本文選題：喉鱗狀細(xì)胞癌 + 雜合性缺失��； 參考：《山東大學(xué)》2011年博士論文

【摘要】：【研究背景與目的】 頭頸腫瘤在全身腫瘤發(fā)病率中占第六位,而喉鱗狀細(xì)胞癌(簡稱喉癌)是頭頸部常見的惡性腫瘤,其發(fā)病率占全身惡性腫瘤的5.7%-7.6%,占頭頸腫瘤發(fā)病率7.9%-35%,近年來,喉癌的發(fā)病率及死亡率均有明顯增高趨勢,嚴(yán)重威脅著人類健康與生命。盡管目前臨床各種手術(shù)方式不斷改進(jìn)完善、副反應(yīng)輕的放化療方案相繼出現(xiàn),但仍有相當(dāng)一部分患者喉癌術(shù)后發(fā)生局部或區(qū)域性轉(zhuǎn)移,甚至發(fā)生全身轉(zhuǎn)移。喉癌術(shù)后復(fù)發(fā)仍是治療失敗的主要原因,有些報道復(fù)發(fā)率占50%,復(fù)發(fā)部位是喉局部,區(qū)域淋巴結(jié),遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。隨著對喉癌研究的深入,對不同類型的喉癌有了更深的了解,對其發(fā)展規(guī)律及影響預(yù)后的因素有了進(jìn)一步的探討,使臨床治療方式也發(fā)生了變化。而目前對于復(fù)發(fā)喉癌患者原發(fā)癌或復(fù)發(fā)癌研究較少,尤其是這些所謂的“復(fù)發(fā)”腫瘤是原發(fā)癌復(fù)發(fā)還是非原發(fā)喉癌克隆起源的新生喉癌,一直是一個懸而未決的問題。傳統(tǒng)上,臨床病理學(xué)證據(jù)是區(qū)分遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和第二原發(fā)腫瘤的金標(biāo)準(zhǔn),但是如果病理類型一致,那是復(fù)發(fā)還是第二原發(fā)腫瘤就無法判斷。而準(zhǔn)確區(qū)分所謂的復(fù)發(fā)腫瘤是原發(fā)癌復(fù)發(fā)還是新生癌是揭示腫瘤發(fā)生、發(fā)展的規(guī)律、最終找到攻克腫瘤的行之有效的方法的前提。 喉及喉咽癌98%以上為鱗狀細(xì)胞癌,常有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,特別是聲門上型喉癌和喉咽癌,頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高達(dá)50%-60%。而傳統(tǒng)的頸淋巴結(jié)清掃術(shù)一直被認(rèn)為是切除轉(zhuǎn)移的頸淋巴結(jié)有效方法。然而,仍有較多頸清掃術(shù)后常規(guī)病理組織學(xué)檢查淋巴結(jié)陰性的喉癌患者術(shù)后復(fù)發(fā),其5年頸部復(fù)發(fā)率為10%-15%,考慮可能與未能切除已存微轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)或原發(fā)灶周圍有與之克隆起源不同的第二原發(fā)灶有關(guān)。這說明常規(guī)病理檢查手段很難發(fā)現(xiàn)以單個細(xì)胞或微小細(xì)胞團(tuán)形式存在的微小轉(zhuǎn)移灶或第二原發(fā)灶,這些不被一般檢查方法發(fā)現(xiàn)的隱匿性轉(zhuǎn)移可能是導(dǎo)致復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的主要原因,可能會影響患者術(shù)后綜合治療方案的制定,并間接影響了患者的預(yù)后。 “生癌野”的假說是指區(qū)域內(nèi)的黏膜上皮細(xì)胞雖然外表正常,但因緩慢暴露于致癌因素作用下會事先具備癌變條件,因此在條件改變時促使它們漸變成侵襲性病變,同區(qū)域不同位置黏膜病變可能存在時間不同,即可能出現(xiàn)原發(fā)灶旁邊有衛(wèi)星第二原發(fā)癌,其分布沒有特定的位置。淋巴結(jié)的微轉(zhuǎn)移不是成簇的,而是分散在整個淋巴結(jié)中,在淋巴結(jié)中的分布沒有一個特定的位置。正是由于微轉(zhuǎn)移位置及可能存在的第二原發(fā)灶的位置的不確定性,所以研究中多采用連續(xù)切片HE染色觀察以提高準(zhǔn)確率。Viale等報道,間隔50um連續(xù)切片中可以發(fā)現(xiàn)18%的微轉(zhuǎn)移,在增加到300um后就會被遺漏掉。Dowlatsha hi等對52例Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌患者行間隔0.25mmm連續(xù)切片及加作IHC,轉(zhuǎn)移的檢出率從12%提高到58%。