本文選題：RBBP7　切入點：VCP　出處：《南京醫(yī)科大學》2010年碩士論文

【摘要】：視網(wǎng)膜母細胞瘤結(jié)合蛋白7(RBBP7)是一種具有腫瘤抑制作用的核蛋白,有研究表明RBBP7蛋白可以通過干擾正常的細胞周期和增加細胞凋亡進而抑制腫瘤細胞的轉(zhuǎn)化。在本實驗室的前期工作中,運用二維電泳和質(zhì)譜鑒定等蛋白質(zhì)組學技術(shù)建立了小鼠MII期(第二次減數(shù)分裂中期)卵細胞的蛋白表達譜。RBBP7就是在該譜系中鑒定得到的蛋白之一。且在激活后其含量下降,表明RBBP7可能在卵母細胞的發(fā)育成熟中發(fā)揮重要的作用。但RBBP7蛋白在小鼠卵細胞和早期胚胎中的功能研究尚屬空白。 本研究首先用免疫組化、免疫熒光等方法研究RBBP7在小鼠卵巢組織中的定位。免疫組織化學的結(jié)果顯示RBBP7蛋白主要定位于各級卵母細胞的細胞核。免疫熒光結(jié)果顯示RBBP7定位于GV期卵母細胞的細胞核,GVBD期時則彌漫分布于胞漿,MI期定位于紡錘體上,AI期定位于紡錘體的中體上,MII期與紡錘體共定位。為研究RBBP7蛋白在小鼠卵母細胞發(fā)育成熟過程中的作用,應用顯微注射的方式將RBBP7 siRNA顯微注射至GVBD期卵母細胞胞漿中,活細胞工作站觀察卵母細胞的發(fā)育過程。結(jié)果發(fā)現(xiàn):RBBP7蛋白的減少最終不會導致第一極體排放數(shù)目的異常,但是在第一極體的排放過程中,RBBP7蛋白的減少會導致卵母細胞胞質(zhì)分裂的比率增高,同源染色體不分離或不均等分離的比率明顯增高,最終分裂溝回縮,產(chǎn)生一個雙核細胞,第一極體排放障礙。 基于以上實驗表型,接下來研究在小鼠卵母細胞中RBBP7影響第一次減數(shù)分裂過程中同源染色體分離的機制。應用小鼠卵巢全蛋白免疫共沉淀分析相互作用蛋白,結(jié)果顯示RBBP7可以與VCP相互作用。VCP的作用是調(diào)節(jié)有絲分裂后期紡錘體的解聚。RBBP7特異定位于第一次減數(shù)分裂后期紡錘體的中體,因此推測RBBP7可能作為一種紡錘體組裝因子,通過與VCP的相互作用,進而干擾第一次減數(shù)分裂后期紡錘體的解聚,從而影響同源染色體的精確分離,最終產(chǎn)生一個雙核細胞。
[Abstract]:Retinoblastoma binding protein 7 (RBBP7) is a kind of nuclear protein with tumor inhibitory effect. It has been shown that RBBP7 protein can inhibit the transformation of tumor cells by interfering with normal cell cycle and increasing apoptosis.In the previous work of our laboratory, proteomic techniques such as two-dimensional electrophoresis and mass spectrometry were used to establish the protein expression profile of mouse MII stage (second meiotic metaphase). RBBP7 was one of the proteins identified in this pedigree.And its content decreased after activation, suggesting that RBBP7 may play an important role in the development and maturation of oocytes.But the function of RBBP7 protein in mouse oocyte and early embryo is still blank.In this study, the localization of RBBP7 in mouse ovary was studied by immunohistochemistry and immunofluorescence.Immunohistochemical results showed that the RBBP7 protein was mainly located in the nuclei of oocytes at all levels.The results of immunofluorescence showed that RBBP7 was located in the nucleus of GV oocytes in the GV phase, and distributed in the cytoplasmic MI phase, located in the upper midbody MII phase of the spindles and co-located with the spindles in the AI phase of the spindles.In order to study the role of RBBP7 protein in the development and maturation of mouse oocytes, RBBP7 siRNA was microinjected into the cytoplasm of GVBD oocytes by microinjection, and the development of oocytes was observed by living cell workstation.The results showed that the decrease of the 1 / RBBP7 protein did not eventually lead to abnormal emission of the first polar body, but the decrease of the RBBP7 protein during the discharge of the first polar body resulted in an increase in the rate of cytokinesis of the oocytes.The rate of homologous chromosome segregation or unequal segregation was significantly increased, and eventually the cleavage groove retracted, resulting in a binuclear cell, the first polar body emission barrier.Based on the above experimental phenotypes, the mechanism of homologous chromosome segregation in mouse oocytes affected by RBBP7 during the first meiosis was studied.The interaction proteins were analyzed by immunoprecipitation of mouse ovary whole protein. The results showed that RBBP7 could interact with VCP. The effect of VCP was to regulate the depolymerization of spindles in late mitotic stage. RBBP7 was specifically located in the midbody of the spindle in the late stage of the first meiosis.It is speculated that RBBP7, as a spindle assembly factor, may interfere with the depolymerization of the spindle in the later stage of meiosis by interacting with VCP, thus affecting the precise separation of homologous chromosomes and eventually producing a binuclear cell.
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R739.7

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本文編號：1726949