī)則、細(xì)胞核變大、核仁明顯、常染色質(zhì)和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)豐富,新陳代謝旺盛,新生的膠原明顯增多且排列紊亂。三組中PRK的程度較重,Epi-LASIK與off-flap Epi-LASIK兩組比較未發(fā)現(xiàn)明顯差異。(2)術(shù)后3個(gè)月,三個(gè)手術(shù)組角膜淺基質(zhì)內(nèi)成纖維細(xì)胞數(shù)量均開始減少、形態(tài)及排列較前規(guī)則,膠原排列仍稍紊亂,PRK組的程度比Epi-LASIK和off-flap Epi-LASIK兩組稍重,且膠原纖維較粗大。4、免疫組織化學(xué)及免疫印跡法檢測(cè)角膜中α-SMA的表達(dá):Epi-LASIK、off-flap Epi-LASIK和PRK三組術(shù)后1周角膜中α-SMA的表達(dá)開始增多,術(shù)后1個(gè)月角膜α-SMA的表達(dá)均達(dá)到高峰。三組術(shù)后在1周、1個(gè)月和3個(gè)月角膜中α-SMA的表達(dá)均為PRKEpi-LASIK off-flap Epi-LASIK,三組與對(duì)照組以及三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。5、免疫組織化學(xué)及免疫印跡法檢測(cè)角膜中Ⅲ型膠原的表達(dá):Epi-LASIK、off-flap Epi-LASIK和PRK三組術(shù)后1周角膜中Ⅲ型膠原的表達(dá)明顯增多,并均于術(shù)后1個(gè)月達(dá)到高峰,三組術(shù)后在1周、1個(gè)月和3個(gè)月角膜中Ⅲ型膠原的表達(dá)均為PRKEpi-LASIKoff-flap Epi-LASIK,三組與對(duì)照組以及三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 結(jié)論:Epi-LASIK手術(shù)中上皮瓣的保留對(duì)促進(jìn)術(shù)后角膜上皮的愈合、減少Haze形成沒有明顯的意義,角膜表面切削術(shù)中盡量減少對(duì)角膜上皮的損傷,是防治術(shù)后Haze形成的關(guān)鍵因素。off-flap Epi-LASIK與Epi-LASIK和PRK比較,術(shù)后角膜上皮愈合快、Haze反應(yīng)輕,有望成為臨床上優(yōu)先選擇的角膜表面屈光手術(shù)方式。 第三部分兔Epi-LASIK、去瓣的Epi-LASIK和PRK術(shù)后角膜中TGF-β1和CTGF的表達(dá)及其對(duì)Haze形成的影響 目的:通過觀察Epi-LASIK、off-flap Epi-LASIK和PRK三種角膜表面切削術(shù)后角膜中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)和結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)的表達(dá)情況,探討兩者之間的關(guān)系及其對(duì)術(shù)后Haze發(fā)生發(fā)展的影響。 方法:健康新西蘭白兔共47只(94只眼),將其中45只(90只眼)隨機(jī)分為Epi-LASIK , off-flap Epi-LASIK and PRK三個(gè)手術(shù)組,每組30只眼,另2只兔(4只眼)未手術(shù)眼作為正常對(duì)照組。3%戊巴比妥鈉耳緣靜脈麻醉(1ml/kg體重)和0.5%愛爾卡因表面麻醉后,實(shí)驗(yàn)眼分別行Epi-LASIK、off-flap Epi-LASIK和PRK三種角膜表面切削術(shù),且每只兔的兩只眼分別隨機(jī)行不同的手術(shù)方式。采用美國博士倫公司Technolas217型準(zhǔn)分子激光治療儀在實(shí)驗(yàn)眼均行-10.0D激光切削,切削深度120μm。分別于術(shù)后1周、1個(gè)月和3個(gè)月共三個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死各組動(dòng)物取角膜,采用免疫組織化學(xué)和免疫印跡法(Western Blot法)檢測(cè)Haze形成過程中的兩個(gè)主要調(diào)控因子TGF-β1和CTGF在三種手術(shù)后角膜中的表達(dá)情況。 結(jié)果:1免疫組織化學(xué)及免疫印跡法檢測(cè)角膜中TGF-β1的表達(dá):正常對(duì)照組角膜中TGF-β1的表達(dá)非常低弱。Epi-LASIK、off-flap Epi-LASIK和PRK術(shù)后1周TGF-β1的表達(dá)明顯增強(qiáng),術(shù)后1個(gè)月達(dá)高峰,術(shù)后3個(gè)月仍有較強(qiáng)表達(dá),其中PRK組在術(shù)后1周、1個(gè)月和3個(gè)月三個(gè)時(shí)間點(diǎn)TGF-β1的表達(dá)均明顯高于Epi-LASIK和off-flap Epi-LASIK組,Epi-LASIK組又稍高于off-flap Epi-LASIK組,三組與對(duì)照組以及三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的組間兩兩比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2免疫組織化學(xué)及免疫印跡法檢測(cè)角膜中CTGF的表達(dá):Epi-LASIK、off-flap Epi-LASIK和PRK術(shù)后1周CTGF的表達(dá)開始升高,均在術(shù)后1個(gè)月表達(dá)最強(qiáng),術(shù)后3個(gè)月仍有較高表達(dá),其中PRK組在術(shù)后1周、1個(gè)月和3個(gè)月三個(gè)時(shí)間點(diǎn)CTGF的表達(dá)均明顯高于Epi-LASIK和off-flap Epi-LASIK組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Epi-LASIK組在術(shù)后三個(gè)時(shí)間點(diǎn)CTGF的表達(dá)又稍高于off-flap Epi-LASIK組,術(shù)后1周兩組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),術(shù)后1個(gè)月、3個(gè)月比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);三組與對(duì)照組比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論:TGF-β1和CTGF介導(dǎo)了角膜表面切削術(shù)后角膜創(chuàng)傷的愈合反應(yīng),在愈合反應(yīng)過程中具有協(xié)同作用,與Haze的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。