本文選題：硫酸卡那霉素 + 耳毒性��； 參考：《華中科技大學(xué)》2010年博士論文

【摘要】： 第一部分硫酸卡那霉素慢性致聾豚鼠聽(tīng)神經(jīng)和螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞變性的時(shí)序性及機(jī)制研究 目的：建立硫酸卡那霉素慢性致聾豚鼠模型。探討硫酸卡那霉素慢性致聾豚鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和聽(tīng)神經(jīng)施萬(wàn)細(xì)胞變性的時(shí)序性及機(jī)制。比較急慢性致聾模型的差異。方法：耳廓反射正常,聽(tīng)力正常的成年白色紅目豚鼠為研究對(duì)象,大腿內(nèi)側(cè)皮下每天注射硫酸卡那霉素500mg／kg,連續(xù)注射7天。注藥后第1天、7天、14天、28天、56天、70天和140天定量分析耳蝸毛細(xì)胞、螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、聽(tīng)神經(jīng)施萬(wàn)細(xì)胞和耳蝸內(nèi)前庭神經(jīng)節(jié)段聽(tīng)神經(jīng)橫切面積變化情況。結(jié)果：1、聽(tīng)功能：正常成年豚鼠的ABR閾值為35.83±5.97dBSPL,注藥后1、7、14、28、56、70和140天的ABR閾值分別為48.13±3.45、83.44±7.47、105.00±8.37、104.38±5.44、108.75±7.64、104.38±9.17和107.19±12.24 dBSPL(各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較,P0.001)。2、耳蝸中軸內(nèi)外毛細(xì)胞計(jì)數(shù)：與正常對(duì)照組比較,注藥后1、7、14、28、56、70和140天耳蝸中軸7個(gè)部位外毛細(xì)胞殘留率分別為98.56±1.26%、27.56±2.94%、20.81±2.76%、19.19±3.15%、19.25±2.24%、19.56±3.35%和18.60±2.73%(除1天組外,其余實(shí)驗(yàn)組與正常對(duì)照組比較,P0.001),底回外毛細(xì)胞殘留率分別為98.48±1.28%、24.99±2.52%、16.60±3.07%、11.94±1.34%、10.96±2.44%、11.05±2.32%和11.20±1.23%(除1天組外,其余實(shí)驗(yàn)組與正常對(duì)照組比較,P0.001)；耳蝸中軸7個(gè)部位內(nèi)毛細(xì)胞殘留率分別為99.00±0.97%、97.63±1.20%、67.56±4.60%、59.19±5.05%、56.81±3.97%、56.87±3.69%和57.20±3.45%(除1天和7天組外,其余實(shí)驗(yàn)組與正常對(duì)照組比較,P0.001),底回內(nèi)毛細(xì)胞殘留率分別為98.82±1.08%、96.92±1.03%、57.92±4.05%、38.21±3.45%、37.77±3.13%、36.34±3.19%和37.08±3.14%(除1天和7天組外,其余實(shí)驗(yàn)組與正常對(duì)照組比較,P0.001)。3、螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞計(jì)數(shù)：正常組及注藥后1、7、14、28、56、70和140天耳蝸7個(gè)部位螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量分別為4105.17±82.96、4008.00±94.19、3130.69±127.67、2858.38±153.48、2633.00±151.95、2618.06±129.76、2624.38±142.59和2625.63±137.69(除1天組外,其余實(shí)驗(yàn)組與正常對(duì)照組比較,P0.001)；正常組及注藥后1、7、14、28、56、70和140天耳蝸底回螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量分別為2091.00±86.62、2073.13±95.40、1576.94±96.77、1194.00±97.81、859.31±64.92、849.94±64.37、852.50±52.08和840.19±53.55(除1天組外,其余實(shí)驗(yàn)組與正常對(duì)照組比較,P0.001)。4、聽(tīng)神經(jīng)橫切面施萬(wàn)細(xì)胞計(jì)數(shù)：正常組及注藥后1、7、14、28、56、70和140天前庭神經(jīng)節(jié)段聽(tīng)神經(jīng)橫切面施萬(wàn)細(xì)胞數(shù)量分別為6167.17±80.81、6082.88±121.00、3946.00±128.67、3004.31±167.45、2742.44±90.61、2747.63±98.69、2730.38±78.08和2782.69±78.70(除1天組外,其余實(shí)驗(yàn)組與正常對(duì)照組比較,P0.001)。