本文選題：誘導性多能干細胞 + 內(nèi)耳移植�。� 參考：《南昌大學》2014年碩士論文

【摘要】：研究目的： 利用顯微注射的方法將誘導性多能干細胞（iPSCs）移植至正常小鼠耳蝸內(nèi)，觀察其分化轉歸情況，為iPSCs的耳聾治療提供一定的理論依據(jù)和試驗基礎。 研究方法： 1.建立穩(wěn)定的小鼠iPSCs的培養(yǎng)體系，對穩(wěn)定傳代的小鼠iPSCs進行體外鑒定。 2.小鼠iPSCs細胞的標記和移植：用CM-Dil染料標記iPSCs，流式細胞儀鑒定標記效率。20只正常6-8周齡SPF級CD-1/ICR鼠隨機平均分為A、B兩組：A組為試驗組，B組為對照組，將左耳定為試驗耳，，實驗組移植CM-Dil標記的iPSCs，對照組移植等體積的DMEM基礎培養(yǎng)基。兩組均在術前1周和術后1月對小鼠左耳行聽性腦干反應（ABR）的檢測。 3.miPSCs耳蝸移植后分化細胞的鑒定：細胞移植1月后免疫組織熒光染色鑒定移植后的細胞是否表達毛細胞標志物（Myosin Ⅶa、Espin）和神經(jīng)元細胞標志物（Nestin、Neurofilament-M）。 4.miPSCs耳蝸內(nèi)移植后用HE染色鑒定是否有畸胎瘤形成。 結果： 1.成功建立了穩(wěn)定的小鼠iPSCs培養(yǎng)體系。穩(wěn)定傳代的小鼠iPSCs經(jīng)AP染色鑒定陽性且可形成EBs。 2.熒光染料（CM-Dil）對小鼠iPS細胞的標記效率達到96.42%。術前1周，A組、B組ABR反應閾分別為24.50±5.50dB SPL、26.00±6.15dB SPL；A、B兩組術前1周的ABR反應閾比較差異無統(tǒng)計學意義(p=0.572＞0.05)。術后1月，A組、B組ABR反應閾分別為70.50±4.97dB SPL、68.00±5.37dB SPL；A、B兩組術后1月的ABR反應閾比較差異無統(tǒng)計學意義(p=0.295＞0.05)。A、B兩組ABR反應閾術后均較術前高（p值均＜0.05)，差異有統(tǒng)計學意義。 3.A組小鼠耳蝸的內(nèi)外淋巴內(nèi)及蝸軸內(nèi)均可見CM-Dil標記的小鼠iPSCs，并且部分紅色熒光標記的細胞表達毛細胞標志物（Myosin Ⅶa、Espin）和神經(jīng)元細胞標志物（Nestin、Neurofilament-M）。B組耳蝸內(nèi)未見有紅色熒光表達。 4.HE染色鑒定移植miPSCs后耳蝸內(nèi)可見畸胎瘤形成。 結論： 1.耳蝸內(nèi)移植后的小鼠iPSCs可以分化為表達毛細胞標志物的細胞； 2.耳蝸內(nèi)移植后的小鼠iPSCs可以分化為表達神經(jīng)元標志物的細胞； 2.小鼠iPSCs耳蝸內(nèi)移植后有形成畸胎瘤的可能； 4.經(jīng)圓窗徑路耳蝸移植iPSCs短期內(nèi)不能改善因為損傷導致的小鼠聽力下降。
[Abstract]:Objective: to observe the differentiation and prognosis of induced pluripotent stem cells (iPSCs) in normal mouse cochlea by microinjection, and to provide a theoretical basis and experimental basis for the treatment of iPSCs for deafness. Methods: 1. To establish a stable culture system of mouse iPSCs, and to identify the stable passage of mouse iPSCs in vitro. 2. Labeling and transplantation of mouse iPSCs cells: iPSCswere labeled with CM-Dil dye, and 20 normal SPF CD-1 / ICR mice of 6-8 weeks old were randomly divided into two groups: group A: group A as control group, group B as control group, and group B as experimental ear. CM-Dil labeled iPSCswere transplanted in experimental group and DMEM basic medium was transplanted in control group. The auditory brainstem response (ABR) in the left ear of mice was detected 1 week before operation and 1 month after operation. 3. Identification of differentiated cells after cochlear transplantation of miPSCs: immunofluorescence staining after one month of cell transplantation to identify the fine cells after transplantation Whether the hair cell marker (Myosin 鈪

本文編號：2042852