本文選題：IL-4 + IL-13��； 參考：《遵義醫(yī)學(xué)院》2011年碩士論文

【摘要】：目的：本研究擬通過炎癥細(xì)胞因子IL-4、IL-13刺激HT-29MTX(一種可分泌粘蛋白的杯狀細(xì)胞)細(xì)胞,觀察其對(duì)粘蛋白的調(diào)節(jié)作用,從而進(jìn)一步探討分泌性中耳炎的發(fā)病機(jī)制。 方法：HT-29細(xì)胞株復(fù)蘇培養(yǎng)后,用10-5 mol MTX處理,待細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),傳代并鑒定細(xì)胞。IL-4、IL-13分別以不同濃度梯度(5 ng/mL、10ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL)刺激HT 29-MTX細(xì)胞分泌,培養(yǎng)24 h后,收集細(xì)胞培養(yǎng)基,并提取細(xì)胞RNA,進(jìn)行粘蛋白及其RNA定量分析。用50ng/mL的IL-4、IL-13不同時(shí)間長(zhǎng)度(6 h、12 h、24 h、36 h、48 h、72 h)刺激HT29MTX細(xì)胞分泌,收集培養(yǎng)基,并提取細(xì)胞RNA,進(jìn)行粘蛋白及其RNA定量分析。每個(gè)濃度梯度組及時(shí)間梯度組均設(shè)相應(yīng)對(duì)照組(加入PBS組)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果。 結(jié)果：(1)培養(yǎng)于含有IL-4、IL-13培養(yǎng)基的HT29-MTX細(xì)胞,當(dāng)IL-4、IL-13濃度達(dá)到10 ng/mL時(shí),隨著IL-4、IL-13濃度的增加,HT 29-MTX細(xì)胞表達(dá)MUC5BmRNA增加且MUC5B蛋白分泌量增加,與空白組相比(p0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)HT 29-MTX細(xì)胞暴露于50 ng/mL IL-4的培養(yǎng)基時(shí),在12h后,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),HT 29-MTX細(xì)胞表達(dá)MUC5BmRNA增加且MUC5B蛋白分泌量增加,與空白組相比(p0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)HT 29-MTX細(xì)胞暴露于50 ng/mL IL-13的培養(yǎng)基時(shí),在24 h后,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),其表達(dá)增加且MUC5B蛋白分泌量增加,與空白組相比(p0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(4)在細(xì)胞培養(yǎng)整個(gè)過程中,加入各種濃度的IL-4、IL-13無出現(xiàn)細(xì)胞死亡現(xiàn)象,無表現(xiàn)出細(xì)胞毒性。 結(jié)論：(1)MUC5B參與分泌性中耳炎的病理過程。(2)IL-4、IL-13上調(diào)體外培養(yǎng)的杯狀細(xì)胞MUC5B的分泌,提示其可能參與慢性分泌性中耳炎的病理生理過程,為慢性分泌性中耳炎的治療提供理論依據(jù)。
[Abstract]:Aim: to explore the mechanism of secretory otitis media by stimulating HT-29 MTX cells (goblet cells) with inflammatory cytokines IL-4 and IL-13. Methods after resuscitation culture, the cell line was resuscitated and treated with 10-5 mol MTX. When the cell grew to 80% fusion, the cell line. IL-4 IL-13 was subcultured and identified. The HT29-MTX cells were stimulated with different concentration gradient of 5 ng / mL ~ (10) ng / m ~ (-1) ~ (50) ng / m ~ (-1) ~ 100 ng / m ~ (-1). After 24 h of culture, the cell culture medium was collected. Cell RNAs were extracted for quantitative analysis of mucin and its RNA. HT29MTX cells were stimulated with 50 ng / mL IL-4 IL-13 for 6 h ~ 12 h ~ 24 h ~ 36 h ~ 48 h ~ 72 h). The culture medium was collected and cell RNAs were extracted for quantitative analysis of mucin and its RNA. Each concentration gradient group and time gradient group were divided into corresponding control group (add PBS group). Statistical analysis results. Results when the concentration of IL-4 / IL-13 reached 10 ng / mL, the expression of MUC5B mRNA and the secretion of MUC5B protein in HT29-MTX cells increased with the increase of IL-4 / IL-13 concentration. Compared with the control group, the difference was statistically significant. When the cells were exposed to 50 ng / mL IL-4 medium, the expression of MUC5B mRNA and the secretion of MUC5B protein were increased with the prolongation of time. Compared with the control group, the difference was statistically significant. When the cells were exposed to 50 ng / mL IL-13 medium, the expression of MUC5B protein increased and the secretion of MUC5B protein increased with the prolongation of time after 24 h. Compared with the control group, the difference was statistically significant (P < 0.05). During the whole process of cell culture, no cell death and no cytotoxicity were found in the addition of IL-4 / IL-13 at various concentrations. Conclusion MUC5B is involved in the pathological process of secretory otitis media. IL-4 / IL-13 up-regulates the secretion of MUC5B in goblet cells in vitro, which suggests that MUC5B may participate in the pathophysiological process of chronic secretory otitis media and provide a theoretical basis for the treatment of chronic secretory otitis media.
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R764.21

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本文編號(hào)：2033314