5、前庭神經(jīng)節(jié)段聽(tīng)神經(jīng)橫切面面積測(cè)量：正常組及注藥后1、7、14、28、56、70和140天前庭神經(jīng)節(jié)段聽(tīng)神經(jīng)橫切面面積分別為0.15±0.020、0.17±0.004、0.12±0.007、0.13±0.007、0.13±0.007、0.11±0.012、0.12±0.008和0.13±0.013mm2(各實(shí)驗(yàn)組與正常對(duì)照組比較,P0.001)。結(jié)論：1、硫酸卡那霉素對(duì)聽(tīng)功能、耳蝸毛細(xì)胞、螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、聽(tīng)神經(jīng)施萬(wàn)細(xì)胞的影響是逐漸累積的。2、螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和施萬(wàn)細(xì)胞的早期變性可能是硫酸卡那霉素直接毒性作用所致,螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞后期的變性可能與毛細(xì)胞和施萬(wàn)細(xì)胞的丟失、硫酸卡那霉素的累積效應(yīng)等多重因素有關(guān)。3、硫酸卡那霉素急慢性致聾模型細(xì)胞變性時(shí)序性有差異。 第二部分硫酸卡那霉素慢性致聾豚鼠蝸神經(jīng)背核神經(jīng)元和突觸可塑性的時(shí)序性及機(jī)制研究 目的：探討硫酸卡那霉素慢性致聾豚鼠蝸神經(jīng)背核(DCN)梭形細(xì)胞和聽(tīng)神經(jīng)-梭形細(xì)胞(AN／FC)突觸可塑性變化的時(shí)序性和機(jī)制。方法：耳廓反射正常,聽(tīng)力正常的成年白色紅目豚鼠為研究對(duì)象,大腿內(nèi)側(cè)皮下每天注射硫酸卡那霉素500mg／kg,連續(xù)注射7天。注藥后第1天、7天、14天、28天、56天、70天和140天研究成年豚鼠DCN梭形細(xì)胞和聽(tīng)神經(jīng)-梭形細(xì)胞突觸超微結(jié)構(gòu)變化；同時(shí)應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)定量分析DCN局部胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)mRNA表達(dá)變化情況。結(jié)果：1、聽(tīng)功能：正常成年豚鼠的ABR閾值為36.00±4.76dBSPL,注藥后1、7、14、28、56、70和140天的ABR閾值分別為46.46±3.45、80.63±5.95、103.95±6.59、106.25±5.16、108.33±8.81、106.67±9.17和106.88±7.91dBSPL(各實(shí)驗(yàn)組與正常對(duì)照組比較,P0.001)。、2、IGF-1 mRNA擴(kuò)增倍數(shù)：正常組及注藥后1、7、14、28、56、70和140天DCN局部IGF-1 mRNA擴(kuò)增倍數(shù)分別為1、0.88±0.17、1.53±0.21、2.07±0.17、1.51±0.23、1.92±0.14、1.87±0.15和0.97±0.11(除第140天組外,其余實(shí)驗(yàn)組與正常對(duì)照組比較,P0.001)。3、DCN梭形細(xì)胞和AN／FC突觸超微結(jié)構(gòu)：從注藥后第7天到56天梭形細(xì)胞的線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的腫脹逐漸加重、溶酶體逐漸增多、核膜皺縮；AN／FC突觸線粒體腫脹也逐漸加重,神經(jīng)元和突觸線粒體有空泡形成；注藥后70天和140天神經(jīng)元和突觸超微結(jié)構(gòu)逐漸恢復(fù)正常。4、AN／FC突觸突觸后密度(PSD)厚度測(cè)量：正常組及注藥后1、7、14、28、56、70和140天PSD厚度分別為47.91±4.56、72.54±1.98、67.56±1.58、66.49±2.24、47.78±2.16、47.80±3.35、49.42±1.60、47.32±4.45和49.48±2.47 nm(與正常對(duì)照組比較,1、7和14天組,P0.001；28、56、70和140天組,P0.05)。結(jié)論：1、硫酸卡那霉素可能對(duì)DCN梭形細(xì)胞和突觸有直接毒性作用,對(duì)梭形細(xì)胞和AN／FC突觸的超微結(jié)構(gòu)的影響是逐漸累積的。