發(fā)布時(shí)間：2018-04-18 10:14

  本文選題：變應(yīng)性鼻炎 + 趨化素樣細(xì)胞因子1�。� 參考：《川北醫(yī)學(xué)院》2010年碩士論文

【摘要】： 第一部分CKLF1在變應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜的表達(dá)和意義 目的:研究CKLF1在變應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜中的表達(dá)和意義。 方法:變應(yīng)性鼻炎患者20例、鼻息肉患者20例及正常對(duì)照組20例,術(shù)晨收集靜脈血清,ELISA檢測(cè)IL-4、IFN-γ、IgE。術(shù)前半小時(shí)做鼻腔分泌物涂片及下鼻甲黏膜刮片,行瑞氏染色,計(jì)數(shù)嗜酸性粒細(xì)胞占炎性細(xì)胞百分比,手術(shù)取下變應(yīng)性鼻炎組、正常對(duì)照組下鼻甲黏膜及鼻息肉組鼻息肉,各分成兩份,一份經(jīng)4%中性甲醛固定行HE染色及免疫組化檢測(cè)CKLF1、CCR4的表達(dá),另一份樣本行RT-PCR檢測(cè)CKLF1mRNA表達(dá)。并對(duì)CKLF1和CCR4表達(dá)的相關(guān)性及與血清IL-4、IFN-γ、IgE含量、鼻腔分泌物涂片及下鼻甲黏膜刮片、切片Eos含量進(jìn)行相關(guān)性分析。 結(jié)果: 1、AR組鼻腔分泌物涂片及下鼻甲黏膜刮片炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)嗜酸性粒細(xì)胞百分比(分別為13.40±1.23,7.25±1.99)顯著高于鼻息肉組(3.9±1.12,1.75±0.72)和正常對(duì)照組(0.65±0.93,0.25±0.44),鼻息肉組高于正常對(duì)照組,三組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 2、血清中IL-4、IgE含量AR組(分別為907.50±226.13 IU.ml-1,81.55±23.68 pg.ml-1 )顯著高于鼻息肉組(分別為22.20±10.17 ,55.45±19.58)和正常對(duì)照組(分別為19.05±7.08,39.50±14.61),兩兩比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),鼻息肉組稍高于正常對(duì)照組,兩者之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。血清中IFN-γ含量AR組(21.00±11.69 mg.ml-1)顯著低于鼻息肉組(87.74±30.39)和正常對(duì)照組(92.55±22.01),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),鼻息肉組稍低于正常對(duì)照組,之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 3、HE染色顯示從炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)嗜酸性粒細(xì)胞百分比結(jié)果看,AR組嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)明顯(13.30±2.15),顯著高于鼻息肉組(5.15±2.11)和正常對(duì)照組(0.90±1.02),兩兩比較p=0.000,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)鼻息肉組與正常對(duì)照組比較p=0.000,差異亦具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 4、免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,CKLF1在變應(yīng)性鼻炎、鼻息肉及對(duì)照組下鼻甲黏膜陽(yáng)性表達(dá)物質(zhì)定位于黏膜上皮、腺體細(xì)胞及浸潤(rùn)炎性細(xì)胞胞漿,呈棕黃色,細(xì)顆粒狀,CKLF1在變應(yīng)性鼻炎患者下鼻甲黏膜中的表達(dá)染色陽(yáng)性面積百分比(0.64±0.09)明顯高于鼻息肉組(0.30±0.06)及正常對(duì)照組(0.07±0.04),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),同時(shí)鼻息肉患者中息肉組織與對(duì)照組下鼻甲黏膜表達(dá)比較差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。CCR4在變應(yīng)性鼻炎、鼻息肉患者及對(duì)照組下鼻甲黏膜中陽(yáng)性表達(dá)物質(zhì)定位于黏膜上皮、腺體細(xì)胞及浸潤(rùn)炎性細(xì)胞胞膜及部分細(xì)胞胞漿,呈棕黃色,細(xì)顆粒狀,變應(yīng)性鼻炎組(0.71±0.16)及鼻息肉組(0.69±0.17)中CCR4表達(dá)明顯高于對(duì)照組(0.13±0.04),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)而在應(yīng)性鼻炎組及鼻息肉組中表達(dá)無(wú)明顯差異(p0.05)。 