本文選題：根蛋白 + 視網(wǎng)膜神經節(jié)細胞-　； 參考：《眼科新進展》2014年05期

【摘要】：目的觀察低氧對視網(wǎng)膜神經節(jié)細胞(retinal ganglion cells,RGC)-5中根蛋白(radixin,RDX)表達的影響,探討低氧損傷中RGC的損傷機制和可能的保護途徑。方法常規(guī)培養(yǎng)RGC-5,用RGC特異表面標記性抗原Thy-1鑒定;CoCl2法建立低氧模型,以含終濃度為100μmol·L-1CoCl2培養(yǎng)基培養(yǎng)RGC-5 3 h、6 h、12 h、24 h、48 h,采用Real-time RT-PCR和Western blot檢測RDX mRNA及其蛋白在RGC-5中的表達情況,采用免疫熒光觀察RDX在RGC-5細胞中的表達及定位。結果體外培養(yǎng)的RGC-5呈梭形或多邊形,特異性表面標記性抗原Thy-1反應陽性。Real-time RT-PCR結果顯示,低氧組RDX mRNA表達呈進行性增強,于低氧6 h達到高峰后開始下降;正常對照組RDX mRNA的相對表達量為1.00±0.11,低氧3 h、6 h、12 h、24 h、48 h分別為1.37±0.18、1.75±0.32、1.21±0.23、0.91±0.19、0.63±0.26,總體比較差異有統(tǒng)計學意義(F=813.717,P=0.000)。Western blot結果顯示,不同培養(yǎng)條件下RGC-5細胞中RDX蛋白的總體比較差異有統(tǒng)計學意義(F=1.279,P=0.000)。低氧3 h、6 h、12 h、24 h組RDX/GAPDH A值均高于正常對照組,差異均有統(tǒng)計學意義(t=55.301,P=0.000;t=139.986,P=0.000;t=37.552,P=0.000;t=4.183,P=0.014);低氧48 h組RDX/GAPDH A值(0.24±0.03)低于正常對照組(0.33±0.02),差異有統(tǒng)計學意義(t=38.889,P=0.000)。在低氧組內不同時間點比較,RDX/GAPDH A值隨時間的延長呈逐漸上升趨勢,于低氧6 h達高峰,然后開始下降,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。免疫熒光觀察發(fā)現(xiàn)RDX蛋白陽性表達在RGC-5細胞中,與正常對照組相比,低氧組RDX的表達先增強(6h)后減弱。結論低氧條件下小鼠RGC-5細胞中RDX表達水平先升高后降低,可能與視網(wǎng)膜新生血管疾病中RGC凋亡相關。
[Abstract]:Objective to observe the effect of hypoxia on the expression of root protein (RDX) in (retinal ganglion cells of retinal ganglion cells (RGCs) -5, and to explore the mechanism and possible protective mechanisms of RGCs in hypoxic injury. Methods RGC-5 was cultured routinely and RGC-specific surface marker antigen Thy-1 was used to identify hypoxia model. RGC-53 h ~ (6) h ~ (12) ~ (24) h ~ (24) h ~ 48 h culture medium containing 100 渭 mol L ~ (-1) CoCl2. The expression of RDX mRNA and its protein in RGC-5 was detected by real-time RT-PCR and Western blot. The expression and localization of RDX in RGC-5 cells were observed by immunofluorescence. Results RGC-5 in vitro was fusiform or polygonal, and the expression of RDX mRNA in hypoxia group was increased progressively, and then decreased after 6 hours of hypoxia, and the specific surface marker antigen Thy-1 reaction was positive. Real-time RT-PCR showed that the expression of RDX mRNA in hypoxia group increased progressively. The relative expression of RDX mRNA was 1.00 鹵0.11 in the control group and 1.37 鹵0.18 鹵1.75 鹵0.32 鹵0.23 鹵0.63 鹵0.26 in the control group, respectively. The results of Western blot showed that the RDX protein in RGC-5 cells cultured under different culture conditions was significantly different from that in the control group (F813.717P0. 000) (F1. 279P0. 000). The RDX / GAPDH A value in hypoxia group was significantly higher than that in normal control group (t = 55.301), and the difference was statistically significant (t ~ (55.301) P ~ (0.000) P ~ (0.000) P ~ (0.000) ~ (0.000) ~ (0.552) ~ (0.000) ~ (0.552) P ~ (0.000) P ~ (0.000) ~ (4) 183P0.014), and (0.24 鹵0.03) (0.24 鹵0.03) in hypoxia 48 h group was lower than that in normal control group (t ~ (38.889P ~ (0.000) (t ~ (38.889P ~ (0.000), the difference was statistically significant (t ~ (38.889P ~ (0.000). The value of RDX / GAPDH A increased gradually with the prolongation of time and reached its peak at 6 h after hypoxia and then began to decrease. The difference was statistically significant (P0.05). The positive expression of RDX protein in RGC-5 cells was observed by immunofluorescence. Compared with the control group, the expression of RDX in hypoxia group was increased at first (6 h) and then decreased. Conclusion the expression of RDX in RGC-5 cells increased first and then decreased under hypoxia, which may be related to the apoptosis of RGC in retinal neovascularization disease.
【作者單位】： 濰坊醫(yī)學院;山東省眼科研究所;青島眼科醫(yī)院;
【分類號】：R774.1

【共引文獻】

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本文編號：2111997