2、對(duì)硫酸卡那霉素導(dǎo)致的直接損傷和進(jìn)行性不完全去傳入,DCN的神經(jīng)元和突觸具有可塑性,神經(jīng)元和突觸的超微結(jié)構(gòu)可以恢復(fù)正常。3、DCN局部的IGF-1可能通過(guò)抑制神經(jīng)元凋亡和促進(jìn)突觸的重排參與了神經(jīng)元和突觸重塑過(guò)程。 第三部分興奮性和抑制性遞質(zhì)受體在硫酸卡那霉素慢性致聾豚鼠蝸神經(jīng)背核突觸重塑中作用研究 目的：探討興奮性和抑制性遞質(zhì)受體在硫酸卡那霉素慢性致聾豚鼠蝸神經(jīng)背核突觸重塑中的作用。方法：耳廓反射正常,聽(tīng)力正常的成年白色紅目豚鼠為研究對(duì)象,大腿內(nèi)側(cè)皮下每天注射硫酸卡那霉素500mg／kg,連續(xù)注射7天。注藥后第1天、7天、14天、28天、56天、70天和140天,采用免疫組化技術(shù)研究成年豚鼠蝸神經(jīng)背核突觸素表達(dá)變化的情況,同時(shí)應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)定量分析蝸神經(jīng)背核N-甲基-D-天冬氨酸型受體1(NR1)和γ-氨基丁酸型受體A型α1亞單位(GABRA1)mRNA表達(dá)變化情況。結(jié)果：1、蝸神經(jīng)背核突觸素的表達(dá)有兩種形式。一種斑點(diǎn)狀均勻分布在神經(jīng)纖維網(wǎng)上,另一種分布在細(xì)胞體周?chē)�。在蝸神�?jīng)背核,第二種形式的分布較常見(jiàn)。2、除70天和140天組外,其余實(shí)驗(yàn)組的突觸輸入數(shù)量均有不同程度的增加(與對(duì)照組比較,P0.05)。突觸素平均灰度(突觸素表達(dá)量),1天、7天、28天、56天實(shí)驗(yàn)組表達(dá)增加(與對(duì)照組比較,P0.001)。突觸素免疫染色面積(突觸末端占據(jù)的面積),只有7天14天組有顯著的下降(與對(duì)照組比較,P≤0.01)。3、正常組及注藥后1、7、14、28、56、70和140天蝸神經(jīng)背核內(nèi)NR1 mRNA擴(kuò)增倍數(shù)分別為1、1.58±0.18、2.20±0.33、3.67±0.34、2.04±0.30、1.34±0.36、1.28±0.21和1.29±0.17。與對(duì)照組比較,第1、7、14和28天,NR1 mRNA表達(dá)上調(diào)(P0.001)。4、正常組及注藥后1、7、14、28、56、70和140天蝸神經(jīng)背核內(nèi)GABRA1 mRNA擴(kuò)增倍數(shù)分別為1、0.77±0.08、0.45±0.09、0.34±0.07、0.32±0.07、0.90±0.11、0.94±0.12和0.92±0.11,與對(duì)照組比較,第1、7、14和28天,GABRA1 mRNA表達(dá)下調(diào)(P0.001)。結(jié)論：1、硫酸卡那霉素對(duì)蝸神經(jīng)背核內(nèi)突觸數(shù)量以及興奮性和抑制性遞質(zhì)受體的分布的影響是逐漸累積的。2、硫酸卡那霉素慢性致聾后,蝸神經(jīng)背核內(nèi)興奮性和抑制性遞質(zhì)受體出現(xiàn)重排。3、在硫酸卡那霉素所致進(jìn)行性不完全去傳入和神經(jīng)元損傷后,興奮性谷氨酸能突觸通路的活性增強(qiáng),抑制性GABA能突觸通路活性減弱。4、興奮性和抑制性遞質(zhì)受體重排可能在硫酸卡那霉素慢性致聾后突觸重塑中發(fā)揮了重要作用。
[Abstract]:The timing and mechanism of the degeneration of the auditory nerve and spiral ganglion cells of the first part of kanamycin sulfate chronic deafness guinea pig



Objective : To establish a model of chronic deafness guinea pigs with kanamycin sulfate . The results showed that the ABR thresholds were 98.56 鹵 1.26 % , 27.56 鹵 2.94 % , 20.81 鹵 8.37 , 19.19 鹵 5.44 , 19.25 鹵 7.64 , 19.56 鹵 3.35 % and 18.60 鹵 2.73 % , respectively .
The residual rates of hair cells were 99.00 鹵 0.97 % , 97.63 鹵 1.20 % , 67.56 鹵 4.60 % , 59.19 鹵 5.05 % , 56.81 鹵 3.97 % , 56.87 鹵 3.69 % and 57.20 鹵 3.45 % ( except for 1 day and 7 days ) .
Results : 1 銆，

本文編號(hào)：2056804