5、RT-PCR結(jié)果:CKLF1 mRNA相對(duì)內(nèi)參基因GAPDH表達(dá)量,在變應(yīng)性鼻炎(0.71±0.11)明顯高于鼻息肉組織(0.41±0.06)及對(duì)照組(0.08±0.04),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),而在鼻息肉患者中息肉組織與下鼻甲黏膜表達(dá)差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 6、相關(guān)性分析結(jié)果:CKLF1 mRNA表達(dá)量與鼻黏膜嗜酸性粒細(xì)胞含量成正相關(guān)(r=0.899,p0.05),同樣與IL-4含量成正相關(guān)(r=0.842,p0.05),但與IFN-γ含量成負(fù)相關(guān)(r=-0.819,p0.05)。CKLF1基因、蛋白表達(dá)量呈正性相關(guān)(r=0.896,p=0.00)。CKLF1與CCR4蛋白表達(dá)量呈正性相關(guān)(r=0.734,p=0.00) 結(jié)論:CKLF1在人變應(yīng)性鼻炎鼻黏膜中轉(zhuǎn)錄及蛋白水平表達(dá)增強(qiáng),參與變應(yīng)性鼻炎Th2細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞活化及浸潤(rùn),與變應(yīng)性鼻炎發(fā)病機(jī)制相關(guān)。 第二部分實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性鼻炎大鼠模型的建立及評(píng)價(jià) 目的:探討卵清白蛋白致敏建立變應(yīng)性鼻炎大鼠模型及其評(píng)價(jià)體系,為下一步應(yīng)用CKLF1 C末端肽C19、C27干預(yù)AR研究創(chuàng)造條件。 方法:采用SD大鼠為對(duì)象,將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為AR組、對(duì)照組,各10只。AR組以卵清白蛋白10mg作為致敏原,氫氧化鋁15mg作為佐劑,生理鹽水溶解制備為0.5ml混懸液腹腔注射進(jìn)行基礎(chǔ)致敏,隔日1次,連續(xù)8次(15d),自16日開始,連續(xù)10天每天AR組鼻腔用1%卵清白蛋白溶液滴鼻,每側(cè)鼻腔25μl,進(jìn)行激發(fā)。對(duì)照組以生理鹽水代替卵清白蛋白,其余方法和步驟與AR組相同。通過(guò)行為學(xué)評(píng)分、鼻腔組織學(xué)觀察及血清IgE、IL-4、IFN-γ檢測(cè)綜合判斷造模成功與否。 結(jié)果:AR組鼻腔激發(fā)后行為學(xué)評(píng)分(x±s)為6.3±0.67,對(duì)照組為2.1±0.73,差異有顯著性意義(p0.05)。大鼠鼻黏膜HE染色,AR組鼻黏膜上皮內(nèi)杯狀細(xì)胞增多,上皮下層不同程度的組織水腫,血漿滲出及動(dòng)脈血管擴(kuò)張,嗜酸粒細(xì)胞和大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),并伴有腺體增生。對(duì)照組大鼠鼻黏膜上皮內(nèi)杯狀細(xì)胞數(shù)量少,上皮下少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),無(wú)明顯組織水腫及腺體增生。血清總IgE、IL-4、IFN-γELISA檢測(cè)結(jié)果:AR組血清中IL-4、IgE含量分別為(52.10±6.01ng.ml-1,49.90±15.04 pg.ml-1)顯著高于對(duì)照組(2.00±2.21,10.70±2.91),與正常對(duì)照組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。AR組血清中IFN-γ含量(30.80±5.01mg.ml-1)顯著低于正常對(duì)照組(89.40±7.57),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 結(jié)論:用卵清白蛋白致敏成功建立了變應(yīng)性鼻炎大鼠模型,可以繼續(xù)下一步實(shí)驗(yàn)。血清總IgE、IFN-γ、IL-4含量可作為建立變應(yīng)性鼻炎動(dòng)物模型的客觀評(píng)價(jià)指標(biāo)。 第三部分CKLF1、CCR4在實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性鼻炎大鼠鼻黏膜的表達(dá)及CKLF1 C末端肽C19、C27干預(yù)對(duì)實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性鼻炎大鼠的影響研究 目的:探討CKLF1、CCR4在實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性鼻炎大鼠鼻黏膜的表達(dá)及CKLF1C末端肽C19、C27干預(yù)對(duì)實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性鼻炎大鼠的影響。 方法:變應(yīng)性鼻炎及對(duì)照組造模同第二部分。丙酸氟替卡松干預(yù)組:于連續(xù)10天AR激發(fā)前30min分別鼻腔噴丙酸氟替卡松1噴(50μg)干預(yù);C19干預(yù)組及C27干預(yù)組:于連續(xù)10天AR激發(fā)前30min分別雙側(cè)鼻腔共滴C19 10ug及C27 10ug干預(yù)。