本文關(guān)鍵詞：人淚腺腺樣囊性癌細(xì)胞的培養(yǎng)、觀察及其腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞的分離培養(yǎng)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《天津醫(yī)科大學(xué)》 2013年

人淚腺腺樣囊性癌細(xì)胞的培養(yǎng)、觀察及其腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞的分離培養(yǎng)

周蓓清  

【摘要】：目的 1.為了獲得人淚腺腺樣囊性癌細(xì)胞,為建立人淚腺腺樣囊性癌細(xì)胞系奠定前期基礎(chǔ)。 2.初步了解人淚腺腺樣囊性癌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征,包括細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)特點(diǎn)、細(xì)胞標(biāo)志物和電鏡結(jié)構(gòu),為深入了解該細(xì)胞提供理論依據(jù)。 3.證實(shí)人淚腺腺樣囊性癌細(xì)胞中存在腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞,并進(jìn)行初步分離培養(yǎng)和血清誘導(dǎo)分化,為深入研究人淚腺腺樣囊性癌腫瘤干細(xì)胞提供理論支持。 方法 1.實(shí)驗(yàn)第一部分：取天津醫(yī)科大學(xué)眼科醫(yī)院(原天津醫(yī)科大學(xué)眼科中心)2011年5月一例原發(fā)淚腺腺樣囊性癌患者的新鮮腫瘤組織,采用組織塊培養(yǎng)法,獲得原代細(xì)胞。運(yùn)用連續(xù)傳代、機(jī)械刮除、反復(fù)貼壁和消化排除等方法去除雜細(xì)胞。利用相差顯微鏡、透射電鏡、掃描電鏡等觀察細(xì)胞形態(tài)。采取細(xì)胞免疫化學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞波形蛋白(vimentin)、廣譜細(xì)胞角蛋白(cytokeratin, pan)、S-100蛋白、結(jié)蛋白(desmin)、CD34等蛋白的表達(dá)情況。采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)腫瘤組織vimentin)、cytokeratin (pan)、S-100蛋白、desmin等蛋白的表達(dá)情況。消化法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,計(jì)算細(xì)胞倍增時(shí)間。 2.實(shí)驗(yàn)第二部分：采用無(wú)血清培養(yǎng)法從人淚腺腺樣囊性癌細(xì)胞中分離培養(yǎng)腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞,并對(duì)其進(jìn)行血清誘導(dǎo)分化,證明其具有自我更新、不斷增殖及可逆分化能力。 結(jié)果 1.國(guó)內(nèi)外首次成功獲得可穩(wěn)定傳代的人淚腺腺樣囊性癌細(xì)胞(lacrimal adenoid cystic carcinoma, LACC):組織塊原代培養(yǎng)第5天見周圍開始有細(xì)胞爬出,此后細(xì)胞緩慢增殖,第32天進(jìn)行首次傳代,第69天發(fā)現(xiàn)典型的上皮樣細(xì)胞克隆。運(yùn)用多種方法去除雜細(xì)胞,至第8代細(xì)胞基本純化。純化后細(xì)胞己穩(wěn)定傳至100代以上。 2. LACC細(xì)胞具有以下形態(tài)學(xué)特征：1)相差顯微鏡下觀察：細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),核類圓形,核漿比高,核仁數(shù)個(gè)：核分裂相多見,可見瘤巨細(xì)胞；細(xì)胞排列不緊密時(shí),細(xì)胞可呈長(zhǎng)橢圓形、三角形、梭形、多角形等多種形態(tài)；細(xì)胞排列緊密時(shí),呈多邊形的上皮樣細(xì)胞形態(tài),表現(xiàn)為典型的“鋪路石”樣生長(zhǎng)；密度繼續(xù)增高時(shí),細(xì)胞接觸抑制消失。2)透射電鏡和掃描電鏡下觀察：細(xì)胞呈現(xiàn)低分化惡性腫瘤細(xì)胞的典型特點(diǎn),核漿比倒置,胞漿少,胞核大,異型性明顯；核仁1至數(shù)個(gè),核內(nèi)染色質(zhì)豐富,常染色質(zhì)多見,異染色質(zhì)邊集；不同細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器發(fā)育差別大；細(xì)胞間信號(hào)溝通豐富,絲狀偽足多級(jí)分支。3)細(xì)胞免疫化學(xué)法觀察細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)：vimentin、cytokeratin (pan)和S-100蛋白呈陽(yáng)性,desmin、CD34蛋白呈陰性,與源腫瘤組織染色結(jié)果一致。4)細(xì)胞生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)分析：細(xì)胞生長(zhǎng)曲線類似“S”形,細(xì)胞倍增時(shí)間37.1h。 3.利用無(wú)血清培養(yǎng)基從人淚腺腺樣囊性癌細(xì)胞中成功獲得呈類球形或葡萄串樣細(xì)胞團(tuán)生長(zhǎng)的人LACC腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞。LACC細(xì)胞接種到無(wú)血清培養(yǎng)基24h后,即可觀察到細(xì)胞團(tuán)懸浮生長(zhǎng)或半貼壁生長(zhǎng),細(xì)胞團(tuán)內(nèi)細(xì)胞形態(tài)均一,生長(zhǎng)狀態(tài)良好,隨時(shí)間和傳代增加,細(xì)胞團(tuán)逐漸增大。 4.人LACC腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞團(tuán)經(jīng)血清誘導(dǎo)后可貼壁生長(zhǎng),貼壁細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)與LACC細(xì)胞相似。 結(jié)論 1.國(guó)內(nèi)外首次獲得純化的人淚腺腺樣囊性癌細(xì)胞,為建立穩(wěn)定、永久的人淚腺腺樣囊性癌細(xì)胞系奠定了前期基礎(chǔ),為深入研究人淚腺腺樣囊性癌的生物學(xué)行為機(jī)制提供了重要的種子細(xì)胞。 2.證實(shí)了人淚腺腺樣囊性癌細(xì)胞中存在腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞,具有自我更新、不斷增殖及可逆分化等腫瘤干細(xì)胞特性,為人淚腺腺樣囊性癌腫瘤干細(xì)胞的后續(xù)研究開辟了前期道路。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R739.7
【目錄】：

