發(fā)布時(shí)間：2018-06-01 03:18

  本文選題：慢性 + 高眼壓　； 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2010年碩士論文

【摘要】： 目的:本研究在建立兔慢性高眼壓動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上,采用雙向電泳(two-dimensional gel electrophoresis , 2-DE)和液相色譜芯片串聯(lián)質(zhì)譜(LC-CHIP-MS/MS)分析技術(shù),研究慢性高眼壓下的視網(wǎng)膜組織蛋白質(zhì)表達(dá)譜的變化,為青光眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinal ganglion cells , RGCs)的損傷機(jī)制和防治研究提供新的思路。 方法:1.動(dòng)物模型的建立:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物左眼前房?jī)?nèi)注入0.2 ml復(fù)方卡波姆溶液制作成慢性高眼壓模型,右眼為正常對(duì)照眼。慢性高眼壓模型以眼壓22 mmHg并能持續(xù)1周為標(biāo)準(zhǔn)。如眼壓22 mmHg,7 d后按上述方法重復(fù)注藥1次。造模成功后每周測(cè)2次眼壓。在造模后28 d摘除動(dòng)物眼球,取視網(wǎng)膜組織,提取視網(wǎng)膜組織蛋白質(zhì)。 2. 2-DE:根據(jù)Bio-Rad雙向電泳實(shí)驗(yàn)指南進(jìn)行。2-DE的分離結(jié)果用經(jīng)典質(zhì)譜兼容銀染法染色后進(jìn)行圖像掃描,以PDQest7.4.0圖像分析軟件分析凝膠并尋找差異點(diǎn)。根據(jù)差異分析結(jié)果,兩種樣品中的同一種蛋白質(zhì)如存在2倍以上的光密度差異,則視為具有表達(dá)量的差異。 3.經(jīng)LC-CHIP-MS/MS分析,得到差異蛋白的質(zhì)譜圖,用Spectrum Mill在UniProtKB/SWISS-PROT數(shù)據(jù)庫(kù)及IPI-International Protein Index數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索鑒定差異表達(dá)蛋白質(zhì),并進(jìn)行生物信息學(xué)分析。 結(jié)果:1.慢性高眼壓組兔眼壓(intraocular pressure,IOP)術(shù)后3 h開始升高,術(shù)后14 d左右達(dá)到40 mmHg以上,之后大多數(shù)兔眼壓維持在30～40 mmHg;正常對(duì)照組兔眼壓在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中無(wú)升高,平均為13～l5 mmHg。 2.慢性高眼壓誘導(dǎo)視網(wǎng)膜組織9個(gè)蛋白點(diǎn)出現(xiàn)差異表達(dá),其中3個(gè)蛋白點(diǎn)出現(xiàn)明顯差異表達(dá)(均為上調(diào))。LC-CHIP-MS/MS鑒定出3個(gè)蛋白質(zhì)為:熱休克蛋白70(heat shock 70 kD protein , HSP70),丙酮酸激酶(Pyruvate kinase)和烯醇酶(enolase)。 結(jié)論: 1.前房?jī)?nèi)注入復(fù)方卡波姆溶液是一種較理想的制作慢性高眼壓動(dòng)物模型的方法。 2.通過(guò)2-DE和LC-CHIP-MS/MS分析,發(fā)現(xiàn)兔視網(wǎng)膜蛋白質(zhì)表達(dá)與對(duì)照眼相比有質(zhì)和量的變化,這些變化涉及與RGCs糖酵解及應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)的幾組蛋白質(zhì),提示上述蛋白質(zhì)組改變可能參與了慢性青光眼RGCs凋亡的過(guò)程。
[Abstract]:Objective: to study the changes of protein expression profile of retinal tissue under chronic intraocular pressure (IOP) by using two-dimensional gel electrophoresis, 2-DEE and LC-CHIP-MS / MS / MS analysis technique in rabbits with chronic intraocular hypertension. To provide a new idea for the study of the damage mechanism and prevention and treatment of retinal ganglion cell (ganglion cells, RGCs) in glaucoma. Method 1: 1. Establishment of animal model: 0. 2 ml compound carbomer solution was injected into the left anterior chamber of experimental animals to make the model of chronic high intraocular pressure, and the right eye was a normal eye. The model of chronic high intraocular pressure was based on IOP 22 mmHg and lasted for 1 week. If the intraocular pressure was 22 mm HgG for 7 days, the drug was injected again according to the above method. IOP was measured twice a week after successful modeling. The animal eyeballs were removed and retina tissues were removed at 28 days after model making, and the protein of retinal tissue was extracted. 2. 2-DE: according to the Bio-Rad two-dimensional electrophoresis experimental guide, the separation of .2-DE was carried out by classical mass spectrometry compatible silver staining method. The gel was analyzed by PDQest7.4.0 image analysis software and the difference point was found. According to the results of differential analysis, if there is a difference in optical density of more than 2 times of the same protein in the two kinds of samples, it is regarded as having the difference of expression quantity. 3. The differential protein mass spectrogram was obtained by LC-CHIP-MS/MS analysis. Spectrum Mill was used to search and identify differentially expressed proteins in UniProtKB/SWISS-PROT database and IPI-International Protein Index database, and bioinformatics analysis was carried out. The result is 1: 1. In chronic high intraocular pressure group, intraocular pressure (IOP) began to increase at 3 h after operation and reached more than 40 mmHg on the 14th day after operation. After that, IOP was maintained at 30 ~ 40 mm Hg in most rabbits, while in normal control group, IOP did not increase during the whole experiment, with an average of 13~l5 Hg. 2. The differential expression of 9 protein spots in retinal tissue was induced by chronic intraocular pressure. Three of them were identified as heat shock protein (70(heat shock 70 kD protein, HSP70), pyruvate kinase (Pyruvate kinase) and enolase (enolase). Conclusion: 1. Injection of compound carbomer solution into anterior chamber is an ideal method for making chronic intraocular hypertension animal model. 2. By 2-DE and LC-CHIP-MS/MS analysis, the changes of protein expression in rabbit retina were found to be related to several groups of proteins related to RGCs glycolysis and stress reaction. These proteome changes may be involved in the process of RGCs apoptosis in chronic glaucoma.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R775.9

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本文編號(hào)：1962653