本文選題：鼻咽癌 + 放療抵抗��； 參考：《中南大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：[目的]鼻咽癌好發(fā)于中國南方和東南亞。放射治療是目前的主要治療方法,但放療抵抗仍然是影響患者生存時間的關(guān)鍵因素。本研究旨在鑒定鼻咽癌放療抵抗相關(guān)的niRNAs和基因,并探討其可能作用機制,為指導(dǎo)鼻咽癌的治療、改善鼻咽癌預(yù)后提供理論和實驗依據(jù)。 [材料與方法]以放療敏感鼻咽癌細胞系CNE2和放療抵抗鼻咽癌細胞系CNE2-IR為樣本,運用niRNA芯片和基因表達譜(mRNA表達譜)芯片方法鑒定其差異表達miRNA和mRNA,采用qRT-PCI技術(shù)驗證芯片結(jié)果的可靠性,采用數(shù)據(jù)庫分析預(yù)測以及miRNA和mRNA的表達譜的反相關(guān)分析方法鑒定miRNA的相關(guān)靶基因,同時采用生物信息學(xué)方法預(yù)測miRNA靶基因的功能及相關(guān)信號傳導(dǎo)通路,構(gòu)建miRNA-靶基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)圖。最后,我們深入研究miRNA-23a及其靶基因IL-8在鼻咽癌放療抵抗中的作用及其機制。 [結(jié)果]通過本研究,主要得到以下5方面的的結(jié)果：(1)利用miRNA和mRNA表達譜芯片技術(shù),在CNE2-IR和CNE2細胞中鑒定了15個差異表達的miRNAs分子和372個差異表達的mRNAs分子,對隨機選取的9個差異表達的miRNAs分子和8個差異表達的基因進行qRT-PCR驗證,驗證結(jié)果與芯片結(jié)果一致；(2)采用數(shù)據(jù)庫分析預(yù)測以及miRNAmRNA的表達譜的反相關(guān)分析方法鑒定了174個miRNA的靶基因,發(fā)現(xiàn)大多數(shù)靶基因的的功能及其調(diào)控的信號傳導(dǎo)通路與腫瘤治療抵抗相關(guān)；(3)采用生物信息學(xué)方法構(gòu)建了一個包含375個miRNA-靶基因?qū)Φ霓D(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡(luò),在這一調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中,6個miRNA共同調(diào)控10個基因；(4)采用雙熒光素酶報道基因系統(tǒng)證實IL-8是miRNA-23a的直接靶基因；(5) qRT-PCR和免疫組化染色分析顯示,在放療抵抗鼻咽癌組織中miRNA-23a表達下調(diào),IL-8的表達水平升高,miRNA-23a與IL-8的表達呈負相關(guān),上調(diào)miRNA-23a的表達以及抗體中和分泌的IL-8可以降低鼻咽癌細胞的放療抵抗性。 [結(jié)論](1)在放療抵抗鼻咽癌細胞系和放療敏感鼻咽癌細胞系中篩選到15個差異表達的miRNA1372個差異表達的RNAs(2)通過差異miRNA和mRNA表達譜的整合分析,在放療抵抗鼻咽癌細胞系中識別了174個差異niRNAs的靶基因；(3)構(gòu)建了一個包含375個miRNA-靶基因?qū)Φ霓D(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡(luò),在這一調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中,6個miRNAs共同調(diào)控10個基因；(4)首次發(fā)現(xiàn)并實驗證實IL-8是miRNA-23a的靶基因;(5) miRNA-23a表達下調(diào)以及IL-8表達上調(diào)與鼻咽癌的放療抵抗相關(guān),miRNA-23表達下調(diào)通過靶向調(diào)控IL-8的表達參與鼻咽癌的放療抵抗。這些研究結(jié)果為進一步研究鼻咽癌放療抵抗奠定了堅實的基礎(chǔ)。
[Abstract]:[objective] Nasopharyngeal carcinoma (NPC) is common in South China and Southeast Asia. Radiotherapy is the main treatment method at present, but radiotherapy resistance is still the key factor to affect the survival time of patients. The purpose of this study was to identify the niRNAs and genes associated with radiotherapy resistance in nasopharyngeal carcinoma (NPC), and to explore its possible mechanism of action, so as to provide theoretical and experimental evidence for guiding the treatment of nasopharyngeal carcinoma and improving the prognosis of nasopharyngeal carcinoma. [materials and methods] radiotherapy sensitive nasopharyngeal carcinoma cell line CNE2 and radiotherapy resistant nasopharyngeal carcinoma cell line CNE2-IR were used as samples. The differentially expressed miRNA and mRNAs were identified by niRNA microarray and gene expression profile mRNAs. The reliability of the microarray results was verified by qRT-PCI technique. The related target genes of miRNA were identified by database analysis and inverse correlation analysis of miRNA and mRNA expression profiles, and the function of miRNA target genes and related signal transduction pathways were predicted by bioinformatics. MiRNA-target gene regulatory network was constructed. Finally, we studied the role and mechanism of miRNA-23a and its target gene IL-8 in radiotherapy resistance of nasopharyngeal carcinoma. [results] in this study, the following five results were obtained: 1) using miRNA and mRNA expression microarray technology, 15 differentially expressed miRNAs molecules and 372 differentially expressed mRNAs molecules were identified in CNE2-IR and CNE2 cells. Nine differentially expressed miRNAs molecules and eight differentially expressed genes were randomly selected for qRT-PCR validation. The results were consistent with the chip results. 174 miRNA target genes were identified by using database analysis, prediction and reverse correlation analysis of miRNAmRNA expression profile. It was found that the function of most target genes and the signal transduction pathway regulated by them were related to tumor therapy resistance. A posttranscriptional regulatory network containing 375 miRNA-target gene pairs was constructed by bioinformatics. In this regulatory network, 6 miRNA co-regulated 10 genes, and 4) IL-8 was confirmed to be a direct target gene of miRNA-23a by using double luciferase reporter gene system. QRT-PCR and immunohistochemical staining showed that IL-8 was a direct target gene of miRNA-23a. The down-regulation of miRNA-23a expression and IL-8 expression were negatively correlated with the expression of IL-8 in nasopharyngeal carcinoma (NPC) tissues after radiotherapy. Upregulation of the expression of miRNA-23a and IL-8 neutralized by antibodies could decrease the radioresistance of nasopharyngeal carcinoma cells. [conclusion] 15 differentially expressed miRNA1372 differentially expressed RNAs2 cells were screened from radiotherapy resistant nasopharyngeal carcinoma cell lines and radiosensitive nasopharyngeal carcinoma cell lines. The integration analysis of differential miRNA and mRNA expression profiles was performed. A post-transcriptional regulatory network containing 375 miRNA-target gene pairs was constructed in a radiotherapy-resistant nasopharyngeal carcinoma cell line with 174 differentially identified niRNAs target genes. In this regulatory network, it is the first time that 6 miRNAs co-regulated 10 genes, and confirmed that IL-8 is the target gene of miRNA-23a. The down-regulation of miRNA-23a expression and the up-regulation of IL-8 expression are related to the radiotherapy resistance of nasopharyngeal carcinoma (NPC). The down-regulation of miRNA-23 by targeting modulation is the first time to prove that IL-8 is the target gene of miRNA-23a. The expression of controlled IL-8 is involved in radiotherapy resistance of nasopharyngeal carcinoma. These results lay a solid foundation for further study of radiotherapy resistance of nasopharyngeal carcinoma.
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R739.63

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本文編號：1789640