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6 馮平柏;淚腺腺樣囊性癌的臨床治療研究(附15例臨床觀察)[J];河南腫瘤學(xué)雜志;2001年05期

7 王毅;黑硯;肖利華;;淚腺腺樣囊性癌的超微結(jié)構(gòu)觀察[J];眼科新進(jìn)展;2011年02期

8 王韌琰;鐘勇;施維;張福泉;;淚腺腺樣囊性癌手術(shù)聯(lián)合術(shù)后放療一例[J];眼科;2007年04期

9 成繼民;高奉潯;喬玉槐;;乳腺腺樣囊性癌1例[J];中國(guó)腫瘤臨床;1987年01期

10 戴敏,董世蓉;乳腺腺樣囊性癌2例報(bào)道并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J];皖南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2005年04期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李克莉;;腺樣囊性癌治療方法的探討[A];中華口腔醫(yī)學(xué)會(huì)成立大會(huì)暨第六次全國(guó)口腔醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];1996年

2 羅浩;林婷婷;梁曉飛;何彥津;常津;;長(zhǎng)春新堿緩釋微球?qū)ρ劭粝贅幽倚园┑闹委熥饔醚芯縖A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)2008年年會(huì)暨首屆生物醫(yī)學(xué)工程與臨床論壇論文集[C];2008年

3 李立偉;馬潞娜;王驍;;頭頸部復(fù)發(fā)性腺樣囊性癌~(18)F-FDG PET/CT顯像的臨床價(jià)值[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)核醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2011年

4 王慶國(guó);李慶琪;;頭頸部腺樣囊性癌快中子治療的初步分析[A];Fast Neutron Radiation Therapy--Proceedings of CCAST (World Laboratory) Workshop[C];1999年

5 方瑾;周水洪;雒星梅;姚洪田;;腺樣囊性癌臨床病理分析及Glut-1、PI3K/AKT信號(hào)通路的表達(dá)和意義[A];浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)耳鼻咽喉科學(xué)分會(huì)成立60周年慶典暨2011年浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)耳鼻咽喉頭頸外科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2011年

6 王毅;李月月;肖利華;;眼眶腺樣囊性癌的影像學(xué)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2007年

7 宋曉萌;萬(wàn)宏坤;吳煜農(nóng);;肝素酶在唾液腺腺樣囊性癌中的表達(dá)及其意義[A];第五次全國(guó)口腔頜面—頭頸腫瘤學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2006年

8 戴春富;遲放魯;王正敏;;外耳道腺樣囊性癌的手術(shù)處理[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下）[C];2007年

