本文選題：選擇性環(huán)氧化酶-2抑制劑 + 喉腫瘤�。� 參考：《瀘州醫(yī)學院》2010年碩士論文

【摘要】： 目的：盡管包括手術(shù)、放療、化療在內(nèi)的各種方法都在不斷改進,但喉鱗狀細胞癌(簡稱喉鱗癌)患者的五年生存率仍較低,它嚴重威脅著人民的生命和健康；并且近年來喉鱗癌的發(fā)病率不但沒有降低,反而有上升且發(fā)病年輕化的趨勢,因而尋找積極有效的預防途徑和治療藥物成為一項十分迫切的重要任務。本實驗通過研究選擇性環(huán)氧化酶-2(cyclooxyge-nase-2,COX-2)抑制劑尼美舒利(nimesulide, NIM)對喉鱗癌Hep-2細胞裸裸鼠成瘤以及COX-2、生存素(Survivin)、增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)表達的影響,以探討NIM抗腫瘤的作用和可能的機制,從而為NIM用于喉鱗癌的預防和治療提供試驗依據(jù)。方法：對喉鱗癌Hep-2細胞進行傳代培養(yǎng),制成細胞懸液,接種于Balb/c-nu/nu裸鼠右側(cè)背部皮下,建立移植瘤模型,12只荷瘤裸鼠隨機分為實驗組(即NIM治療組,腹腔注射NIM50mg/kg/2d,0.2ml)和對照組(腹腔注射生理鹽水,0.2ml),觀察裸鼠生長情況,定期(每兩天)稱量裸鼠體重并以游標卡尺(每兩天)測量移植瘤的最長徑及最短徑,繪制腫瘤生長曲線,計算腫瘤體積=腫瘤最長徑×腫瘤最短徑2／2。用藥4周后,處死裸鼠,取瘤體,常規(guī)HE染色觀察移植瘤光鏡下改變,并取裸鼠主要內(nèi)臟行HE染色,觀察NIM對裸鼠可能的毒副作用。利用免疫組織化學技術(shù)檢測COX-2、Survivin和PCNA蛋白表達,顯微鏡下觀察移植瘤細胞中COX-2、Survivin和PCNA蛋白表達情況,并采用圖像分析系統(tǒng)作平均光密度值測定。同時采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應法(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)檢測COX-2、Survivin和PCNA mRNA表達,Biod-rad軟件分析對照組與試驗組COX-2、Survivin和PCNA mRNA灰度值。結(jié)果：(1)成功構(gòu)建出人喉鱗癌裸鼠移植瘤模型,兩組裸鼠均有喉鱗癌原位移植瘤生長,成瘤率100%；其瘤組織經(jīng)病理切片檢查證實為喉鱗癌,且在實驗期內(nèi),2組動物全部存活。(2)2組裸鼠飲食正常,活動自如,精神狀態(tài)良好,無1只死亡；其心、肝、脾、肺、腎的重量和組織形態(tài)觀察無明顯差異,解剖消化道,未發(fā)現(xiàn)出血病灶。(3)NIM治療組裸鼠移植瘤體積為(172.67±115.25)mm3,較對照組(478.69±341.84)mm3明顯減小,兩組間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)；NIM治療組裸鼠體重為(23.22±1.78)g,對照組為(24.05±1.79)g,兩組間差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)；NIM治療組裸鼠移植瘤重量(0.40±0.33)g,較對照組(0.83±0.27)g明顯減小,兩組間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),計算抑瘤率為51.81%。(4)免疫組織化學SP法檢測裸鼠移植瘤組織中COX-2、Survivin、PCNA蛋白表達,NIM治療組COX-2蛋白表達光密度為(38.12±15.56),與對照組(140.92±23.12)比較顯著下降,經(jīng)統(tǒng)計學分析差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)；NIM治療組Survivin蛋白表達為(46.79±10.04),經(jīng)統(tǒng)計學分析與對照組(133.41±20.01)比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)；NIM治療組PCNA蛋白表達顯著下降(62.97±13.83),經(jīng)統(tǒng)計學分析與對照組(110.23±13.00)比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(5) RT-PCR檢測COX-2 mRNA表達NIM治療組灰度值為、(0.70±0.18),對照組為(2.23±0.38),經(jīng)統(tǒng)計學分析差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)；NIM治療組Survivin mRNA表達為(0.34±0.04),對照組為(1.85±0.18),經(jīng)統(tǒng)計學分析差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)；NIM治療組PCNA mRNA表達為(0.45±0.05),對照組為(1.91±0.70),經(jīng)統(tǒng)計學分析差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論：(1)選擇性COX-2抑制劑NIM對喉鱗癌Hep-2細胞裸鼠移植瘤生長有明顯抑制作用。(2)NIM可抑制COX-2蛋白及mRNA表達,推測NIM可通過依賴COX-2表達的方式抑制腫瘤生長。(3)NIM可在蛋白及mRNA水平抑制喉鱗癌細胞增殖、促進細胞凋亡,其機制可能與抑制COX-2、Survivin及PCNA表達有關(guān)。(4)NIM無明顯毒副作用。(5)選擇性COX-2抑制劑有望成為未來喉鱗癌綜合治療的一部分,它的研制開發(fā)可能為喉鱗癌預防和治療提供全新的廣闊前景。
[Abstract]:Objective: Although various methods, including surgery, radiotherapy and chemotherapy, are constantly improved, the five year survival rate of laryngeal squamous cell carcinoma (LSCC) is still low, which seriously threatens the life and health of the people; and the incidence of laryngeal squamous cell carcinoma has not decreased, but has a trend of rising and younger in recent years. It is an urgent and important task to find active and effective prophylactic and therapeutic drugs. In this experiment, Ni Mei Shug Leigh (nimesulide, NIM), a selective cyclooxygenase -2 (cyclooxyge-nase-2, COX-2) inhibitor, was used to treat nude mice of squamous cell carcinoma of laryngeal squamous cell carcinoma (nude mice), and COX-2, Survivin, and proliferating cell nuclear antigen (prolifera). The effect of Ting cell nuclear antigen, PCNA) on the anti-tumor effect and possible mechanism of NIM, thus providing experimental basis for the use of NIM for the prevention and treatment of laryngeal squamous cell carcinoma. Method: subculture of Hep-2 cells from the squamous cell carcinoma of the larynx and made into a cell suspension, inoculated on the right back of the right back of the Balb/c-nu/nu nude mice, and establishing a transplanted tumor model. 