本文選題：P53磷酸化 + 鼻咽癌�。� 參考：《中南大學》2013年碩士論文

【摘要】：目的：建立鼻咽癌HNE2放射不敏感細胞系,即HNE2-NRC,研究HNE2-NRC與HNE2細胞系中P53磷酸化的差異性表達,并在鼻咽部組織芯片中檢測P53Ser376位點磷酸化水平,探討P53蛋白磷酸化與鼻咽癌治療反應的關系。 方法：通過亞致死射線劑量、遞增射線劑量反復照射人鼻咽癌細胞株HNE2的方法建立放射不敏感細胞株HNE2-NRC以HNE2-NRC及HNE2為研究對象,觀察不同的放射劑量照射前后細胞形態(tài)、細胞增殖、細胞凋亡及細胞周期的變化。倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)的變化,克隆形成實驗觀察細胞克隆形成率及生長曲線、MTS法測定放射線照射后細胞增殖抑制。流式細胞術檢測HNE2-NRC及HNE2細胞周期的差異。Western Blotting測定HNE2-NRC與HNE2細胞系中P53磷酸化的差異性表達,免疫組化法檢測鼻咽部組織芯片中P53Ser376位點磷酸化水平。 結果：克隆形成實驗表明HNE2-NRC較HNE2克隆形成力強,放療增敏比SER為0.7961。MTS實驗檢測到HNE2與HNE2-NRC相比,生長受到抑制,在6h、2d、6d、8d時差別均有統(tǒng)計學意義。流式細胞檢測兩株細胞周期具有差異,HNE2G2/M期細胞比率為23.88%,而HNE2-NRC G2/M期細胞比率為10.84%,且HNE2-NRC G0/G1期細胞比率增加。Western Blot結果顯示HNE2-NRC與HNE2相比,P53、P53Ser15、Thr81、Thr55、 Ser389磷酸化水平升高,而Ser6、Ser9、Ser315、Ser376磷酸化水平降低。免疫組化染色檢測鼻咽部組織芯片中P53Ser376表達,放療后生存期5年的患者與放療后生存期5年的患者相比較,P53Ser376磷酸化水平有降低的趨勢。 結論： 1、本研究建立了放射不敏感細胞系HNE2-NRC,與親本細胞HNE2相比,具有耐放射的生長特性。 2、在HNE2-NRC細胞中,P53Serl5、Thr55磷酸化水平升高；而P53Ser315、Ser376發(fā)生去磷酸化,提示P53相關位點的磷酸化特征譜與鼻咽癌放射抵抗相關。 3、在組織芯片水平,P53Ser376磷酸化水平與放射治療的鼻咽癌病人預后呈一定的相關性,進一步提示P53磷酸化譜作為放療敏感性預測的可能性。圖10幅,表4個,參考文獻124篇。
[Abstract]:Objective: to establish a radiosensitive HNE2 cell line, HNE2-NRC, to study the differential expression of p53 phosphorylation in HNE2-NRC and HNE2 cell lines, and to detect the phosphorylation level of P53Ser376 in nasopharyngeal tissue microarray. To investigate the relationship between p53 protein phosphorylation and the therapeutic response of nasopharyngeal carcinoma (NPC). Methods: human nasopharyngeal carcinoma cell line HNE2 was irradiated repeatedly by sublethal and incremental radiation doses. HNE2-NRC and HNE2-NRC were used to observe the morphology of HNE2-NRC and HNE2 cells before and after irradiation. Cell proliferation, apoptosis and cell cycle changes. The cell morphology was observed under inverted microscope, the colony formation rate was observed and the growth curve was used to determine the inhibition of cell proliferation after irradiation. The difference of HNE2-NRC and HNE2 cell cycle was detected by flow cytometry. Western blotting was used to detect the expression of p53 phosphorylation in HNE2-NRC and HNE2 cell lines. The phosphorylation level of P53Ser376 in nasopharyngeal tissue microarray was detected by immunohistochemistry. Results: the clone forming ability of HNE2-NRC was stronger than that of HNE2. The sensitivity ratio of HNE2-NRC was 0.7961.MTS assay showed that HNE2 was inhibited compared with HNE2-NRC, and the difference was significant at 6h / 2d ~ 6d ~ (-1). The cell ratio of HNE2-NRC G _ 2 / M phase was 23.88, while that of HNE2-NRC G _ 2 / M phase was 10.84 and the ratio of HNE2-NRC G _ 0 / G _ 1 phase increased. Western blot analysis showed that the phosphorylation level of P53P53SerSer15Thr81Thr55, Ser389 was increased, while Ser6Ser9Ser315Ser376 was decreased in HNE2-NRC G0 / G1 phase compared with HNE2. The expression of P53Ser376 in nasopharyngeal tissue microarray was detected by immunohistochemical staining. The phosphorylation level of P53Ser376 was decreased in patients with 5 years survival after radiotherapy and 5 years after radiotherapy. Conclusion: 1. The radiosensitive cell line HNE2-NRC2.Compared with parent HNE2, HNE2-NRC2.2The phosphorylation level of P53Serl5hr55 in HNE2-NRC cells was increased, while that of P53Ser315Ser376 was dephosphorylated. It was suggested that the phosphorylation characteristic spectrum of p53 related sites was related to the radiation resistance of nasopharyngeal carcinoma. 3. The phosphorylation level of p53 Ser376 was correlated with the prognosis of patients with nasopharyngeal carcinoma after radiotherapy at the tissue microarray level. It is further suggested that P 53 phosphorylation spectrum can be used as a predictor of radiotherapy sensitivity. Ten figures, four tables and 124 references.
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R739.63

【共引文獻】

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本文編號：2072813