制成符合本研究的動(dòng)物模型。觀察藥物治療后大鼠行為學(xué)表現(xiàn)。ELISA法檢測(cè)IgE、IL-4、IFN-γ含量。末次激發(fā),取出鼻中隔黏膜分為兩份,一份經(jīng)4%中性甲醛固定HE染色及免疫組化檢測(cè)CKLF1、CCR4的表達(dá),另一份樣本RT-PCR檢測(cè)CKLF1mRNA的表達(dá)。取一側(cè)股骨骨髓涂片,瑞氏染色,骨髓Eos計(jì)數(shù)。并對(duì)CKLF1、CCR4表達(dá)的相關(guān)性及與血清IL-4、IFN-γ、IgE含量、組織切片和骨髓中Eos含量進(jìn)行相關(guān)性分析。綜合判斷C19、C27干預(yù)對(duì)實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性鼻炎大鼠的影響。 結(jié)果: 1、致敏15天后,AR組、C27干預(yù)組動(dòng)物鼻腔激發(fā)后行為學(xué)評(píng)分均超過(guò)5分,對(duì)照組、丙酸氟替卡松干預(yù)組、C19干預(yù)組動(dòng)物僅少數(shù)出現(xiàn)偶有打噴嚏及抓鼻現(xiàn)象。AR組(6.10±0.74)、C27干預(yù)組(6.20±0.79),顯著高于正常對(duì)照組(2.20±0.63)、丙酸氟替卡松干預(yù)組(2.20±0.79)、C19干預(yù)組(2.60±0.52),兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。C19干預(yù)組與正常對(duì)照組、丙酸氟替卡松干預(yù)組比較差異差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。AR組、C27干預(yù)組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 2、骨髓涂片細(xì)胞計(jì)數(shù)嗜酸性粒細(xì)胞百分比AR組(13.00±1.15)、C27干預(yù)組(13.00±1.83)顯著高于正常對(duì)照組(0.80±0.79)、丙酸氟替卡松干預(yù)組(1.60±0.70)、C19干預(yù)組(6.00±1.54),兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。C19干預(yù)組與正常對(duì)照組、丙酸氟替卡松干預(yù)組比較差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。AR組、C27干預(yù)組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。正常對(duì)照組、丙酸氟替卡松干預(yù)組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 3、AR組血清中IgE、IL-4含量(51.74±1.86 ng.ml-1,30.63±1.38 pg.ml-1)、C27干預(yù)組(51.84±1.07,30.04±2.04)顯著高于正常對(duì)照組(14.38±1.31,12.15±1.35)、丙酸氟替卡松干預(yù)組(15.26±1.03,13.53±1.54)、C19干預(yù)組(30.51±1.76,25.13±1.18),血清中IFN-γ含量AR組(50.62±1.80 mg.ml-1)、C27干預(yù)組(51.80±1.30)顯著低于正常對(duì)照組(92.32±2.25)、氟替卡松干預(yù)組(81.20±1.55)、C19干預(yù)組(49.46±1.66),兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05), C19干預(yù)組與正常對(duì)照組、丙酸氟替卡松干預(yù)組之間兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。AR組、C27干預(yù)組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。正常對(duì)照組、丙酸氟替卡松干預(yù)組比較,IgE含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。IFN-γ、IL-4含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 4、HE染色結(jié)果:鼻黏膜炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)嗜酸性粒細(xì)胞百分比AR組(12.80±1.55)、C27干預(yù)組(13.10±1.52)均顯著高于正常對(duì)照組( 1.10±0.86 )、丙酸氟替卡松干預(yù)組(1.70±0.67)、C19干預(yù)組(4.80±1.23),兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。C19干預(yù)組與正常對(duì)照組、丙酸氟替卡松干預(yù)組比較差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。AR組、C27干預(yù)組比較,C27干預(yù)組稍高于AR組,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。