9 程可佳;周水洪;汪審清;柴亮;王勤瑛;方榮鳳;;外耳道原發(fā)性腺樣囊性癌:附3例報(bào)告[A];2006年浙江省耳鼻咽喉科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

10 何亞會(huì);史煒琪;高粉萍;;頭頸部腺樣囊性癌22例同期放化療的護(hù)理分析[A];全國(guó)腫瘤護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2006年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 記者 楊帆　實(shí)習(xí)生 楊周;[N];重慶日?qǐng)?bào);2009年

2 何雷;[N];健康報(bào);2009年

3 記者 衣曉峰　靳萬(wàn)慶;[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2010年

4 衣曉峰　藍(lán)建中;[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2010年

5 衣曉峰;[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2010年

6 呂斌;[N];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)(中藥報(bào));2004年

7 香港麥迪信醫(yī)學(xué)出版有限公司供稿;[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

8 楊舒怡;[N];新華每日電訊;2010年

9 上海交通大學(xué)附屬仁濟(jì)醫(yī)院副院長(zhǎng) 陳芳源;[N];健康報(bào);2010年

10 胡衛(wèi)娜;[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉慧;巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子在人唾液腺腺樣囊性癌中的表達(dá)及作用[D];武漢大學(xué);2013年

2 謝國(guó)柱;通過對(duì)腫瘤細(xì)胞致瘤潛能及上皮—間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究探討腫瘤干細(xì)胞假說的本質(zhì)[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

3 馬波;人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤腫瘤干細(xì)胞的分離鑒定及相關(guān)表面標(biāo)志的初步研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

4 劉虹麟;腫瘤干細(xì)胞向不同腫瘤細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2009年

5 林婷婷;眼眶腺樣囊性癌臨床治療與局部化療的實(shí)驗(yàn)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2010年

6 鄒游;周期誘導(dǎo)聯(lián)合化療后耐藥腫瘤細(xì)胞亞群與腫瘤干細(xì)胞相關(guān)性的研究[D];華中科技大學(xué);2011年

7 劉培;沉默Id-1基因?qū)θ丝谇话┘?xì)胞增殖、侵襲、凋亡的影響[D];山東大學(xué);2010年

8 吳國(guó)民;口腔鱗狀細(xì)胞癌腫瘤干細(xì)胞的分選和鑒定[D];吉林大學(xué);2011年

9 王向陽(yáng);新型腫瘤細(xì)胞亞群NCCC的普遍性[D];華中科技大學(xué);2013年

10 黃名威;乳腺癌MCF7細(xì)胞株中腫瘤干細(xì)胞的增殖及相關(guān)蛋白研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2010年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 周蓓清;人淚腺腺樣囊性癌細(xì)胞的培養(yǎng)、觀察及其腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞的分離培養(yǎng)[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

2 保秋萍;多發(fā)性骨髓瘤U266細(xì)胞株中腫瘤干細(xì)胞的分離及生物學(xué)特性的初步研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2011年

3 陳坤;人喉癌細(xì)胞系Hep-2中的腫瘤干細(xì)胞與放療抵抗關(guān)系的初步研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

4 焦?jié)?人卵巢癌CD24-表型細(xì)胞的干細(xì)胞特征及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)變的體外研究[D];浙江大學(xué);2011年

5 孫曉彤;胃癌中腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物的初步鑒定、表達(dá)及其臨床病理學(xué)意義[D];蘭州大學(xué);2010年

6 黃穩(wěn)定;腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物CD133及胚胎干細(xì)胞Oct4在肺癌脊柱轉(zhuǎn)移腫瘤組織中的表達(dá)及意義[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

7 陳炬瑩;乳腺癌細(xì)胞系中腫瘤干細(xì)胞相關(guān)亞群的初步研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

8 王建鵬;Notch-1基因下調(diào)誘導(dǎo)GBM腫瘤干細(xì)胞腫瘤細(xì)胞凋亡的試驗(yàn)研究[D];青島大學(xué);2010年

9 安勇;體外吉西他濱篩選富集人胰腺癌細(xì)胞株SW1990腫瘤干細(xì)胞的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

10 王蒙;原發(fā)性乳腺癌患者循環(huán)腫瘤細(xì)胞及腫瘤干細(xì)胞的檢測(cè)及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

  本文關(guān)鍵詞：人淚腺腺樣囊性癌細(xì)胞的培養(yǎng)、觀察及其腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞的分離培養(yǎng)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：184482