off-flap Epi-LASIK術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)角膜中TGF-β1和CTGF的表達(dá)明顯低于Epi-LASIK和PRK,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),提示off-flap Epi-LASIK在減少術(shù)后Haze形成方面較Epi-LASIK,特別是PRK具有明顯優(yōu)勢(shì)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】:河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2010
【分類號(hào)】:R779.63
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5 北京大學(xué)第一醫(yī)院眼科 李海麗;屈光矯正手術(shù)與LASIK[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2001年
6 本報(bào)記者 黃連星;激光治近視到底安不安全?[N];科技日?qǐng)?bào);2004年
7 本報(bào)記者 李曉;手術(shù)治近視你得悠著點(diǎn)[N];蘇州日?qǐng)?bào);2005年
8 曾自明 ;給自己一雙明亮的眼睛吧[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2005年
9 復(fù)旦大學(xué)附屬眼耳鼻喉科醫(yī)院眼科副教授 周行濤;防治近視選擇合適方法[N];解放日?qǐng)?bào);2004年
10 麗麗;激光矯治近視的后安全時(shí)代來臨[N];深圳商報(bào);2004年
相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條
1 郭秀瑾;不同方式的準(zhǔn)分子激光表面切削術(shù)后角膜創(chuàng)傷愈合反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年
2 李招娜;角膜上皮瓣棄留對(duì)Epi-LASIK矯治近視影響的實(shí)驗(yàn)與臨床研究[D];山東大學(xué);2012年
3 于華軍;近視眼LASIK術(shù)后人工晶狀體屈光度測(cè)算中應(yīng)用矯正角膜曲率的效能檢驗(yàn)[D];山東大學(xué);2012年
4 買志彬;FEMTO LDV飛秒激光輔助LASIK術(shù)后角膜形態(tài)和視覺質(zhì)量的研究[D];鄭州大學(xué);2010年
5 張立軍;前彈力層下準(zhǔn)分子激光原位角膜磨鑲術(shù)治療近視的實(shí)驗(yàn)及臨床研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年
6 馬魯新;眼波前像差與屈光手術(shù)的研究[D];山東大學(xué);2004年
7 鄒俊;超薄角膜瓣LASIK手術(shù)的實(shí)驗(yàn)與臨床研究[D];復(fù)旦大學(xué);2005年
8 劉兆強(qiáng);mAChR、VIP在豚鼠FDM模型中表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究及PRK、LASIK遠(yuǎn)期效果的臨床研究[D];山東大學(xué);2007年
9 董子獻(xiàn);飛秒激光角膜基質(zhì)透鏡切除(ReLEx)創(chuàng)傷愈合及機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年
10 熊瑛;不同視敏度眼波前像差的相關(guān)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2003年
相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條
1 胡莉菲;虹膜定位引導(dǎo)的個(gè)性化LASIK與傳統(tǒng)LASIK治療中高度散光的對(duì)比研究[D];浙江大學(xué);2010年
2 王春艷;Epi-LASIK與Flap-free Epi-LASIK矯正高度近視的臨床研究[D];南華大學(xué);2011年
3 楊聞文;Q值引導(dǎo)個(gè)性化與標(biāo)準(zhǔn)化LASIK治療近視臨床效果回顧性分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年
4 武正斌;154例近視患者LASIK術(shù)后1周干眼發(fā)病率相關(guān)分析[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年
5 張杰;前彈力層下激光角膜磨鑲術(shù)與傳統(tǒng)LASIK治療近視的臨床對(duì)比研究[D];浙江大學(xué);2011年
6 侯力華;近視LASIK術(shù)后調(diào)節(jié)與集合功能變化的研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2011年
7 陳艷路;LASIK治療近視遠(yuǎn)期療效的觀察分析[D];大連醫(yī)科大學(xué);2011年
8 趙秀秀;不同制瓣方法LASIK術(shù)后眼表與細(xì)胞因子相關(guān)性研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年
9 鄧國濤;LASIK術(shù)后眼調(diào)節(jié)幅度的改變及其與視疲勞的關(guān)系[D];大連醫(yī)科大學(xué);2010年
10 張宏光;光學(xué)相干生物測(cè)量?jī)x預(yù)測(cè)LASIK術(shù)后患者人工晶狀體度數(shù)準(zhǔn)確性[D];暨南大學(xué);2010年
本文編號(hào):
2304108