正常對(duì)照組、丙酸氟替卡松干預(yù)組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 5、CKLF1在大鼠鼻中隔黏膜陽(yáng)性表達(dá)物質(zhì)定位于黏膜上皮、腺體細(xì)胞及浸潤(rùn)炎性細(xì)胞胞漿,呈棕黃色,細(xì)顆粒狀,CKLF1表達(dá)量相對(duì)面積百分比在AR組(49.92±3.84)、C27干預(yù)組(51.82±3.50)中的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組(5.67±2.16)、丙酸氟替卡松干預(yù)組(6.67±2.23)、C19干預(yù)組(22.76±2.67)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),C19干預(yù)組與正常對(duì)照組、丙酸氟替卡松干預(yù)組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。AR組、C27干預(yù)組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。正常對(duì)照組、丙酸氟替卡松干預(yù)組比較,p=0.454,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。CCR4在鼻中隔黏膜陽(yáng)性表達(dá)物質(zhì)定位于黏膜上皮、腺體細(xì)胞及浸潤(rùn)炎性細(xì)胞胞膜及部分細(xì)胞胞漿,呈棕黃色,細(xì)顆粒狀,CCR4表達(dá)量相對(duì)面積百分比在AR組(40.46±2.95)、C27干預(yù)組中的表達(dá)(41.40±3.32)明顯高于正常對(duì)照組(6. 23±2.02)、丙酸氟替卡松干預(yù)組(10.81±2.63)、C19干預(yù)組(20.83±3.05),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。C19干預(yù)組與正常對(duì)照組、丙酸氟替卡松干預(yù)組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。AR組、C27干預(yù)組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。正常對(duì)照組、丙酸氟替卡松干預(yù)組比較,p=0.454,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 6、CKLF1 mRNA相對(duì)內(nèi)參基因GAPDH表達(dá)量,在AR組(0.70±0.07)、C27干預(yù)組(0.71±0.06)中的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組( 0.10±0.03 )、丙酸氟替卡松干預(yù)組(0.11±0.03)、C19干預(yù)組(0.30±0.05),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),C19干預(yù)組與正常對(duì)照組、丙酸氟替卡松干預(yù)組比較差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),AR組、C27干預(yù)組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),正常對(duì)照組、丙酸氟替卡松干預(yù)組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 7、相關(guān)性分析:CKLF1蛋白表達(dá)量與鼻黏膜嗜酸性粒細(xì)胞含量進(jìn)行直線相關(guān)性分析,結(jié)果顯示CKLF1蛋白表達(dá)量與鼻黏膜嗜酸性粒細(xì)胞含量成正相關(guān)(r=0.881,p0.05),同樣與IL-4含量成正相關(guān)(r=0.986,p0.05),但與IFN-γ含量成負(fù)相關(guān)(r=-0.949,p0.05)。對(duì)鼻黏膜CKLF1基因、蛋白表達(dá)量進(jìn)行直線相關(guān)性分析,結(jié)果顯示,CKLF1基因、蛋白表達(dá)量呈正性相關(guān)(r=0.980,p0.05)。相關(guān)分析結(jié)果顯示,CKLF1與CCR4蛋白表達(dá)量呈正性相關(guān)(r=0.963,p0.05) 結(jié)論: 1、CKLF1在變應(yīng)性鼻炎大鼠模型鼻黏膜中轉(zhuǎn)錄及蛋白水平表達(dá)增強(qiáng),CKLF1與變應(yīng)性鼻炎發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。 2、C19通過(guò)抑制Th2細(xì)胞的活化及浸潤(rùn),減少嗜酸性粒細(xì)胞在骨髓產(chǎn)生及鼻腔浸潤(rùn),對(duì)變應(yīng)性鼻炎大鼠模型顯示出一定的治療作用。C27經(jīng)鼻腔干預(yù)對(duì)變應(yīng)性鼻炎大鼠治療作用不明顯。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：川北醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R765.21

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1767925