本文選題：硫醇轉(zhuǎn)移酶　切入點(diǎn)：白內(nèi)障　出處：《第四軍醫(yī)大學(xué)》2011年博士論文

【摘要】：第一部分：硫醇轉(zhuǎn)移酶基因敲除小鼠模型的建立及其白內(nèi)障形成機(jī)制的研究 目的： 硫醇轉(zhuǎn)移酶(Thioltransferase, TTase)是維持晶狀體中氧化還原狀態(tài)的重要一員。本研究通過建立TTase基因敲除小鼠的模型，觀察晶狀體的形態(tài)和生化方面隨年齡的改變，來探討TTase在晶狀體氧化還原系統(tǒng)中的重要作用及參與年齡相關(guān)性白內(nèi)障形成的主要機(jī)制。 方法： 建立TTase基因敲除小鼠模型，裂隙燈觀察比較1-20月齡TTase基因敲除型和野生型小鼠的白內(nèi)障隨年齡的發(fā)生情況。比較晶狀體中谷胱甘肽（Glutathione,GSH）的含量。采用Dionex分析儀測定晶狀體中蛋白質(zhì)谷胱甘肽二硫化物(Protein-GSH mixed disulfides, PSSG)和蛋白質(zhì)半胱氨酸二硫化物(Protein-S-S-cysteine, PSSC)的含量。Western blot使用抗-GSH抗體觀察兩種基因型小鼠的晶狀體及視網(wǎng)膜中PSSG的表達(dá)隨年齡的變化。免疫共沉淀法鑒定形成PSSG的蛋白質(zhì)。觀察純化的重組人晶狀體TTase(Recombinant humanlens TTase, RHLT)對(duì)PSSG的脫硫醇作用。 結(jié)果： 裂隙燈檢查結(jié)果表明，野生組和TTase基因敲除組中白內(nèi)障的發(fā)生均隨著年齡增加而增加，且混濁部位主要表現(xiàn)為核性�；蚯贸M小鼠晶狀體最早從4月齡開始發(fā)生混濁，而野生組最早從8個(gè)月開始出現(xiàn)混濁。20個(gè)月后，兩組晶狀體均發(fā)生明顯的混濁。GSH的含量隨著年齡的增加而降低，20個(gè)月后均出現(xiàn)明顯降低，而基因敲除組與野生組相比沒有顯著差異。 PSSG的含量隨年齡增加而緩慢增加，而12個(gè)月后基因敲除組比同年齡野生組含量較高；PSSC含量兩組趨勢相同，2-12月含量較低，20個(gè)月明顯增高。Westernblot表明，晶狀體中PSSG的表達(dá)也隨著小鼠年齡的增加而緩慢升高。不同年齡組兩種基因型小鼠比較，9月開始基因敲除型小鼠中PSSG的表達(dá)高于野生型。16月時(shí)兩組PSSG的表達(dá)未見顯著差異。視網(wǎng)膜中PSSG的表達(dá)也表現(xiàn)同樣趨勢。免疫共沉淀反應(yīng)證實(shí)了形成的PSSG的蛋白質(zhì)主要是肌動(dòng)蛋白（Actin）和三磷酸甘油醛脫氫酶（Glyceraldehydes3-phosphate dehydrogenase,GAPDH）。這種聚積的二硫化物可以被GSH還原，且與純化的RHLT反應(yīng)后更有效。 結(jié)論： 結(jié)果表明TTase基因敲除可以加速小鼠年齡相關(guān)性白內(nèi)障的發(fā)生。晶狀體中PSSG的聚積隨年齡的增加而增加，且與晶狀體的混濁程度相關(guān)。證實(shí)了TTase的在保持晶狀體透明的重要作用。 第二部分：紫外線B誘導(dǎo)小鼠白內(nèi)障的模型及相關(guān)晶狀體形態(tài)和生化改變的研究 目的： 本研究通過建立紫外線B(UVB)誘導(dǎo)C57BL/6小鼠白內(nèi)障的模型，，觀察不同年齡小鼠晶狀體的形態(tài)和生化方面經(jīng)紫外線照射后的改變，來探討晶狀體抗氧化系統(tǒng)在紫外輻射引起的氧化損傷中的重要作用。 方法： 1月和16月C57BL/6小鼠給予UVB(302nm,14.4KJ/m2)15分鐘照射，48小時(shí)后裂隙燈下觀察小鼠晶狀體變化及收集晶狀體上皮（含囊膜）。測定晶狀體中谷胱甘肽（Glutathione, GSH）的含量及三磷酸甘油醛脫氫酶（Glyceraldehydes3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）和硫醇轉(zhuǎn)移酶(Thioltransferase, TTase)的活性。Western blot觀察兩組小鼠的晶狀體中蛋白質(zhì)和GSH形成的二硫化物(Protein-GSH mixed disulfides, PSSG),TTase和硫氧還蛋白(Thioredoxin, Trx)表達(dá)的變化。 結(jié)果： 1月和16月組均出現(xiàn)明顯晶狀體混濁，混濁部位主要表現(xiàn)為前囊膜下點(diǎn)狀混濁。晶狀體上皮中GSH的含量照射后均下降。與同年齡對(duì)照組相比，1月照射組GSH下降了10％，16月照射組下降了25％。GAPDH活性也呈現(xiàn)同樣趨勢，16月照射組下降了29％，而1月照射組下降了26％。晶狀體中TTase活性1月照射組與對(duì)照組相比活性增加了16％。Western blot顯示，上皮中PSSG的表達(dá)隨年齡增加而增加，且經(jīng)紫外線照射后表達(dá)明顯增加，16月組中較顯著。同時(shí)晶狀體中TTase和Trx抗氧化酶的表達(dá)出現(xiàn)增高。 結(jié)論： 結(jié)果表明晶狀體隨年齡增加對(duì)紫外線損傷的抵抗能力下降。同時(shí)TTase和Trx等抗氧化酶的表達(dá)上調(diào)也說明了他們可能在紫外線引起的氧化損傷中發(fā)揮重要作用。
[Abstract]:The first part: the establishment of a mouse model of thiol transferase gene knockout and the study of the mechanism of cataract formation
Objective:
Thioltransferase (Thioltransferase, TTase) is an important member in maintaining the redox state of the lens. In this study, through the establishment of TTase gene knockout mice model, observe the morphological and biochemical aspects of lens change with age, to explore the role of TTase in oxidative reduction an important role in the system and the main mechanism involved in the formation of age-related cataract.
Method錛

本文編號(hào)：1725632