本文選題：視網(wǎng)膜色素變性 + 糖基化�。� 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2013年博士論文

【摘要】：目的:視網(wǎng)膜色素變性(retinitis pigmentosa,RP)是遺傳性視覺損害和致盲的常見原因之一,其主要病理特征為視網(wǎng)膜感光細(xì)胞進(jìn)行性的變性和不可逆轉(zhuǎn)的死亡,且臨床異質(zhì)性較高,有多種遺傳方式。最近研究發(fā)現(xiàn)一種新的導(dǎo)致無癥狀進(jìn)展性RP 的基因 DHDDS(dehydrodolichol diphosphate synthase)K42E 突變。DHDDS 是脫氫長萜基二磷酸合成酶是一種高度保守的長醇合成酶,催化順-戊二烯鏈的延長形成長醇骨架(Dedol-PP),在糖基化過程中起到關(guān)鍵作用。為了進(jìn)一步研究脫氫長萜基二磷酸合成酶和糖基化過程在視網(wǎng)膜組織的作用,本研究通過建立DHDDS完全性基因敲除和條件性基因敲除小鼠動(dòng)物模型和使用糖基化抑制劑衣霉素(Tunicamycin,TM)阻斷視網(wǎng)膜糖基化,觀察分析其表型,明確糖基化障礙作為一種新的RP發(fā)病機(jī)制。方法:1.將含有插入"SA-βgeo-pA"片段導(dǎo)致無義突變DHDDStmla等位基因的小鼠胚胎干細(xì)胞經(jīng)顯微注射胚囊中,發(fā)育出生5只嵌合基因小鼠(chimericmice)。將嵌合基因小鼠與野生型小鼠交配,產(chǎn)生攜帶有DHDDStmla的第一代子代(F1)轉(zhuǎn)基因小鼠。2.將DHDDSfl/fl與表達(dá)重組酶Cre(recombinase)的兩種工具鼠合籠,產(chǎn)生在LMOP 啟動(dòng)子(long-mouse opsin promotor)和 Chx10 啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下,Cre 重組酶特異性識別loxP位點(diǎn)重組后敲除DHDDS基因中第4外顯子,產(chǎn)生分別在發(fā)育期神經(jīng)視網(wǎng)膜和成熟的視網(wǎng)膜感光細(xì)胞內(nèi)條件性DHDDS基因敲除小鼠。3.記錄暗適應(yīng)和明適應(yīng)條件下的視網(wǎng)膜電圖(Electroniretinograms,ERG),檢測視網(wǎng)膜功能學(xué)變化。按不同月齡為觀察點(diǎn)取視網(wǎng)膜組織行塑料切片染色光鏡下觀察。4.將在500bp鼠視紫紅質(zhì)(murine rhodopsin)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下表達(dá)Cre重組酶的AAV2病毒注射入DHDDSf1/fl小鼠視網(wǎng)膜下間隙內(nèi),Cre特異識別DHDDS基因的第四外顯子兩側(cè)內(nèi)含子區(qū)域兩個(gè)同向的loxP位點(diǎn),致使基因DHDDS第4外顯子被選擇性敲除,得到DHDDS條件性敲除小鼠。注射后1個(gè)月,用免疫熒光的方法檢測病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞表達(dá)Cre及GFP(green fluorescent protein)的定位情況。注射后1個(gè)月、2個(gè)月按不同月齡為觀察點(diǎn)小鼠行視網(wǎng)膜組織塑料切片染色光鏡下觀察。5.衣霉素(tunicamycin,TM)溶于DMSO后以濃度為25ng/μl及50ng/μl注射入成年Balb/c小鼠玻璃體腔2μl。注射藥物1周、2周、4周為觀察點(diǎn)小鼠行相干光斷層掃描(OCT)、ERG、視網(wǎng)膜組織塑料切片染色光鏡下觀察。用Western Blotting方法檢測視網(wǎng)膜感光細(xì)胞內(nèi)蛋白視紫紅質(zhì)的表達(dá)變化,進(jìn)一步明確糖基化在視網(wǎng)膜感光細(xì)胞的作用和機(jī)制。結(jié)果:1.轉(zhuǎn)基因小鼠DHDDS+/-視網(wǎng)膜組織發(fā)育完整,形態(tài)結(jié)構(gòu)正常。視網(wǎng)膜電圖ERG結(jié)果顯示視網(wǎng)膜功能正常。觀察DHDDS+/-、鼠后代胚胎發(fā)育第7日,1/4胚胎形態(tài)異常,未出現(xiàn)胚盤結(jié)構(gòu),內(nèi)外胚層結(jié)構(gòu)模糊紊亂,且DHDDS+/-小鼠回交后代未發(fā)現(xiàn)子代出現(xiàn)DHDDS-/-小鼠基因型,推測DHDDS-/-為胚胎致死。2.DHDDSfl/LMOP-Cre小鼠和DHDDSfl/Chx10-Cre小鼠均表現(xiàn)出視網(wǎng)膜感光細(xì)胞的結(jié)構(gòu)異常,出現(xiàn)變性死亡,ERG示視網(wǎng)膜感光細(xì)胞功能異常。3.AAV-Rho-GFP注射眼視網(wǎng)膜感光細(xì)胞結(jié)構(gòu)功能未見異常。AAV-Rho-Cre注射眼視網(wǎng)膜感光細(xì)胞變性死亡減少。4.衣霉素玻璃體腔注射后一個(gè)月內(nèi),50ng組和100ng組均出現(xiàn)感光細(xì)胞變性凋亡減少,ERG示感光細(xì)胞功能異常。蛋白免疫分析證實(shí),感光細(xì)胞中視紫紅質(zhì)被去糖基化。結(jié)論:DHDDS基因介導(dǎo)的蛋白質(zhì)糖基化過程在生命初期生物體胚胎發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用。DHDDS基因缺失或異常導(dǎo)致蛋白質(zhì)糖基化這一蛋白質(zhì)翻譯后修飾過程失敗,可引起視網(wǎng)膜變性疾病。TM阻滯視網(wǎng)膜蛋白質(zhì)糖基化后亦出現(xiàn)視網(wǎng)膜變性,感光細(xì)胞死亡,視網(wǎng)膜功能喪失。感光細(xì)胞對于糖基化長醇通路障礙十分敏感,糖基化長醇通路機(jī)制是視網(wǎng)膜變性疾病發(fā)病的可能機(jī)制之一。
[Abstract]:Objective : To study the role of DHDDS ( DHDDS ) as a new RP gene . Results : 1 . DHDDS + / - retinal tissue was developed intact and its morphology was normal . The results showed that DHDDS + / - retinal tissue was completely developed and its morphology was normal .

