【摘要】：目的觀察大鼠角膜在胚胎期及生后發(fā)育期缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia-inducible factor-1 alpha,HIF-1α)的表達,探討HIF-1α與角膜發(fā)育之間的關(guān)系。方法取實驗用Wistar大鼠分為8組:胚胎12 d(E12)、胚胎16 d(E16)、胚胎20 d(E20)、生后1 d(P1)、生后7 d(P7)、生后15 d(P15)、生后21 d(P21)、成年組,每組3只鼠6眼,共48眼。每只鼠取一眼,采用免疫組織化學(xué)方法檢測HIF-1α的表達,另一眼采用實時熒光定量PCR方法檢測角膜組織中HIF-1αmRNA的表達(E12、E16時鼠胚眼球較小,無法分離角膜組織,未行PCR檢測)。結(jié)果免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,大鼠在角膜發(fā)育過程中,HIF-1α的表達存在時空變化。E12時,由表面外胚層分化的兩層細胞內(nèi)可見明顯棕黃色顆粒。E16時,分化形成的上皮層、基質(zhì)層、內(nèi)皮層中HIF-1α陽性表達顯著。E20時,棕黃色顆粒集中表達在上皮層、內(nèi)皮層,基質(zhì)層染色較弱。P1、P7時,大鼠眼瞼粘連,角膜各層中HIF-1α維持少量表達,上皮、內(nèi)皮細胞較基質(zhì)細胞染色明顯。P15時,HIF-1α在上皮層陽性著色尤其強烈,細胞核、細胞漿棕黃色顆粒明顯,基質(zhì)層未見陽性著色,內(nèi)皮層見少量細胞核著染。P21時,HIF-1α的陽性表達更加集中在上皮層基底細胞,基質(zhì)層、內(nèi)皮層表達陰性。成年組,角膜中僅在上皮基底細胞見HIF-1α陽性表達,余未見陽性。實時熒光定量PCR顯示HIF-1αmRNA在角膜發(fā)育期各組表達量不同,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=97.00、P0.05)。P1組與E20組之間,成年組與P21組之間比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.20、0.05),其余各組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均為P0.05)。結(jié)論 HIF-1α在大鼠角膜發(fā)育過程中存在陽性表達,且隨發(fā)育時期不同表達部位、表達量發(fā)生變化。HIF-1α可能在角膜各層分化、細胞分裂過程中發(fā)揮重要作用。
[Abstract]:Objective to observe the expression of hypoxia-inducible factor-1 alpha-HIF-1 偽 (hypoxia-inducible factor-1 alpha-HIF-1 偽) in rat cornea at embryonic and postnatal stages, and to explore the relationship between HIF-1 偽 and corneal development. Methods Wistar rats were divided into 8 groups: embryonic 12 d (E12), embryo 16 d (E16), embryo 20 d (E20), postnatal day 1 (P1), postnatal 7 d (P7), postnatal 15 d (P15), postnatal 21 d (P21). The expression of HIF-1 偽 was detected by immunohistochemistry in each mouse, and the expression of HIF-1 偽 mRNA in cornea was detected by real-time fluorescence quantitative PCR. Results Immunohistochemical staining showed that the expression of HIF-1 偽 in the cornea of rats had temporal and spatial changes. E12, when the two layers of cells differentiated from the surface ectoderm could be seen in the brown granules. E16, the epithelium and stroma were differentiated into epithelium and stroma. When HIF-1 偽 positive expression was significant in the endodermis. E20, the brown granules were mainly expressed in the upper cortex, endodermis and stroma layer. When the staining was weak in the stromal layer, the eyelid adhesion was observed in rats, and HIF-1 偽 was expressed in a small amount in each layer of cornea, epithelium. The positive staining of HIF-1 偽 in the epithelium was stronger in endothelial cells than in stromal cells (P 15), the brown granules in nucleus and cytoplasm were obvious, and no positive staining was found in matrix layer. The positive expression of HIF-1 偽 was more concentrated in basal cells, stromal layer and endodermis of endodermis. In adult group, only HIF-1 偽 positive expression was found in epithelial basal cells, but no HIF-1 偽 expression was found in other corneas. The expression of HIF-1 偽 mRNA in each group was different in the development phase of cornea by real-time fluorescence quantitative PCR, and the difference was statistically significant (F _ (97.00) P _ (0.05). There was a significant difference between the P1 group and the E20 group, and between the adult group and the P21 group. There was no significant difference between the two groups (P < 0.05), but there were significant differences among the other groups (P0.05). Conclusion there is a positive expression of HIF-1 偽 in the development of cornea in rats. HIF-1 偽 may play an important role in the process of corneal differentiation and cell division.
【作者單位】： 青島眼科醫(yī)院;
【分類號】：R77

【參考文獻】

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本文編號：2136355