發(fā)布時(shí)間：2018-07-01 19:28

  本文選題：細(xì)胞粘附激酶β + 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子��； 參考：《蘇州大學(xué)》2010年博士論文

【摘要】：【目的】視網(wǎng)膜新生血管形成(retinal neovascularization,RNV)是多種缺血缺氧性眼底病共有的病理改變。RNV會(huì)引起視網(wǎng)膜纖維組織增生,視網(wǎng)膜脫離,甚至視力喪失,已成為發(fā)達(dá)國(guó)家致盲性眼病的首要原因,也成為威脅我國(guó)人民視力健康的重要原因。明確RNV發(fā)生發(fā)展及其調(diào)控的分子機(jī)制,并進(jìn)而尋找新的非侵入性的治療方法已成為眼底病研究的重要課題。細(xì)胞粘附激酶β(cellular adhesion kinaseβ, CAKβ)是一種能被細(xì)胞內(nèi)鈣濃度增高及多種刺激信號(hào)激活的具有明顯的酪氨酸激酶和自身激酶活性的信號(hào)分子,參與細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、分化等,與細(xì)胞多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和多種生物學(xué)功能有密切關(guān)系。然而,CAKβ在RNV中的作用及其與VEGF的關(guān)系尚不清楚。本研究建立氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜新生血管形成模型,觀察VEGF、CAKβ基因及蛋白的表達(dá),探討CAKβ通路在RNV中的作用以及氟伐他汀、厄貝沙坦干預(yù)對(duì)其的影響。 【方法】參照文獻(xiàn)建立氧誘導(dǎo)的小鼠視網(wǎng)膜新生血管形成(oxygen-induced retinopathy, OIR)模型。(1)選擇健康7日齡(P7)C57BL/6J小鼠,共80只,雌雄不拘。隨機(jī)分為高氧組(OIR組)和對(duì)照組(C組)。分別在P12、P14、P17、P19處死幼鼠。(2)選擇P7 C57BL/6J小鼠共180只,雌雄不拘。隨機(jī)分為C組、OIR組及模型+貝伐單抗組(BVZ組)。BVZ組在P12時(shí)腹腔麻醉后玻璃體內(nèi)注射貝伐單抗5mg/Kg,分別在P12、P14、P17處死幼鼠。(3)選擇P7 C57BL/6J小鼠共140只,雌雄不拘。隨機(jī)分為5組:C組、模型+氟伐他汀組(FVS組)(P12時(shí)腹腔麻醉后雙眼玻璃體內(nèi)注射氟伐他汀10mg/Kg/d)、模型+厄貝沙坦組(IBS組)(P12時(shí)腹腔麻醉后雙眼玻璃體內(nèi)注射厄貝沙坦50mg/Kg/d)、模型+氟伐他汀組+厄貝沙坦組(FVS+IBS組)(P12時(shí)腹腔麻醉后雙眼玻璃體內(nèi)注射同上劑量的氟伐他汀及厄貝沙坦)、OIR組。P17處死幼鼠。(4)視網(wǎng)膜組織切片及鋪片定性及定量觀察RNV;2’,7’-二氯雙氫熒光素雙乙酸酯(DCFH-DA)熒光探針檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平,實(shí)時(shí)RT-PCR檢測(cè)VEGF mRNA、CAKβmRNA表達(dá),Western blot技術(shù)檢測(cè)VEGF蛋白、CAKβ及其Tyr402磷酸化蛋白表達(dá)。 【結(jié)果】(1)將P7幼鼠置于75%高氧環(huán)境5天后移至正常氧環(huán)境,可成功誘導(dǎo)出RNV模型。P14即可產(chǎn)生視網(wǎng)膜新生血管,P17新生血管最明顯。新生血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)ROS水平改變與定量及定性觀察到的視網(wǎng)膜新生血管變化相一致。(2)正常新生小鼠P12時(shí),視網(wǎng)膜VEGF mRNA及蛋白表達(dá),CAKβmRNA及蛋白表達(dá),CAKβTyr402/CAKβ比值均處于最高;OIR組自P12開(kāi)始,VEGF mRNA及蛋白表達(dá),CAKβmRNA及蛋白及磷酸化蛋白表達(dá)顯著升高,到P17時(shí)達(dá)高峰,CAKβTyr402/CAKβ比值在P14,P17也顯著高于對(duì)照組;貝伐單抗干預(yù)后第2天,VEGF mRNA及蛋白表達(dá)即顯著低于同時(shí)段OIR組,與同時(shí)段C組無(wú)顯著差異,其后一直處于較低水平。CAKβmRNA及蛋白表達(dá)也顯著低于同時(shí)段OIR組,但仍顯著高于同時(shí)段C組。表明貝伐單抗對(duì)于VEGF及CAKβ的表達(dá)均具有良好的抑制作用,但對(duì)CAKβ的抑制效率不及VEGF。(3)厄貝沙坦干預(yù)組及氟伐他汀干預(yù)組新生血管增生情況明顯延緩,突破內(nèi)界膜的細(xì)胞核計(jì)數(shù)均顯著少于非干預(yù)組,細(xì)胞內(nèi)ROS水平、VEGF mRNA及蛋白表達(dá)、CAKβmRNA以及CAKβ及其Tyr402磷酸化蛋白均較非干預(yù)組有顯著下降。而兩藥聯(lián)用在上述指標(biāo)均優(yōu)于各自單獨(dú)用藥。 【結(jié)論】(1)氧化應(yīng)激、VEGF及CAKβ在RNV中起重要作用。(2)貝伐單抗對(duì)VEGF及CAKβ均具有良好的抑制作用,但對(duì)CAKβ的抑制效率不及VEGF。(3)厄貝沙坦及氟伐他汀均能有效降低ROS水平、下調(diào)VEGF及CAKβ表達(dá),改善血管新生。兩藥聯(lián)用更有利于改善視網(wǎng)膜新生血管形成。(4)CAKβ參與了RNV的多種信號(hào)通路, CAKβ可能是抗RNV治療的一個(gè)新的靶分子。
[Abstract]:Retinal neovascularization ( RNV ) is the primary cause of blindness in developed countries . It is an important cause of blindness in developed countries . The role of RNV in RNV and its relationship with VEGF are not clear .


Methods The expression of VEGF mRNA , CAK尾 mRNA and its Tyr402 phosphorylation protein in mice were randomly divided into five groups : group C , model + fluvastatin group ( FVS + IBS group ) .


The expression of VEGF mRNA and protein , CAK尾 mRNA and protein expression and CAK尾 Tyr402 / CAK尾 were significantly lower than those in non - intervention group . The expression of CAK尾 mRNA and protein was significantly lower than that in non - intervention group . The expression of CAK尾 mRNA and protein was significantly lower than that in non - intervention group .


Conclusion : ( 1 ) Oxidative stress , VEGF and CAK尾 play an important role in RNV .
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R774.1

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2088907