本文選題：鐵皮石斛 + 鼻咽癌��； 參考：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2010年博士論文

【摘要】： 目的目前治療鼻咽癌的主要方法放射治療和化學(xué)治療雖取得了較高的有效率,但均存在較強(qiáng)的毒副反應(yīng),而且遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率較高,遠(yuǎn)期效果仍不理想,5年生存率仍徘徊于70％～80％左右。因此有必要尋找高效而低毒的抗鼻咽癌的藥物。鐵皮石斛屬多年生附生草本植物的全草,是國家重點(diǎn)保護(hù)藥物,含豐富的多糖、生物堿、多種人體必需的微量元素和氨基酸等。鐵皮石斛提取物已經(jīng)證實能顯著抑制荷瘤小鼠骨肉瘤和肝癌細(xì)胞生長、抗腫瘤多藥耐藥性等,但在抗鼻咽癌方面國內(nèi)外仍未見有報道。本課題從鐵皮石斛藥用有效部位莖部分離提取有效成分,擬系統(tǒng)研究鐵皮石斛對人鼻咽癌細(xì)胞CNE1、CNE2的體內(nèi)外抑瘤作用并探討其作用機(jī)制,為從中草藥成分中尋找確切有效的抗鼻咽癌藥物,提高鼻咽癌治療水平提供實驗依據(jù)。 研究內(nèi)容： 第一部分鐵皮石斛及其含藥血清的體外抗鼻咽癌作用 方法分別采用MTT、光學(xué)顯微鏡、流式細(xì)胞儀與Western blot檢測新鮮鐵皮石斛提取物及含石斛大鼠血清抑制CNE1和CNE2細(xì)胞增殖與誘導(dǎo)凋亡作用及Bcl-xL, mcl-1、caspase-3、caspase-8和caspase-9蛋白的表達(dá),了解石斛及其含藥血清對鼻咽癌細(xì)胞的作用及機(jī)理。 結(jié)果經(jīng)MTT測試不同數(shù)目的CNE1及CNE2生長曲線,發(fā)現(xiàn)96孔板每孔加6000個CNE1及CNE2細(xì)胞時效果最好。經(jīng)MTT法檢測顯示鐵皮石斛提取物及含鐵皮石斛大鼠血清對CNE1及CNE2均有明顯抑制作用,以鐵皮石斛提取物抑制率較高。 經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測顯示,與對照組相比石斛提取物及其含藥血清對CNE1和CNE2細(xì)胞株均有明顯促進(jìn)細(xì)胞凋亡作用(P0.01),而且有明顯的時間依賴性及濃度依賴性。 用流式細(xì)胞儀分析顯示32mg/L,64mg/L,128mg/L,256mg/L的石斛的周期阻滯均發(fā)生在G0／G1期,表現(xiàn)為該期細(xì)胞比例明顯高于對照組(P0.01),而G2／M期明顯低于對照組(P0.01)。四個濃度梯度的石斛血清分別對兩個鼻咽癌細(xì)胞株的周期改變的影響。對于細(xì)胞系CNE1,除10％濃度組外,其他組的周期阻滯均發(fā)生在G0／G1期。對于細(xì)胞系CNE2,到除15％組外,其他組的周期阻滯均發(fā)生在G0／G1期,表現(xiàn)為該期細(xì)胞比例明顯高于對照組(P0.01),而G2／M期明顯低于對照組(P0.01)。 Western blot結(jié)果顯示：Bcl-xL和Mcl-1表達(dá)均下降,caspase-8、caspase-9有明顯的表達(dá)；而caspase-3也有表達(dá)。提示石斛能抑制Bcl-xL和Mcl-1的表達(dá),并可能與線粒體通路的細(xì)胞凋亡及死亡通路的細(xì)胞凋亡有關(guān)。 第二部分鐵皮石斛對鼻咽癌裸鼠移植瘤模型的作用 方法將CNE1及CNE2細(xì)胞分別接種于裸鼠,待腫瘤長至一定體積后設(shè)對照組及藥物組并用藥物干預(yù)。測量裸鼠的體重、瘤體體積等,15天后取出瘤體并測量瘤重。觀察腫瘤的顯微結(jié)構(gòu)及超微結(jié)構(gòu)變化,用原位組織化學(xué)法(TUNEL法)檢測腫瘤組織細(xì)胞凋亡、免疫組織化學(xué)法檢測腫瘤組織內(nèi)Bcl-xL, mcl-1和caspase-3的表達(dá)情況。 結(jié)果隨著濃度的增加可以明顯的發(fā)現(xiàn)腫瘤的體積增長幅度、瘤重均是越來越輕。顯微觀察可見用藥組的腫瘤細(xì)胞減少,纖維組織增多。超微結(jié)構(gòu)下可見凋亡小體,免疫組化提示Bcl-xL, mcl-1陽性率減低,但可見caspase-3陽性率明顯增高。Tunnel法檢測提示用藥組的凋亡細(xì)胞明顯增多。 結(jié)論鐵皮石斛具有抑制人鼻咽癌CNE1和CNE2細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用,能抑制鼻咽癌裸鼠CNE1和CNE2移植瘤的成長。其機(jī)制可能與Bcl-xL, Mcl-1蛋白下調(diào)、促進(jìn)Caspase 3的活化有關(guān)等有關(guān),并可能與死亡受體通路的細(xì)胞凋亡和線粒體通路的細(xì)胞凋亡均有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R739.63

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 吳慶生，丁亞平，，楊道麒，于力文，檀華蓉，徐云　;安徽霍山三種石斛中游離氨基酸分析[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);1995年03期

2 翁昔陽,馬潤娣,于立堅;土貝母苷甲誘導(dǎo)人鼻咽癌細(xì)胞CNE-2Z凋亡[J];癌癥;2003年08期

3 杜彩文,李德銳,林英城,吳名耀;三氧化二砷誘導(dǎo)人鼻咽低分化鱗癌裸鼠移植瘤細(xì)胞分化的研究[J];癌癥;2003年01期

4 林忠寧,林育純,楊杏芬,朱偉,余貴英,蔡承鏗,魏青;倍半萜烯內(nèi)酯通過非caspase途徑誘導(dǎo)人鼻咽癌CNE1細(xì)胞凋亡[J];癌變.畸變.突變;2003年04期

5 李毓,胡祖光,胡笑克;薏苡仁酯對人鼻咽癌細(xì)胞周期的影響[J];華夏醫(yī)學(xué);2004年02期

6 張紅;導(dǎo)赤散加味配合放射治療鼻咽癌40例[J];湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2003年02期

7 周同沖;林曉丹;宋先璐;王兆武;;石上柏聯(lián)合放射治療晚期鼻咽癌的臨床觀察[J];中華腫瘤防治雜志;2006年10期

8 唐發(fā)清,龔志軍,周輝,田道法,吳尚輝,梁湘輝,唐銀;益氣解毒顆粒對鼻咽癌裸鼠移植瘤基因表達(dá)的影響[J];實用預(yù)防醫(yī)學(xué);2004年04期

9 文炳均;黃碧云;何展祥;吳樹濃;黎連新;石勝;吳波;;白藜蘆醇對鼻咽癌相關(guān)實驗?zāi)Ｐ偷恼w與離體藥理作用研究[J];實用醫(yī)技雜志;2007年10期

10 吳慶生，楊道麒，徐云，于力文;中藥霍山石斛的微量元素分析及TE圖譜鑒定[J];微量元素與健康研究;1995年01期

本文編號：1769885