徐世影等統(tǒng)計檢出的29個微轉(zhuǎn)移灶最小直徑為(1.36±0.85)mm,推薦1mm作為常規(guī)可操作的切片間隔。但是,真正的連續(xù)切片耗時巨大,一個淋巴結(jié)需要多少切面數(shù)才能盡量避免遺漏微轉(zhuǎn)移不得而知,無法實際應(yīng)用于臨床。 總之,術(shù)后出現(xiàn)再發(fā)原因有二：①原發(fā)腫瘤未切凈或微轉(zhuǎn)移未切凈,原發(fā)部位或微轉(zhuǎn)移部位發(fā)生腫瘤。②原發(fā)喉癌治愈的基礎(chǔ)上新發(fā)的喉癌,喉癌病灶彼此從克隆起源上相互獨立。而這些所謂的“復(fù)發(fā)”腫瘤是原發(fā)癌復(fù)發(fā)還是非原發(fā)喉癌克隆起源的新生喉癌,一直是一個懸而未決的問題。由此引起臨床認(rèn)識及治療方案的混亂,對于原發(fā)喉癌是否需擴大切除,即不考慮喉功能以確保切凈腫瘤同時切凈微轉(zhuǎn)移；還是在肉眼切凈腫瘤基礎(chǔ)上盡可能保留喉功能。對于再生喉癌,有手術(shù)機會的術(shù)后如何治療,失去手術(shù)機會的再生喉癌又如何治療。 由于各學(xué)科形成的職業(yè)偏見等因素的影響,目前喉癌的綜合治療在臨床實踐中執(zhí)行得并不是很好,尤其當(dāng)喉癌術(shù)后復(fù)發(fā)或發(fā)生第二原發(fā)癌時嚴(yán)重阻礙患者手術(shù)遠(yuǎn)期療效,明顯降低生存質(zhì)量。本研究以已復(fù)發(fā)喉癌患者為對象,初步探討喉原發(fā)癌和術(shù)后復(fù)發(fā)性喉癌的微衛(wèi)星雜合性丟失,探討喉原發(fā)癌雜合性丟失與復(fù)發(fā)關(guān)系,探討喉原發(fā)癌及術(shù)后復(fù)發(fā)癌之間的關(guān)系-是復(fù)發(fā)還是第二原發(fā)癌,并探討術(shù)后復(fù)發(fā)癌患者的相關(guān)治療與復(fù)發(fā)的關(guān)系,為臨床上更合理的治療喉癌提供有用的理論依據(jù)。 第一部分 微衛(wèi)星雜合性缺失檢測再生喉癌克隆起源的研究 【目的】探討分析同一患者原發(fā)喉鱗狀細(xì)胞癌及再生癌微衛(wèi)星雜合性缺失(LOH)的模式異同模式,借此區(qū)分是原發(fā)喉癌復(fù)發(fā)還是新發(fā)喉癌,在此基礎(chǔ)上形成理論指導(dǎo)原發(fā)喉癌及再生喉癌的規(guī)范治療。 【方法】選取10個多態(tài)性微衛(wèi)星位點D3S1234、D5S592、D9s171、D9s104、D9S162、D3S1300、D8s261、D8S552、TP53、D13S317,以37例手術(shù)切除的同一患者喉原發(fā)癌和再發(fā)性喉癌為主要研究對象,通過激光捕獲顯微組織切割分別獲取腫瘤和癌旁組織,經(jīng)DNA抽提和利用微衛(wèi)星PCR-SSCP銀染技術(shù),分析原發(fā)喉癌及再生喉癌微衛(wèi)星LOH的模式,推測再生喉癌的克隆起源。 【結(jié)果】37例同一患者喉原發(fā)癌及再生喉癌中10個微衛(wèi)星位點發(fā)生LOH的頻率從22.2%到56.9%。判斷克隆起源的標(biāo)準(zhǔn)：對同一病例原發(fā)喉癌與再生喉癌的10個微衛(wèi)星位點進(jìn)行LOH分析,當(dāng)信息性位點上LOH模式均相同,判斷為原發(fā)癌復(fù)發(fā)；出現(xiàn)不同LOH模式的微衛(wèi)星位點數(shù)目/信息性位點總數(shù)大于30%,則判斷為再生喉癌；而小于30%則為無法判斷克隆起源。本結(jié)果顯示：對任一患者,其原發(fā)癌與再生癌在各個微衛(wèi)星衛(wèi)點的LOH模式相同。 【結(jié)論】1、選擇位于多條染色體(3,5,8,9,13)上的10個微衛(wèi)星位點,應(yīng)用PCR-SSCP方法對同一患者原發(fā)喉癌與再生喉癌進(jìn)行LOH分析,根據(jù)LOH模式的異同,可以在分子生物學(xué)水平上判斷再生喉癌的克隆起源。該方法是彌補組織形態(tài)學(xué)診斷不夠準(zhǔn)確的理想方法之一。 2、在喉鱗狀細(xì)胞癌中檢出D3S1234、D5S592、D9S171、D9s104、D3S1300位點上LOH超過40%,提示該5個位點更為敏感和特異,可以作為檢測LOH首選位點。 3、所選擇患者的再生癌與原發(fā)癌克隆起源相同。說明初次手術(shù)時原發(fā)腫瘤未切凈或微轉(zhuǎn)移未切凈,提示需進(jìn)行補充治療,即需進(jìn)行綜合治療。 