發(fā)布時(shí)間：2018-08-07 18:23

【摘要】： 研究目的:對(duì)我國(guó)的一個(gè)LHON家系的線粒體基因組全序列進(jìn)行測(cè)序分析,探討其致病的分子基礎(chǔ)。 研究對(duì)象:一個(gè)包括11例患者的6代LHON家系,其中5個(gè)患者和4個(gè)表型正常的家系成員納入研究,另外,50例無(wú)任何親緣關(guān)系的正常健康人作對(duì)照。研究方法:(1)抽取患者和正常健康對(duì)照的外周血(抗凝);(2)利用Wizard Genomic DNA Purification試劑盒從外周血中提取和純化基因組DNA;(3)應(yīng)用等位基因特異性多重PCR(MAS-PCR)方法體系排查3個(gè)原發(fā)性LHON突變位點(diǎn);(4)利用兩套PCR體系擴(kuò)增線粒體DNA(mtDNA)全序列,進(jìn)行DNA測(cè)序分析并與最新劍橋標(biāo)準(zhǔn)mtDNA序列比對(duì)。 研究結(jié)果:該LHON家系未發(fā)現(xiàn)3個(gè)LHON原發(fā)性突變位點(diǎn)(G3460A, G11778A和T14484C),mtDNA全序列分析結(jié)果顯示該家系一個(gè)罕見(jiàn)的原發(fā)突變C4171突變及29個(gè)其他位點(diǎn)變異.其中多態(tài)性位點(diǎn)150T, 5231A, 12358G, 12372A,16257A, 16261T, 16129A, 4386C, 12007A,和16111T確定為東亞單倍型N9a1。原發(fā)突變C4171A使得ND1基因的289個(gè)密碼子由高度保守的亮氨酸變成了蛋氨酸。29個(gè)其他位點(diǎn)變異中包括27個(gè)為多態(tài)性(SNP),一個(gè)新的突變位點(diǎn)A14841G和一個(gè)已發(fā)現(xiàn)的A15095G。A14841G突變導(dǎo)致細(xì)胞色素b(Cytb)蛋白32位置上高度保守的天門(mén)冬氨酸變?yōu)榻z氨酸,推測(cè)該突變位點(diǎn)可能與C4171A突變?cè)贚HON表現(xiàn)上起著協(xié)同作用。 結(jié)論:該家系所有患者攜帶純合的C4171A突變位點(diǎn),結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了C4171A突變是LHON罕見(jiàn)原發(fā)突變。發(fā)現(xiàn)了LHON一個(gè)新的突變A14841G,并推測(cè)可能是LHON的一個(gè)繼發(fā)突變位點(diǎn),使得具有相同C4171A突變的LHON患者具有較高的外顯率和較低的視力恢復(fù)率。
[Abstract]:Objective: to study the molecular basis of mitochondrial genome sequence in a LHON family in China. Participants: a six-generation LHON pedigree including 11 patients, 5 patients and 4 normal phenotypic family members were included in the study, and 50 healthy individuals without any kinship were selected as controls. Methods: (1) extracting and purifying genomic DNA from peripheral blood (anticoagulant); (_ 2) of patients and healthy controls using Wizard Genomic DNA Purification kit; (3) screening three primary DNA by allele-specific multiplex PCR (MAS-PCR) method (4) two sets of PCR systems were used to amplify the whole mitochondrial DNA (mtDNA) sequence. DNA sequencing was performed and aligned with the latest Cambridge standard mtDNA sequence. Results: in this LHON pedigree, three LHON primary mutation loci (G3460A, G11778A and T14484C) were not found. The results showed that this family had a rare primary mutation C4171 and 29 other mutations. The polymorphism loci were 150T, 5231A, 12358G, 12372A 16257A, 16261T, 16129A, 4386C, 12007A, and 16111T were identified as East Asian haplotype N9a1. The primary mutation C4171A transformed 289 codon of ND1 gene from highly conserved leucine to methionine. Twenty-seven of the 29 other mutations, including 27 for polymorphic (SNP), a new mutation site A14841G, and a discovered A15095G.A14841G mutation, caused the mutation. The highly conserved aspartic acid of cytochrome b (Cytb) protein 32 was transformed into serine. It is speculated that this mutation site may play a synergistic role with C 4171A mutation in LHON expression. Conclusion: all patients in this family carry homozygous C4171A mutation, which further confirms that C4171A mutation is a rare primary mutation in LHON. A new mutation A14841G of LHON was found, and it was speculated that it might be a secondary mutation of LHON, which makes LHON patients with the same C4171A mutation have higher explicit rate and lower visual recovery rate.
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R774.6

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本文編號(hào)：2170934