【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R774.1

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 唐仕波,邱觀婷,劉志雄,李加青,林少芬;視黃酸對視網(wǎng)膜感光細(xì)胞增生作用的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華眼科雜志;2002年02期

2 付玲玲;關(guān)于視網(wǎng)膜感光細(xì)胞的凋亡與保護(hù)[J];華西醫(yī)學(xué);2002年04期

3 沈志軍;視網(wǎng)膜感光細(xì)胞的藥物干預(yù)研究[J];國外醫(yī)學(xué).眼科學(xué)分冊;2003年04期

4 王偉;視網(wǎng)膜感光細(xì)胞移植的研究[J];國外醫(yī)學(xué).眼科學(xué)分冊;1998年02期

5 甘泉涌;萬瑾;佘振玉;周國民;;C57/BL-6J小鼠感光細(xì)胞發(fā)育實(shí)驗(yàn)觀察[J];襄樊職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào);2010年05期

6 李根林,孫異臨,王津津,曲寶清,王景昭;新出生期視網(wǎng)膜感光細(xì)胞纖毛結(jié)構(gòu)超微形態(tài)學(xué)分析[J];眼科研究;2004年05期

7 湯喜成,胡椿枝,王慧君;γ射線分次照射兔視網(wǎng)膜感光細(xì)胞的觀察[J];眼外傷職業(yè)眼病雜志(附眼科手術(shù));1995年02期

8 付慶東;任秀琴;;綠光筆致視網(wǎng)膜感光細(xì)胞缺失一例[J];中華眼科醫(yī)學(xué)雜志(電子版);2012年01期

9 段欣榮;視網(wǎng)膜感光細(xì)胞早期發(fā)育的形態(tài)學(xué)研究現(xiàn)狀[J];國外醫(yī)學(xué).眼科學(xué)分冊;2002年02期

10 羅燕,唐仕波,林少芬,楊斌,鄭湖玲;視網(wǎng)膜感光細(xì)胞純化方法的研究[J];眼科研究;2000年03期

相關(guān)會議論文 前2條

1 陳卡;糜漫天;余小平;;牛磺酸對視網(wǎng)膜感光細(xì)胞光損傷及NFκB/Caspase-1表達(dá)的影響[A];首屆中國西部營養(yǎng)與健康、亞健康學(xué)術(shù)會議論文集[C];2005年

2 余海澄;Toru Nakazawa;Akihisa Matsubara;Toshio Hisatomi;Tara A．Young;Norman Michaud;Edward Connolly;Ali Hafezi—Moghadam;Evangelos S．Gragoudas;Joan W．Miller;;一氧化氮合成酶抑制劑L-NAME減少光動(dòng)力治療后視網(wǎng)膜感光細(xì)胞損傷的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二屆全國眼科學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前7條

1 任翔;硫氧還蛋白對糖尿病視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及相關(guān)機(jī)制研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2017年

2 許薇薇;人成體干細(xì)胞誘導(dǎo)分化成視網(wǎng)膜感光細(xì)胞樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2013年

3 解正高;促紅細(xì)胞生成素對脫離視網(wǎng)膜感光細(xì)胞的保護(hù)作用及機(jī)制[D];上海交通大學(xué);2008年

4 孔力;蘿卜硫素對基因變異Tubby小鼠視網(wǎng)膜感光細(xì)胞保護(hù)作用的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2006年

5 王克巖;MNU誘導(dǎo)大鼠視網(wǎng)膜感光細(xì)胞凋亡機(jī)制及米諾環(huán)素拮抗作用的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2008年

6 周亮;豬的誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞向視網(wǎng)膜感光細(xì)胞分化的體內(nèi)及體外研究[D];中南大學(xué);2011年

7 王樂;Whirlin與espin相互作用及其對actin的調(diào)控作用[D];吉林大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 劉旭;視網(wǎng)膜感光細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)與應(yīng)用研究[D];中國科學(xué)院研究生院（光電技術(shù)研究所）;2013年

2 馬鵬飛;補(bǔ)精益視片調(diào)控MNU誘導(dǎo)的大鼠感光細(xì)胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2012年

3 張躍紅;低氧預(yù)適應(yīng)對光損傷小鼠視網(wǎng)膜感光細(xì)胞保護(hù)作用的研究[D];青島大學(xué);2005年

，

本文編號：1737301