4、未發(fā)生LOH者術(shù)前平均吸煙時間短于發(fā)生LOH患者,說明吸煙與LOH發(fā)生有關(guān)。 5、未檢測出LOH者第一次術(shù)后平均復(fù)發(fā)時間長于發(fā)生LOH者,說明術(shù)后復(fù)發(fā)與染色體變異有關(guān)。 第二部分 復(fù)發(fā)性喉鱗狀細(xì)胞癌患者其原發(fā)灶微衛(wèi)星雜合性缺失的研究 【目的】探討微衛(wèi)星雜合性缺失(LOH)在復(fù)發(fā)性喉鱗狀細(xì)胞癌患者其原發(fā)癌的特征及其臨床意義。 【方法】選取染色體3p、5p和9p上3個多態(tài)性微衛(wèi)星位點D3S1234、D5S592、D9s171,通過激光捕獲顯微組織切割分別獲取腫瘤和癌旁組織,經(jīng)DNA抽提和利用微衛(wèi)星PCR-SSCP銀染技術(shù),對已復(fù)發(fā)的58例原發(fā)喉鱗狀細(xì)胞癌組織及相應(yīng)癌旁組織進(jìn)行LOH分析�；仡櫺苑治鰪�(fù)發(fā)癌患者第一次術(shù)后相關(guān)治療與復(fù)發(fā)的關(guān)系。 【結(jié)果】3個微衛(wèi)星標(biāo)記物L(fēng)OH發(fā)生率分別為48.3%(15/31),45.2%(14/31),61.3%(19/31)。LOH的檢出率與第一次術(shù)后至復(fù)發(fā)時間(復(fù)發(fā)時間)呈負(fù)相關(guān),即檢出患者術(shù)后復(fù)發(fā)時間短,未檢出患者術(shù)后復(fù)發(fā)時間長,兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。兩個或兩個以上等位基因位點同時發(fā)生LOH者術(shù)后復(fù)發(fā)時間短于僅單個等位基因位點發(fā)生LOH者,兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 【結(jié)論】1、微衛(wèi)星雜合性缺失與術(shù)后復(fù)發(fā)時間呈負(fù)相關(guān),即術(shù)后復(fù)發(fā)與染色體變異有關(guān)； 2、多個等位基因位點同時發(fā)生LOH者術(shù)后復(fù)發(fā)時間短于僅單個等位基因位點發(fā)生LOH者,即術(shù)后復(fù)發(fā)與染色體變異程度有關(guān),可作為喉癌預(yù)測術(shù)后復(fù)發(fā)的參考標(biāo)志； 3、回顧性分析喉癌術(shù)后治療與復(fù)發(fā)之間的時間與生存情況,發(fā)現(xiàn)喉癌初次術(shù)后存LOH者進(jìn)行化療+放療者術(shù)后復(fù)發(fā)時間長于未行治療者,可有效指導(dǎo)術(shù)后臨床治療方案的選擇。
[Abstract]:Background and purpose of research


In recent years , the incidence and mortality of laryngeal cancer have been significantly higher than those in the primary and neck cancers .


However , it is difficult to find a small metastasis or a second primary focus in the form of a single cell or a small cell cluster , which may affect the development of the comprehensive treatment regimen in patients after operation and indirectly affect the prognosis of patients .


The hypothesis of " cancer field " refers to the fact that mucosal epithelial cells in the region are normal in appearance , but they may be subject to cancerous conditions in advance due to slow exposure to carcinogenic factors .


In conclusion , there are two reasons for recurrence of primary carcinoma : 鈶，

本文編號：1954362