【摘要】：目的觀察高濃度葡萄糖對人晶狀體上皮細胞硫醇轉移酶(thioltransferase,TTase)表達的影響。方法將體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細胞分別用葡萄糖濃度為5.5 mmol·L-1(正常對照組)、15.5 mmol·L-1、25.5 mmol·L-1及35.5 mmol·L-1(不同濃度高糖組),胎牛血清體積分數(shù)均為15%的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng),同時設5.5 mmol·L-1葡萄糖+30.0 mmol·L-1甘露醇高滲對照組,24 h后Western-blotting檢測TTase表達情況。選擇35.5 mmol·L-1高糖濃度培養(yǎng)細胞,分別在0 h、2 h、8 h、16h、24 h時間點收集細胞,Western-blotting檢測TTase表達,并測定TTase活性,細胞內總谷胱甘肽(T-GSH)、還原型谷胱甘肽(GSH)與氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量,計算GSSG與T-GSH的比值。結果 TTase表達隨葡萄糖濃度增加逐漸增強,在35.5mmol·L-1高糖組中表達最強,約為正常對照組的2.3倍(P0.01),25.5 mmol·L-1高糖組約為正常對照組1.7倍(P0.05),甘露醇高滲對照組TTase表達與正常對照組相比無明顯變化(P0.05)。在35.5 mmol·L-1高糖處理后2 h,TTase表達開始增高,8 h表達達到高峰,約為正常對照組的2.0倍(P0.01),隨后逐漸下降,16 h時約為正常對照組1.7倍(P0.01);24 h降為1.5倍(P0.05)。與TTase表達類似,TTase活性在35.5 mmol·L-1高糖處理后2 h開始升高,8 h達到高峰,約為正常對照組的1.8倍(P0.01),隨后逐漸下降。GSH在35.5 mmol·L-1高糖處理后16 h較對照組明顯下降(P0.05)。GSSG和GSSG/T-GSH比值在35.5 mmol·L-1高糖處理2 h后均顯著升高,分別約為正常對照組的3.5倍(P0.001)和3.3倍(P0.001),并隨時間推移不斷上升。結論高糖可誘導晶狀體上皮細胞TTase表達上調、活性增強,同時伴GSH的含量下降,GSSG含量上升。
[Abstract]:Objective to observe the effect of high concentration glucose on the expression of thioltransferase (TTase) in human lens epithelial cells. Methods cultured human lens epithelial cells in vitro were cultured in DMEM medium with glucose concentration of 5.5 mmol L-1 (normal control group), 15.5 mmol L -1 and 35.5 mmol L -1 (different concentrations of high glucose), respectively, and the volume fraction of fetal bovine serum was 15%. At the same time, 5.5 mmol L-1 glucose 30.0 mmol L-1 mannitol hypertonic control group 24 h after Western-blotting detection of TTase expression. The cells cultured at high glucose concentration (35.5 mmol L-1) were collected at 0 h, 8 h and 16 h for 24 h. The expression of TTase was detected by Western-blotting. The activity of TTase, the content of total glutathione (T-GSH), reduced glutathione (GSH) and oxidative glutathione (GSSG) were measured. The ratio of GSSG to T-GSH was calculated. Results the expression of TTase increased gradually with the increase of glucose concentration, and the expression of TTase was the strongest in 35.5mmol L-1 high glucose group. It was about 2.3-fold (P0.01) of normal control group (P0.01) and about 1.7-fold of normal control group in 25.5 mmol L-1 high glucose group (P0.05). The TTase expression of mannitol hyperosmotic control group had no significant change compared with normal control group (P0.05). After 35.5 mmol L ~ (-1) high glucose treatment, the expression of TTase began to increase to a peak at 8 h, which was about 2.0-fold (P0.01) of the normal control group, and then decreased to 1.5-fold (P0.01) at 16 h after the treatment compared with that of the normal control group (P0.01) at 24 h. After 35.5 mmol L ~ (-1) high glucose treatment, the activity of TTase was increased to a peak at 8 h after treatment with 35.5 mmol L ~ (-1) high glucose. Compared with the control group, the ratio of GSSG and GSSG/T-GSH increased significantly after 35.5 mmol L ~ (-1) high glucose treatment for 2 h (P0.05), and the ratio of GSSG to GSSG/T-GSH was significantly increased after 35.5 mmol L ~ (-1) high glucose treatment for 2 h after treatment with 35.5 mmol 路L ~ (-1) high glucose (P _ (0.01). It was about 3.5 times (P0.001) and 3.3 times (P0.001) as compared with the normal control group, and increased with time. Conclusion High glucose can induce the up-regulation of TTase expression and increase of activity in lens epithelial cells, while the content of GSH decreases and the content of GSSG increases.
【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學唐都醫(yī)院眼科;
【基金】：國家自然科學基金資助(編號:81070720)~~
【分類號】：R587.2;R776.1

【參考文獻】

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本文編號：2154990