12 tumor bearing nude mice were randomly divided into experimental group (NIM treatment group, intraperitoneal injection of NIM50mg/kg/2d, 0.2ml) and control group (intraperitoneal injection of saline, 0.2ml), observing the growth of nude mice, weighing the body weight of nude mice regularly (every two days) and measuring the longest diameter and the shortest diameter of the transplanted tumor with the vernier caliper (every two days), drawing the tumor growth curve and calculating the tumor. Volume = the longest diameter of the tumor and the shortest path of 2 / 2. of the tumor for 4 weeks. The nude mice were killed and the tumor body was taken to observe the changes under the light microscopy of the transplanted tumor by routine HE staining, and the main viscera of the nude mice was stained with HE. The possible toxic and side effects of NIM on nude mice were observed. The expression of COX-2, Survivin and PCNA protein was detected by immunohistochemical technique, and the transplantation was observed under the microscope. The expression of COX-2, Survivin and PCNA protein in the tumor cells was measured by the image analysis system, and the reverse transcription polymerase chain reaction (reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR) was used to detect COX-2, Survivin and PCNA mRNA table. Results: in and PCNA mRNA gray value. Results: (1) the transplanted tumor model of human laryngeal squamous cell carcinoma in nude mice was successfully constructed. The two groups of nude mice had the growth of laryngeal squamous cell carcinoma in situ, the tumor rate was 100%, and the tumor tissue was confirmed by pathological section for laryngeal squamous cell carcinoma. In the experimental period, all the 2 groups of animals survived. (2) the 2 groups of nude mice had normal diet, good activity and good mental state. No significant difference between the weight and tissue morphology of the heart, liver, spleen, lung and kidney was observed without 1 deaths. (3) the volume of nude mice transplanted in the NIM group was (172.67 + 115.25) mm3, compared with the control group (478.69 + 341.84) mm3, and the difference between the two groups was statistically significant (P0.05); the body weight of nude mice in the NIM treatment group was the weight of the nude mice. (23.22 + 1.78) g, the control group was (24.05 + 1.79) g, the difference between the two groups was not statistically significant (P0.05); the weight of the transplanted tumor of nude mice in the NIM treatment group was (0.40 + 0.33) g, compared with the control group (0.83 + 0.27) G, the difference was statistically significant (P0.05), and the tumor suppressor rate was 51.81%. (4) immunohistochemical SP method in the nude mice transplanted tumor tissue COX-2, S Urvivin, PCNA protein expression, NIM treatment group COX-2 protein expression light density (38.12 + 15.56), compared with the control group (140.92 + 23.12), a significant decrease, statistically significant difference (P0.05), NIM treatment group Survivin protein expression is (46.79 + 10.04), statistical analysis and the control group (133.41 + 20.01) the difference is statistically significant Significance (P0.05); the expression of PCNA protein in the NIM treatment group decreased significantly (62.97 + 13.83), and the difference between the control group and the control group (110.23 + 13) was statistically significant (P0.05). (5) the gray value of the COX-2 mRNA expression in the RT-PCR group was (0.70 + 0.18), and the control group was (2.23 + 0.38), and the statistical difference was statistically significant (P0.05). The expression of Survivin mRNA in the NIM treatment group was (0.34 + 0.04), the control group was (1.85 + 0.18), and the statistical difference was statistically significant (P0.05); the PCNA mRNA expression in the NIM group was (0.45 + 0.05), the control group was (1.91 + 0.70), and the difference was statistically significant (P0.05). Conclusion: (1) NIM of the selective COX-2 inhibitor NIM is Hep- on laryngeal squamous cell carcinoma The growth of 2 cells in nude mice has obvious inhibitory effect. (2) NIM can inhibit the expression of COX-2 protein and mRNA. It is suggested that NIM can inhibit the growth of tumor by relying on COX-2 expression. (3) NIM can inhibit the proliferation of laryngeal squamous cell carcinoma cells and promote cell apoptosis at the level of protein and mRNA. The mechanism may be related to the inhibition of COX-2, Survivin and PCNA expression. (4) NIM no (5) selective COX-2 inhibitors are expected to be part of the comprehensive treatment of laryngeal squamous cell carcinoma in the future. Its development and development may provide a new broad prospect for the prevention and treatment of laryngeal squamous cell carcinoma.

【學位授予單位】：瀘州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R739.65

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本文編號：1779987